Un kit para diagnosticar un neoplasma por fenotipo que comprende al menos dos virus oncolíticos,

en el que cadavirus oncolítico se replica selectivamente en las células neoplásicas que tienen un fenotipo seleccionado del grupoque consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 y deficiencia de Rb y en el quecada uno de los virus oncolíticos se replica selectivamente en células neoplásicas que tienen un fenotipo diferenteseleccionado del grupo que consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 ydeficiencia de Rb.

Virus oncolíticos como agentes para la caracterización fenotípica de neoplasmas Esta invención se refiere a kits para detectar la causa subyacente de tumores, particularmente al uso de reovirus en el diagnóstico de tumores activados por ras. Además, también pueden usarse otros virus oncolíticos con diferentes selectividades en el diagnóstico de tipos particulares de tumores.

REFERENCIAS

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C.J.A. Ring describe el uso de virus citolíticos para tratar el cáncer.

El oncogén ras es el responsable de un gran número de tumores. Las mutaciones activadoras del gen ras en sí mismo aparecen en aproximadamente el 30% de todos los tumores humanos (Bos, J.L., 1989) , principalmente en los carcinomas pancreático (90%) , colorrectal esporádico (50%) y de pulmón (40%) , así como en la leucemia mieloide (30%) . Además de las mutaciones del gen ras en sí mismo, la activación de los factores aguas arriba o abajo de ras en la ruta ras también están asociadas con tumores. Por ejemplo, la sobreexpresión de HER2/Neu/ErbB2 o del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF) es común en el cáncer de mama (25-30%) y la sobreexpresión del receptor del factor decrecimiento derivado de plaquetas (PDGF) o del receptor de EGF es frecuente en gliomas y glioblastomas (40-50%) . Se sabe que tanto el receptor de EGF como el receptor de PDGF activan ras después de unirse a su respectivo ligando y v-erbB codifica un receptor activado constitutivamente que carece del dominio extracelular. Conjuntamente, se cree que la mutación directa del oncogén ras o un elemento aguas arriba en la ruta ras se produce en aproximadamente dos tercios de todos los tumores.

Dado el papel significativo de la ruta ras en la tumorogénesis, es deseable poder determinar si un tumor está asociado con la activación de la ruta ras de manera que pueda desarrollarse un régimen de tratamiento personalizado específicamente. Antes de la presente invención, sin embargo, no ha habido un método simple y sensible para diagnosticar la asociación de un cáncer con la ruta ras. Aunque las mutaciones en el gen estructural ras pueden detectarse con una alta sensibilidad por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , hay muchos otros factores en la ruta ras que pueden ser la causa de la alta actividad de ras, tales como mutaciones en las secuencias que flanquean el gen ras que dan lugar a un nivel de expresión anormalmente alto del producto génico ras, mutaciones en los genes estructurales de un factor aguas arriba o abajo de ras en la ruta ras o mutaciones reguladoras que afectan los niveles de expresión de estos factores aguas arriba o abajo. Por lo tanto, la PCR para el gen ras no identifica de manera precisa todos los cánceres asociados con la activación de la ruta ras. Todavía existe la necesidad de un método simple y preciso para diagnosticar los tumores activados por ras.

Resumen de la invención

La invención es su forma más amplia se define por la reivindicación independiente 1:

Un kit para diagnosticar un neoplasma por fenotipo que comprende al menos dos virus oncolíticos, en el que cada virus oncolítico se replica selectivamente en las células neoplásicas que tienen un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 y deficiencia de Rb y en el que cada uno de los virus oncolíticos se replica selectivamente en células neoplásicas que tienen un fenotipo diferente seleccionado del grupo que consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 y deficiencia de Rb.

Las realizaciones preferidas se definen en las reivindicaciones dependientes 2-15.

Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona un kit para diagnosticar neoplasmas que tienen fenotipos particulares, particularmente neoplasmas mediados por una actividad anormalmente alta de la ruta ras, usando reovirus u otros virus oncolíticos similares. El reovirus no se replica en las células normales. Sin embargo, el reovirus se replica selectivamente en las células con una ruta ras activada, lo que da lugar a la muerte de estas células. La ruta ras en estas células puede estar activada debido a mutaciones del gen estructural ras o anormalidades de cualquier otro factor en la ruta ras que da lugar a la activación de la ruta. Por lo tanto, una célula que se vuelve neoplásica debido, al menos en parte, a actividades elevadas en la ruta ras puede diagnosticarse por su susceptibilidad a la replicación de reovirus.

De acuerdo con esto, la presente invención proporciona un kit para diagnosticar un neoplasma por fenotipo que comprende al menos dos virus oncolíticos, en el que cada virus oncolítico se replica selectivamente en las células neoplásicas que tienen un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 y deficiencia de Rb y en el que cada uno de los virus oncolíticos se replica selectivamente en las células neoplásicas que tienen un fenotipo diferente, en el que los virus oncolíticos se seleccionan del grupo que consiste en reovirus, virus de la estomatitis vesicular (VSV) , ONYX-015, Delta24, adenovirus mutados en la región VA1, virus de vaccinia mutados en la región K3L y/o E3L, virus parapoxvirus orf mutados en el gen OV20.0L, virus de influenza mutados en el gen NS-1 y virus del herpes mutados en el gen Y134.5.

En la presente invención puede usarse cualquier reovirus capaz de replicarse en células activadas por ras, por ejemplo, un reovirus de mamífero o un reovirus aviar. El reovirus de mamífero es preferiblemente un reovirus de serotipo 3 y más preferiblemente un reovirus de la cepa Dearing.

El neoplasma puede seleccionarse del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer renal, cáncer adrenal, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer hematopoyético y cáncer del sistema nervioso central y periférico.... [Seguir leyendo]

1. Un kit para diagnosticar un neoplasma por fenotipo que comprende al menos dos virus oncolíticos, en el que cada virus oncolítico se replica selectivamente en las células neoplásicas que tienen un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 y deficiencia de Rb y en el que cada uno de los virus oncolíticos se replica selectivamente en células neoplásicas que tienen un fenotipo diferente seleccionado del grupo que consiste en activación de la ruta ras, resistencia a interferón, deficiencia de p53 y deficiencia de Rb.

2. El kit de la reivindicación 1, en el que los virus oncolíticos se seleccionan del grupo que consiste en reovirus, virus de la estomatitis vesicular (VSV) , ONYX-015, Delta24, adenovirus mutados en la región VA1, virus de vaccinia mutados en la región K3L y/o E3L, virus parapoxvirus orf mutados en el gen OV20.0L, virus de influenza mutados en el gen NS-1 y virus del herpes mutados en el gen Y134.5.

3. El kit de la reivindicación 1, en el que los virus oncolíticos se seleccionan del grupo que consiste en reovirus, VSV, ONYX-015 y Delta24.

4. El kit de la reivindicación 2, en el que el reovirus es un reovirus de mamíferos.

5. El kit de la reivindicación 4, en el que el reovirus de mamíferos es un reovirus de serotipo 3.

6. El kit de la reivindicación 5, en el que el reovirus de serotipo 3 es un reovirus de la cepa Dearing.

7. El kit de la reivindicación 2, en el que el reovirus es un reovirus aviar.

8. El kit de la reivindicación 1, que comprende además un medio para detectar la replicación de los virus.

9. El kit de la reivindicación 8, en el que el medio de detección es una pareja de cebadores específicos para el ácido nucleico del virus.

10. El kit de la reivindicación 9, que comprende además reactivos para PCR.

11. El kit de la reivindicación 8, en el que el medio de detección es un anticuerpo específico para una proteína del virus.

12. El kit de la reivindicación 11, que comprende además un anticuerpo secundario.

13. El kit de la reivindicación 8, que comprende además portaobjetos adecuados para observar la morfología de las células infectadas con un microscopio.

14. El kit de la reivindicación 8, que comprende además agentes de tinción adecuados para observar la morfología de las células infectadas con un microscopio.

15. El kit de la reivindicación 8, que comprende además medios de cultivo de virus y células que se usan para determinar la titulación del virus.