ELIMINACIÓN DE CÉLULAS NEOPLÁSICAS DE COMPOSICIONES CELULARES MIXTAS USANDO VIRUS.

Eliminación de células neoplásicas de composiciones celulares mixtas usando virus CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para eliminar de forma selectiva células neoplásicas activadas por ras de una composición celular mixta fuera de un organismo vivo usando un virus que infecta y elimina selectivamente las células neoplásicas. REFERENCIAS U.S. Patent No. 6,136,307. WO 94/18992, published September 1, 1994. WO 94/25627, published November 10, 1994. WO 99/08692, published February 25, 1999. Bar-Eli, N., et al., "preferential cytotoxic effect of Newcastle disease virus on lymphoma cells", J. Cancer Res. Clin. Oncol. 122: 409-415 (1996). Bensinger, W.I., "Should we purge?", Bone Marrow Transplant. 21:113-115 (1998). Bischoff JR. et al., "An Adenovirus Mutant that Replicates Selectively in p53-Deficient Human Tumor", Science 274(5286):373-6 (1996). Blagoslelonny, M.V., et al., "in vitro Evaluation of a p53-Expressing Adenovirus as an Anti-Cancer Drug", Int. J. 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Si una célula no logra responder a las señales limitantes del crecimiento o responde excesivamente a las señales promotoras del crecimiento, proliferará de una forma anormalmente rápida (mencionadas como células neoplásicas) y finalmente puede desarrollarse en cáncer, un neoplasma maligno. La quimioterapia, un método actual para tratar el cáncer, está basada en líneas generales en la propiedad de rápida proliferación de las células cancerosas. Como las células cancerosas proliferan rápidamente, son más sensibles a fármacos que inhiben la proliferación celular. En teoría, eligiendo cuidadosamente la dosificación de los fármacos quimioterapéuticos, se puede inhibir la proliferación de las células cancerosas sin dañar gravemente las células normales. Sin embargo, algunas células normales, tales como las células madre hematopoyéticas, también proliferan rápidamente. Por lo tanto, cualquier dosificación que sea dañina para las células cancerosas a menudo también daña a las células madre hematopoyéticas. Por otro lado, si la dosificación no es suficientemente alta para eliminar las células cancerosas, existe el riesgo de que el cáncer reaparezca después de que se termine la quimioterapia. Como es difícil encontrar una dosificación que elimine selectivamente las células cancerosas, la quimioterapia de elevada dosis seguida de transplante de células madre progenitoras hematopoyéticas autólogas ha logrado una aplicación extensiva como enfoque terapéutico en muchos cánceres (por ejemplo, véase Winter, 1999; Nieto y Shpall, 1999). En este enfoque, una parte de las células madre hematopoyéticas se retira de un paciente con cáncer, y el paciente después se trata con quimioterapia de elevada dosis que es letal para las células de rápida proliferación, tales como células cancerosas y células madre hematopoyéticas. Posteriormente, el paciente recibe el 3 transplante de células madre hematopoyéticas autólogas, que se han retirado previamente del mismo paciente, para regenerar el sistema hematopoyético. Un grave inconveniente de esta terapia es que cuando las células madre progenitoras hematopoyéticas se retiran de los pacientes, a menudo están contaminadas con células cancerosas. Esto es especialmente un problema cuando el paciente tiene un cáncer de origen hematopoyético, pero pacientes con un tumor sólido también pueden sufrir contaminación de las células madre hematopoyéticas, particularmente si el tumor sólido ha metastatizado. Como resultado, cuando las células retiradas se transplantan de nuevo para restablecer el sistema hematopoyético, algunas células cancerosas también puede colocarse de nuevo en el paciente con cáncer donde pueden proliferar de nuevo para contribuir a la recurrencia del cáncer. Por lo tanto es deseable purgar los autoinjertos antes del transplante. Se han empleado varios métodos para purgar los autoinjertos (Spyridonidis et al., 1998; Bensinger 1998). El autoinjerto puede tratarse con quimioterapia para eliminar las células neoplásicas contaminantes in vitro. Sin embargo, como se ha analizado anteriormente, es difícil encontrar una dosificación para el fármaco quimioterapéutico que elimine selectivamente las células neoplásicas o células cancerosas pero deje las células madre hematopoyéticas normales intactas. Los autoinjertos también pueden tratarse con una toxina conjugada con anticuerpos que reconocen un antígeno que es específico para las células neoplásicas, pero dicho antígeno específico de tumor no siempre existe. También es posible separar las células madre de las otras células con base a un marcador de superficie específico de células madre (CD34) usando citometría de flujo, columnas de afinidad o perlas magnéticas. Sin embargo, seleccionando solamente ciertas células hematopoyéticas, por ejemplo, las células CD34 + , también se eliminan otras células hematopoyéticas tales como células T, células B, monocitos y células natural killer, y puede retardarse... [Seguir leyendo]

1. Un método para eliminar selectivamente las células neoplásicas activadas por ras de una composición celular mixta, en el que dicha composición está localizada fuera de un organismo vivo, comprendiendo dicho método las etapas de: (a)poner en contacto la composición celular mixta que comprende las células neoplásicas activadas por ras con un virus seleccionado entre el grupo compuesto por adenovirus mutado en el gen VA1 y virus vaccinia mutado en el gen K3L y/o el gen E3L en condiciones que provocan la muerte sustancial de las células neoplásicas activadas por ras para eliminar selectivamente las células neoplásicas activadas por ras de la composición; y (b)recoger la composición tratada. ES 2 366 203 T3 2. El método de la reivindicación 1, en el que la composición celular mixta comprende células madre hematopoyéticas. 3. El método de la reivindicación 2, en el que las células madre hematopoyéticas se han recogido de la médula ósea. 4. El método de la reivindicación 2, en el que las células madre hematopoyéticas se han recogido de la sangre. 5. El método de la reivindicación 1, en el que la composición celular comprende un tejido, un órgano o cualquier parte de un tejido o un órgano. 6. El método de la reivindicación 5, en el que el tejido u órgano se selecciona entre el grupo compuesto por el hígado, el corazón, la córnea, la piel, el pulmón, células de los islotes pancreáticos, y sangre completa. 7. El método de la reivindicación 5, en el que el tejido, órgano o parte del tejido u órgano es útil para transplante. 8. El método de la reivindicación 1, en el que la composición celular comprende células cultivadas, semen u óvulos. 9. El método de la reivindicación 1, en el que el virus es un virus competente en la replicación. 10. El método de la reivindicación 1, en el que el virus está mutado o modificado de tal modo que el virus no produce un producto génico que inhibe la quinasa de ARN bicatenario (PKR). 11. El método de la reivindicación 1 que comprende adicionalmente la etapa de eliminar el virus de la composición celular tratada con virus. 12. El método de la reivindicación 1 que comprende adicionalmente la etapa de almacenar la composición celular tratada con virus. 13. El método de la reivindicación 12, en el que la composición celular se almacena en una solución que contiene DMSO. 13 ES 2 366 203 T3 14 ES 2 366 203 T3 ES 2 366 203 T3 16 ES 2 366 203 T3 17 ES 2 366 203 T3 18 ES 2 366 203 T3 19 ES 2 366 203 T3 ES 2 366 203 T3 21 ES 2 366 203 T3 22 ES 2 366 203 T3 23 ES 2 366 203 T3 24 ES 2 366 203 T3 ES 2 366 203 T3 26 ES 2 366 203 T3 27 ES 2 366 203 T3 28 ES 2 366 203 T3 29