Agentes de ácido nucleico para la regulación negativa de H19, y métodos de uso del mismo.

Un siRNA que contiene una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1, 2, 3 y 4.

Agentes de ácido nucleico para la regulación negativa de H19, y métodos de uso del mismo CAMPO .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La presente invención entra dentro del campo de los ácidos nucleicos encargados de la disminución de la expresión del gen H19 y su uso en el tratamiento del cáncer.

El gen H19 fue el primer gen humano impreso no codificante de proteínas aislado que presentó expresión del alelo materno únicamente. También se trata de un gen impreso en los ratones. El H19 se mapeó en el brazo corto del cromosoma humano 11, banda 15.5, homóloga de una región del cromosoma murino 7. Pertenece a un grupo génico que, con toda probabilidad, no cofidica un producto proteico. El gen H19 se expresa abundantemente durante la embriogénesis, pero desaparece de la mayor parte de tejidos tras el nacimiento. Sin embargo, diversos estudios realizados en diferentes tipos de tumores han demostrado una nueva expresión o sobre-expresión del gen H19 en comparación con tejidos sanos. Además, se observó una expresión desmesurada en el patrón alélico en algunos casos de cánceres de diferentes etiologías y linaje genético. A pesar de que el H19 muestra una expresión monoalélica en la mayor parte de tejidos durante el desarrollo, a excepción de las células germinales en ciertas etapas del proceso de maduración y de los trofoblastos extravellosos, se ha observado la expresión bialélica del gen (conocida como "relajación del sellado" o "pérdida del sellado", LOI en sus siglas en inglés) en diferentes tipos de cáncer, entre ellos, el carcinoma hepatocelular, neoplasmas de hígado de albúmina SV40 en ratas transgénicas para el T-antígeno, adenocarcinoma pulmonar, carcinoma de esófago y de ovarios, rabdomiosarcoma, carcinoma cervical, de vejiga y de las células escamosas, cáncer colorrectar, de útero y tumores de las células germinales de testículo. Hoy en día, se ha encontrado expresión desregulada del gen H19 en cerca de 30 tipos de cáncer que fue comparada con tejidos sanos, tanto con presencia de LOI (pérdida del sellado en sus siglas en inglés) , como sin. Consultar el trabajo de Matouk et al (Matouk et al, 2005, Gene Ther Mol Biol) para más referencias recientes.

Se ha demostrado, igualmente, que la sobre-expresión del H19 de origen ectópico induce a una mayor proliferación de las células epiteliales mamarias. El estudio se realizó en agar con ratones con diferentes inmunodeficiencias severas combinadas (SCID en sus siglas en inglés) (Lottin et al, 2002, Oncogene 21, 16251631) . En tumores formados por la inyección de células de una línea celular derivada de un coriocarcinoma (JEG-3) y de una línea celular de carcinoma de vejiga (T24P) , el nivel de H19 es muy alto en comparación con el nivel de H19 antes de la inyección (Rachmilewitz et al, 1995, Oncogene, 863-870) .

También algunos carcinógenos tienen la capacidad de aumentar los niveles de expresión del gen H19. Se detectó un aumento significativo de los niveles de H19 RNA en el epitelio del tracto respiratorio de fumadores sin LOI (Kaplan et al, 2003, Cancer Res 63, 1475-1482) . El BBN (un conocido carcinógeno de la vejiga) también tiene la capacidad de inducir la expresión del gen H19, como se demostró en ratas con cáncer de vejiga (Ariel et al, 2004, Mol Carcinog 41, 69-76) . De la misma forma, la dietilnitrosamina (un conocido carcinógeno del hígado) fue utilizada en ratones con carcinoma hepatocelular para demostrar el aumento de niveles de H19 (Graveel et al, 2001, Oncogene 20, 2704-2712) . Todos estos estudios, además de otros no mencionados, contradicen el supuesto inicial de que el gen H19 es un supresor de tumores.

Comparando los patrones de expresión génica en dos poblaciones celulares homogéneas cuya única diferencia es la presencia o ausencia del gen H19 RNA, se ha identificado varios descendientes efectores del H19 RNA, entre ellos varios grupos de genes de los que previamente se creía que desempeñaban papeles fundamentales en algunos aspectos del proceso tumorigénico. La presencia del gen H19 RNA podría aumentar la capacidad invasiva, migratoria y angiogénica de la célula por medio de una mayor concentración de los genes que operan en dichas vías, y contribuir de esta manera en las etapas iniciales, al menos, de la cascada metastásica. Otros estudios apuntan a un posible papel del H19 en potenciar la progresión del cáncer y la metástasis del tumor, ya que es un gen sensible al HGF/SF (factor de crecimiento y distribución de hepatocitos) .

La expresión específica del gen H19 en células cancerosas ha llevado a su utilización en aplicaciones clínicas para la diagnosis del cáncer.

Así, la patente estadounidense número 5.955.273 de los presentes inventores expone el uso del gen H19 como marcador específico de tumores.

La publicación PCT número WO 9524503 demuestra el proceso de detección de malignidades y su clasificación con mediciones del gen H19 por medio de la hibridación in situ, lo cual es de gran utilidad a la hora de detectar la presencia o ausencia de malignidades en tumores de Wilms infantiles.

La publicación PCT número WO 04/031359 presenta la disminución de la presencia del gen H19 como forma de tratamiento de enfermedades asociadas a la angiogénesis, como el cáncer. Sin embargo, la disminución de los niveles de H19 no mostró una reducción en el tamaño o el volumen de los tumores, como tampoco se pudo demostrar la especificidad y la eficacia de agentes siRNA con capacidad para disminuir el nivel de H19. Asimismo, la publicación PCT número WO 04/031359 no propone un método de utilización de antígenos H19 como parte de la terapia combinada para el tratamiento del cáncer.

Barteaux et al. (J Biol Chem 2005, p. 1-25) propone moléculas siRNA con objetivo de H19, que consiguen frenar in vitro el crecimiento de células de cáncer mamario.

La publicación PCT número WO 98/34613 presenta compuestos farmatológicos con presencia de quinazolinona para el tratamiento de malignidades.

La publicación PCT número WO 00/71707 muestra el uso de oligonucleótidos antisentido enfocados al gen D11/H-19 en terapias para cánceres nasofaríngeos y de cérvix.

De forma que existe una necesidad ampliamente reconocida de métodos y composiciones que tengan la capacidad de disminuir los niveles de H19 para el tratamiento del cáncer, lo cual constituiría un gran avance.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un oligonucleótido aislado seleccionado de la patente EP 1 915 448 B1 perteneciente al grupo que consisten en el número de idenficación de secuencia: 1, 2, 3 y 4.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se presenta un compuesto farmacológico que contiene un componente portador farmacológicamente aceptable, y el principio activo es un mínimo de un oligonucleótico aislado seleccionado del grupo que consiste en el número de idenficación de secuencia: 1, 2, 3 y 4.

De acuerdo con un tercer aspecto de la presente invención, se presenta el uso de un oligonucleótico aislado seleccionado del grupo que consiste en el número de idenficación de secuencia: 1, 2, 3 y 4 para la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

De acuerdo con un cuarto aspecto de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento del cáncer que consiste en:

a) la administración o expresión de un agente capaz de disminuir el nivel y/o la actividad del H19 mRNA en un sujeto que necesite una cantidad con efecto terapéutico de dicho compuesto, y

b) proporcionar al sujeto una terapia para el cáncer, que constituirá su tratamiento.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de un agente con capacidad para disminuir los niveles y/o actividad del H19 mRNA para la preparación de un medicamento para tratar el cáncer, en combinación con una terapia para el cáncer.

De acuerdo con otro aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método de tratamiento del cáncer que consiste en la administración o expresión de al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en el número de idenficación de secuencia 1, 2, 3 y 4 en un sujeto que necesite una cantidad con efecto terapéutico, como tratamiento para el cáncer.

De acuerdo con un último aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un artículo de manufactura que consiste en un agente con capacidad para disminuir el nivel y/o la actividad del H19 mRNA y un agente anti cáncer adicional que ha probado su efectividad como tratamiento para el cáncer.

De acuerdo con otras características de las formas preferidas... [Seguir leyendo]

1) Un siRNA que contiene una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1, 2, 3 y 4.

2) Un compuesto farmacológico formado por un elemento portador farmacológicamente aceptable y, como principio activo, al menos una secuencia siRNA cuya secuencia se selecciona del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1, 2, 3 y 4.

3) La utilización de un siRNA compuesto de una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1, 2, 3 y 4 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

4) Un siRNA que contiene una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1, 2, 3 y 4 para el tratamiento del cáncer.

5) Utilización de un aganete con capacidad para disminuir el nivel y/o la actividad de H19 mRNA para la elaboración de un medicamento para el tratamieno del cáncer en combinación con otra terapia para el cáncer en la que el agente es un siRNA que contiene una secuencia de ácido nucleico seleccionado del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1 a 4.

6) Un agente con capacidad para disminuir el nivel y/o la actividad del H19 mRNA para el tratamiento del cáncer en combinación con otra terapia para el cáncer en la que el agente es un siRNA que contiene una secuencia de ácido nucleico del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1 a 4.

7) El siRNA de las reivindicaciones 4 o 6, llamado siRNA o agente, debe administrase in situ.

8) La utilización de siRNA o un agente de cualquiera de las reivindicaciones 3, 4, 5 o 6 cuando el cáncer se selecciona del grupo consistente en tumores sólidos pediátricos, tumores de Wilms, hepatoblastomas, rabdomiosarcoma embrionario, tumores de las células germinales y tumores trofoblásticos, tumores de las células germinales del testículo, teratoma inmaduro de ovarios, tumores sacrococigeales, coriocarcinomas, tumores trofoblásticos del lecho placentario, tumores epiteliales adultos, carcinoma de vejiga, carcinoma hepatocelular, carcinoma de ovarios, carcinoma cervical, carcinoma pulmonar, carcinoma de mama, carcinoma de las células escamosas en cabeza y cuello, carcinoma de esófago, tumores neurogénicos, astrocitomas, ganglioblastomas y neuroblastomas.

9) La utilización de siRNA o el agente de la reivindicación 8 cuando el cáncer es un carcinoma de vejiga o un carcinoma hepatocelular.

10) Un construido de ácido nucléico que expresa siRNA cuya secuencia se selecciona del grupo consistente en el número de identificación de secuencia: 1 a 4.

11) Uso de un construido de ácido nucleico de la reivindicación 10 para la elaboración de un fármaco para el tratamiento del cáncer, en el que dicho construido se expresa en células llamadas siRNA.

12) El construido de ácido nucleico de la reivindicación 10 para su uso en el tratamiento para el cáncer, en el que dicho construido se expresa en células llamadas siRNA.