Composiciones farmacéuticas para usar en el tratamiento de la infección por Streptococcus Pyogenes.

Una composición farmacéutica que comprende:

(a) un polipéptido seleccionado de (i) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos almenos un 95% idéntica con la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2;

y

(ii) un polipéptidoque comprende un fragmento polipeptídico inmunógeno constituido por al menos aminoácidoscontiguos de la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2,

siendo el polipéptido capaz de aumentar los anticuerpos que se unen específicamente a una proteínaconstituida por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2 y siendo el polipéptido capaz deprovocar una respuesta inmunitaria contra Streptococcus pyogenes, y

(b) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable,

siendo la composición farmacéutica para usar en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la infección porStreptococcus pyogenes.

Composiciones farmacéuticas para usar en el tratamiento de la infección por Streptococcus Pyogenes Campo de la invención La presente invención se refiere a los polipéptidos SHB-GAS-102, SHB-GAS-103 y SHB-GAS-104 de S. pyogenes (Streptococcus del grupo A) y a los correspondientes fragmentos de ADN, que pueden usarse para prevenir, diagnosticar y/o tratar infecciones por S. pyogenes.

Antecedentes de la invención Los estreptococos son bacterias Gram (+) que se diferencian por los antígenos carbohidratos específicos de grupos A a O que se encuentran en la superficie celular. Los aislados de S. pyogenes se distinguen además por los antígenos de proteína M de tipo específico. Las proteínas M son factores de virulencia importantes que son muy variables tanto en pesos moleculares como en secuencias. De hecho, se han identificado más de 100 tipos de proteína M basándose en las diferencias antigénicas.

El S. pyogenes es responsable de muchos tipos de infecciones, incluyendo faringitis, erisipela e impétigo, escarlatina, y enfermedades invasivas tales como bacteriemia y fascitis necrotizante. En los últimos años se ha documentado en muchos países un resurgimiento de la enfermedad invasiva, incluyendo en los de América del Norte y Europa. Aunque el organismo es sensible a antibióticos, la alta tasa de ataques y la rápida aparición de septicemias dan como resultado una alta morbosidad y mortalidad.

Para desarrollar una vacuna que proteja a los huéspedes frente a la infección por S. pyogenes, los esfuerzos se han centrado en factores de virulencia tales como las proteínas M de tipo específico. Sin embargo, se ha encontrado que la parte carboxi terminal de las proteínas M induce anticuerpos de reactividad cruzada que reaccionan con miocardio, tropomiosina, miosina y vimentina humanos, lo cual puede estar implicado en enfermedades autoinmunitarias. Otros han usado técnicas recombinantes para producir proteínas híbridas complejas que contengan péptidos aminoterminales de las proteínas M de diferentes serotipos. Sin embargo, sería muy complejo producir y estandarizar una vacuna segura que contenga serotipos de S. pyogenes.

Además de los antígenos específicos de serotipo, otras proteínas de S. pyogenes han generado interés como potenciales candidatos para vacunas. Se ha mostrado que la peptidasa C5a, que es expresada por al menos 40 serotipos de S. pyogenes es inmunógena en ratones, pero su capacidad para reducir el nivel de colonización nasofaríngea estaba limitada. Otros investigadores también se han centrado en las exotoxinas pirógenas estreptocócicas que parece que tienen una función importante en la patogénesis de la infección. La inmunización con estas proteínas prevenía los síntomas letales del choque tóxico, pero no prevenía la colonización.

En el documento WO 2002/034771 se describen ácidos nucleicos y proteínas de estreptococos de los grupos A y B.

Por tanto, existe una necesidad no satisfecha de polipéptidos de S. pyogenes que se puedan usar como componentes de vacuna para la profilaxis y/o terapia de la infección por S. pyogenes.

Sumario de la invención La presente invención también proporciona una composición farmacéutica, usos de la misma y procedimientos como se define en las reivindicaciones.

De acuerdo con un aspecto, la presente divulgación proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene una identidad de al menos 70% con un segundo polipéptido que comprende la SEC ID Nº: 2 (Fig. 2) , 4 (Fig. 4) , 6 (Fig. 6) , 22 (Fig. 8) , 24 (Fig. 10) , 26 (Fig. 12) , 28 (Fig. 14) , 30 (Fig. 16) , 32 (Fig. 18) , 34 (Fig. 20) , 36 (Fig. 22) , 38 (Fig. 24) , 40 (Fig. 26) , 42 (Fig. 28) , 44 (Fig. 30) o fragmentos o análogos del mismo.

De acuerdo con un aspecto, la presente divulgación se refiere a polipéptidos que comprenden la SEC ID Nº: 2, 4, 6, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 o fragmentos o análogos del mismo.

En otros aspectos se dan a conocer polipéptidos codificados por polinucleótidos de la divulgación, composiciones farmacéuticas, vectores que comprenden polinucleótidos de la divulgación unidos operativamente a una región de control de la expresión, así como células huésped transfectadas con dichos vectores y procedimientos para producir polipéptidos que comprenden cultivar dichas células huésped en condiciones adecuadas para la expresión.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-102 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID Nº: 1. La Figura 2 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido SHB-GAS-102 del serotipo M1 de la cepa 2

de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID Nº: 2.

La Figura 3 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-103 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID Nº: 3. La porción subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder.

La Figura 4 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido SHB-GAS-103 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID Nº: 4. La secuencia subrayada representa los 27 residuos de aminoácidos del péptido líder.

La Figura 5 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-104 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID Nº: 5. La secuencia subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder.

La Figura 6 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido SHB-GAS-104 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID Nº: 6. La secuencia subrayada representa los 19 residuos de aminoácidos del péptido líder.

La Figura 7 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-102 del serotipo M13 de la cepa de S. pyogenes MGAS315; SEC ID Nº: 21.

La Figura 8 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-102 del serotipo M3 de la cepa de S. pyogenes MGAS315; SEC ID Nº: 22.

La Figura 9 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-102 del serotipo M3 de la cepa de S. pyogenes SSI-1; SEC ID Nº: 23.

La Figura 10 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-102 del serotipo M3 de la cepa de S. pyogenes SSI-1; SEC ID Nº: 24.

La Figura 11 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-102 del serotipo M5 de la cepa de S. pyogenes Manfredo; SEC ID Nº: 25.

La Figura 12 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-102 del serotipo M5 de la cepa de S. pyogenes Manfredo; SEC ID Nº: 26.

La Figura 13 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-102 del serotipo M18 de la cepa de S. pyogenes MGAS8232; SEC ID Nº: 27.

La Figura 14 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-102 del serotipo M18 de la cepa de S. pyogenes MGAS8232; SEC ID Nº: 28.

La Figura 15 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-103 del serotipo M13 de la cepa de S. pyogenes MGAS315; SEC ID Nº: 29. La porción subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder.

La Figura 16 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-103 del serotipo M3 de la cepa de S. pyogenes MGAS315; SEC ID Nº: 30. La secuencia subrayada representa los 27 residuos de aminoácidos del péptido líder.

La Figura 17 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-103 del serotipo M3 de la cepa de S. pyogenes SSI-1; SEC ID Nº: 31. La porción subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder.

La Figura 18 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-103 del serotipo M3 de la cepa de S. pyogenes SSI-1; SEC ID Nº: 32. La secuencia subrayada representa los 27 residuos de aminoácidos del péptido líder.

La Figura 19 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-103 del serotipo M5 de la cepa de S. pyogenes Manfredo; SEC ID Nº: 33. La porción subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder.

La Figura 20 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-103 del serotipo M5 de la cepa de S. pyogenes Manfredo; SEC ID Nº: 34. La secuencia subrayada representa los 27 residuos de aminoácidos del péptido líder.

La Figura 21 representa la secuencia de ADN del gen SHB-GAS-103 del serotipo M18 de la cepa de S. pyogenes MGAS8232; SEC ID Nº: 35. La porción subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder.

La Figura 22 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína SHB-GAS-103 del serotipo M18 de la cepa de S. pyogenes MGAS8232; SEC ID Nº: 36. La secuencia subrayada representa los 27 residuos de aminoácidos del péptido líder.

La Figura 23 representa la secuencia de ADN del... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende:

(a) un polipéptido seleccionado de (i) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 95% idéntica con la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2; y (ii) un polipéptido que comprende un fragmento polipeptídico inmunógeno constituido por al menos 10 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2,

siendo el polipéptido capaz de aumentar los anticuerpos que se unen específicamente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2 y siendo el polipéptido capaz de provocar una respuesta inmunitaria contra Streptococcus pyogenes, y

(b) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable,

siendo la composición farmacéutica para usar en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la infección por Streptococcus pyogenes.

2. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2.

3. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, en la que el polipéptido carece del residuo de metionina en el extremo N.

4. La composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, comprendiendo la composición además un adyuvante farmacéuticamente aceptable.

5. La composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, en la que el

polipéptido se ha producido de forma recombinante mediante un procedimiento que comprende cultivar una célula huésped transfectada con un vector que comprende un polinucleótido que codifica el polipéptido, estando el polinucleótido unido operativamente a una región de control de la expresión.

6. Una composición farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente a un polipéptido constituido porconstituido por la secuencia expuesta en la Figura 2, siendo el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, capaz de proteger a un huésped de una infección por Streptococcus pyogenes; y (b) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable para usar en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la infección por Streptococcus pyogenes.

7. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o anticuerpo policlonal.

8. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo murino, de rata o humano.

9. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, es recombinante.

10. Una composición farmacéutica que comprende (a) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y (b)

un polipéptido quimérico que comprende dos o más fragmentos del polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2, en el que los dos o más fragmentos constan cada uno de ellos de al menos 10 aminoácidos contiguos de la Figura 2 y en el que los dos o más fragmentos están unidos formando un polipéptido quimérico, siendo el polipéptido quimérico capaz de aumentar los anticuerpos que se unen específicamente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2, y siendo el polipéptido quimérico capaz de producir una respuesta inmunitaria contra Streptococcus pyogenes, para usar en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la infección por Streptococcus pyogenes.

11. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende además un adyuvante farmacéuticamente aceptable.

12. Uso de la composición farmacéutica seleccionada del grupo constituido por:

(a) una composición farmacéutica que comprende:

(i) un polipéptido seleccionado de (A) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 95% idéntica con la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2;

(B) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2; y (C) un

polipéptido que comprende un fragmento polipeptídico inmunógeno constituido por al menos 10 50 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2,

siendo el polipéptido es capaz de aumentar los anticuerpos que se unen específicamente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2 y siendo el polipéptido capaz de provocar una respuesta inmunitaria contra Streptococcus pyogenes, y

(ii) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable;

(b) una composición farmacéutica que comprende (i) un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del

mismo, que se une específicamente a un polipéptido constituido por la secuencia expuesta en la Figura 2, siendo el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, capaz de proteger a un huésped de una infección por Streptococcus pyogenes; y (ii) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; y

(c) una composición farmacéutica que comprende (i) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y (ii) un polipéptido quimérico que comprende dos o más fragmentos del polipéptido constituido 10 por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2, en el que los dos o más fragmentos constan cada uno de ellos de al menos 10 aminoácidos contiguos de la Figura 2 y en el que los dos o más fragmentos están unidos formando un polipéptido quimérico, siendo el polipéptido quimérico capaz de aumentar los anticuerpos que se unen específicamente a una proteína constituida por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2, y siendo el polipéptido quimérico capaz de producir una respuesta inmunitaria contra Streptococcus pyogenes.

en la fabricación de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección por Streptococcus pyogenes.

13. Un procedimiento para el diagnóstico de infección por Streptococcus pyogenes en un huésped propenso a sufrir una infección por Streptococcus pyogenes, que comprende:

(a) incubar una muestra biológica obtenida previamente del huésped con un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, reactivo con un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2, para formar una mezcla; y

(b) detectar anticuerpo unido específicamente o fragmento de unión a antígeno unido en la mezcla que indique la presencia de S. pyogenes en el huésped.

14. Un procedimiento para detectar un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de S. pyogenes, comprendiendo el polipéptido la secuencia de aminoácidos expuesta en la Figura 2, en una muestra biológica que contiene o se sospecha que contiene dicho anticuerpo, que comprende:

a) incubar la muestra biológica con el polipéptido, para formar una mezcla; y

b) detectar el polipéptido unido específicamente en la mezcla, lo que indica la presencia del anticuerpo en 30 la muestra.

Figura 20

Figura 21

Figura 22

(SEC ID Nº: 36) Figura 23

Figura 24

Figura 25

Figura 26

(SEC ID Nº: 40)

Figura 33