Vectores recombinantes basados en el virus modificado de Ancara (MVA) como vacunas preventivas y terapéuticas contra el sida.

Vectores Recombinantes basados en el Virus Modificado de Ankara (MVA) como Vacunas Preventivas y Terapéuticas contra el SIDA.

Losvirus recombinantes de la invención contienen secuencias que se encuentran insertadas en el mismo sitio de inserción del MVA y permiten la expresión simultánea de varios antígenos, una proteína Env del VIH-I consistente en una proteína gpl20 carente de secuencias correspondientes a la proteína gp41, y una proteína quiméricade fusión de Gag, Pol y Nef. Son virus estables, que permiten eldesencadenamiento de respuestas inmunes contra gran variedad deantígenos. Aquellos cuya proteína quimérica deriva de secuenciaspropias del VIH-I son adecuados para preparar vacunas preventivaso terapéuticas contra el SIDA, especialmente para usarse protocolos de vacunación que comprenden varias dosis y distintos vectores, como indican ensayos realizados gracias a otros vectores de lainvención, con igual organización del genoma, pero cuya proteínaquimérica deriva de secuencias de SHIV patógenos.

Vectores recombinantes basados en el virus modificado de Ankara (MVA) como vacunas preventivas y terapéuticas contra el SIDA

Campo de la Invención

La presente invención se refiere a virus recombinantes que expresan antígenos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1) , diseñados para utilizarse como vacunas preventivas y terapéuticas contra el SIDA. Más concretamente, la invención se refiere a virus recombinantes basados en el virus Vaccinia Modificado de Ankara (MVA) que expresan simultáneamente la proteína de la envuelta gp120 y una proteína quimérica resultante de la fusión de Gag, Poi y Nef. La invención se refiere también a virus recombinantes basados en el virus Vaccinia Modificado de Ankara (MVA) que expresan antígenos del virus quimérico de la inmunodeficiencia de simio y humano (SHIV) , válidos para ser utilizados para la inmunización de simios y poder comprobar el grado de protección que los simios adquieren al ser infectados con el virus SHIV, un híbrido de VIH y SIV. De esta manera se confirma en animales evolutivamente muy próximos a los seres humanos, susceptibles de ser infectados de forma natural por un virus similar al virus de la inmunodeficiencia humana, la eficacia como vacunas de dichos vectores derivados de MVA, lo que es un indicativo de la potencialidad de los vectores homólogos primeramente mencionados, los virus derivados de MVA que expresan antígenos del VIH-1, como vacunas eficaces para proteger a seres humanos contra el virus de la inmunodeficiencia humana.

Estado de la Técnica

Los datos de la OMS indican que en el año 2004 la enfermedad del SIDA había causado más de 23 millones de fallecimientos, con más de 40 millones de personas infectadas y con unas predicciones de sobrepasar los 60 millones de infectados para el año 2012. Las diferencias geográficas y económicas de esta enfermedad son evidentes, pues más del 95% de los casos y el 95% de las muertes por SIDA ocurren en el tercer mundo, la mayoría de ellas en el África subsahariana y el sudeste asiático, sobre todo entre jóvenes adultos y con un incremento progresivo entre las mujeres. De entre los países desarrollados, España continúa siendo el país con mayor número de personas infectadas de la Unión Europea, con unos 150.000 casos. Si bien es cierto que una mejora en los servicios sanitarios en muchas regiones contribuiría a disminuir la velocidad de transmisión del virus, existe consenso en la comunidad internacional de la urgente necesidad en desarrollar vacunas profilácticas y terapéuticas contra el SIDA que ayuden a solucionar el problema.

El desarrollo del SIDA .representa los últimos estadios de la infección causada por el retrovirus conocido como virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) . El VIH es un retrovirus que pertenece al genero Lentivirus, con un genoma de 9, -81<b. El virión contiene dos copias de ARN de banda sencilla y de polaridad positiva. En los primeros estadios de la infección, el ARN genómico, por medio de la transcriptasa en reverso o retrotranscriptasa (RT) que llega a la célula asociada al ARN viral, se convierte en ADN lineal de doble banda. Este ADN se transporta al núcleo, donde se integra en la célula hospedadora en forma de provirus, a partir del cual se transcriben los genes estructurales gag, poi y env, los genes reguladores, tat, rev, nef, y los genes accesorios vif, vpr y vpu. Los productos de la traducción de dichos genes son los siguientes:

• El producto de la traducción del gen Gag es la poliproteína precursora gag-p55 que se procesa dando lugar a la proteína matriz p17, la proteína de la cápsida p24 y las proteínas de la nucleocápsida p6 y p7.

• El procesamiento del precursor Poi da lugar a las tres enzimas víricas: la proteasa (p11) , la retrotranscriptasa (p6S/S1) (RT) y la integrasa (p32) , de las que la RT posee actividad de ADN polimerasa (dependiente tanto de ARN como de ADN) y actividad endonucleasa (RNasa H) , ambas requeridas durante la síntesis del ADN, mientras que la integrasa está involucrada en el proceso del integración del provirus, actuando como endonucleasa.

• El producto del gen Env es una proteína de 88 kDa que está fuertemente glicosilada (gp160) . Esta proteína es procesada por proteasas celulares, dando lugar a las proteínas gp120 y gp41 , que permanecen unidas por uniones no covalentes en la superficie del virión. En la glicoproteína gp120 se localizan los sitios de unión a los receptores celulares, el receptor CD4 y los correceptores CXCR4 (llamado X4) y CCR5 (llamado C5) . Es a esta proteína a la que se debe mayoritariamente la variabilidad genética del virus VIH y su capacidad para escapar a la respuesta inmune tanto humoral como celular, por ser la que está más expuesta en la superficie del virus. Por su parte, la glicoproteína gp41 o transmembrana actúa como anclaje a la membrana lipídica. Tiene en su extremo amino terminal una zona hidrófoba altamente conservada, requerida para la fusión de la membrana vírica y la membrana plasmática celular durante el proceso de entrada del virus en la célula hospedadora.

• Los genes reguladores y auxiliares son codificados por seis fragmentos de marco de lectura abierta solapante. Los genes Tat y Rev son necesarios para la replicación vírica en todas las células infectadas. El gen Tat codifica una proteína de 14 kDa que aumenta la expresión de los genes del VIH. El gen Rev

codifica una proteína de 19 kDa que facilita el transporte al citoplasma de los ARNm. La proteína Nef, de 210 aminoácidos, se asocia con estructuras de membrana e induce la internalización y degradación de moléculas de CD4 en los lisosomas. El gen Vif codifica una proteína necesaria para la propagación del virus en linfocitos de sangre periférica, macrófagos primarios y algunas líneas celulares establecidas. El gen Vpr codifica una proteína de 15 kDa que se asocia con la proteína de la nucleocápsida p6. La proteína Vpu es una fosfoproteína que facilita la disociación dentro de la célula infectada de la gp160 y CD4 por degradación de la molécula CD4 en el retículo endoplásmico.

En los extremos 5' y 3' del DNA viral se encuentran la secuencias L TR (long terminal repeats) , en las que se localizan importantes regiones reguladoras que juegan un papel primordial durante el proceso de retrotranscripción.

Se han identificado dos clases del virus: VIH-1 y VIH-2, de las que la segunda, VIH-2, parece ser menos patógena que la primera y se localiza sobre todo en la zona occidental de África. Es la forma que genera la enfermedad con mayor rapidez, VIH-1, la que se encuentra más extendida por el planeta y la que más se ha diversificado. Existen tres subtipos del VIH-1, denominados M, N Y 0, aunque más del 95% de todos los aislados del VIH a nivel global en la población, pertenecen al subtipo M. En función de las diferencias en la secuencia de nucleótidos, en especial en la parte correspondiente a las proteínas de la envuelta (Env) , este subtipo se subdivide a su vez en ocho estirpes principales, a las que se alude generalmente como clades y que se denominan con las letras A, B, C, D, F, G, H Y J. Los clades B y C representan aproximadamente el 80% de las infecciones a nivel mundial, siendo el clade B el más representativo en Europa y América del Norte, mientras que el clade C es prevalente en África y Asia. Son abundantes las zonas en las que las dos clases están presentes en la población (China, India, África subsahariana) , por lo que se piensa que las vacunas que contuvieran antígenos correspondientes a los dos clades, B y C, serían mucho más eficaces en dichas zonas.

Una posibilidad para el diseño de tales vacunas consiste en la generación de moléculas de ADN recombinante que contengan secuencias capaces de expresar proteínas del VIH, o fragmentos o formas de fusión de las mismas de forma que, al ser administradas a un individuo, se sintetizan dichas proteínas, fragmentos o formas de fusión de las mismas y se genera una respuesta inmune contra ella. Dichas moléculas de ADN recombinante pueden generarse a partir de genomas de virus en los que se han eliminado o inactivado regiones cuya expresión es necesaria para la replicación del virus en las células diana y/o en los que se han sustituido regiones que codifican proteínas no imprescindibles para que el virus desarrolle la parte de su ciclo vital que se desea que tenga lugar en la célula diana. En esos casos, el ADN recombinante puede administrarse en forma de partículas virales completas que facilitan la transfección del ADN recombinante... [Seguir leyendo]

1. Un vector recombinante derivado del virus MVA capaz de expresar simultáneamente una forma de la proteína Env del VIH-1 que carece de la parte correspondiente a la proteína gp41 en su totalidad y una proteína de fusión que contiene secuencias de las proteínas Gag, Poi y Nef del VIH-1, estando la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env y la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína de fusión Gag-Pol-Nef bajo el control de promotores idénticos e insertadas ambas secuencias en el mismo lugar de inserción del vector, el locus de timidina quinasa, de manera que el vector recombinante carece del gen de la timidina quinasa.

2. Un vector recombinante derivado del virus MVA según la reivindicación 1, en el que tanto la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env como las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef se generan a partir de las secuencias de proteínas Env, Gag, Poi y Nef de aislados naturales.

3. Un vector recombinante derivado del virus MVA según la reivindicación 2, en el que la secuencia de nucleótidos de la proteína Env se ha generado realizando modificaciones en la secuencia correspondiente, destinadas a eliminar la expresión de la proteína gp41, mediante deleción de toda la secuencia del gen env que en la secuencia natural de dicho gen aparece tras el último triplete correspondiente a la proteína gp120.

4. Un vector recombinante derivado del virus MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 3, en el que la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión Gag-Pol-Nef no se proteoliza por acción de la proteasa del VI H.

5. Un vector recombinante derivado del virus MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que los promotores que controlan las secuencias de la proteína Env y la proteína de fusión Gag-Pol-Nef son promotores idénticos que permiten la expresión de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef y de la proteína Env carente de la parte correspondiente a la proteína gp41 en su totalidad tanto en etapas tempranas como tardías del ciclo infectivo del virus MV A.

6. Un vector recombinante derivado del virus MVA según la reivindicación 5, en el que los promotores que controlan la secuencia de la proteína Env y la secuencia de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef son promotores sintéticos pE/L

7. Un vector recombinante según las reivindicaciones 1 a 6, en el que la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env se ha generado eliminando toda la secuencia del gen env que en la secuencia natural de dicho gen aparece tras el último triplete de la proteína gp120, la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión Gag-Pol-Nef da lugar a una poliproteína que no se proteoliza por acción de la proteasa del VIH y los promotores que controlan las secuencias correspondientes a la proteína Env y la proteína Gag-Pol-Nef son promotores sintéticos pE/L

8. Un vector recombinante según la reivindicación 7, en el que tanto la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env como las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína de fusión Gag-Pol-Nef han sido obtenidas de aislados naturales del clade 8.

9. Un vector recombinante según la reivindicación 8, en el que la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env da lugar a una proteína que reproduce la secuencia de la proteína gp120 del aislado BX08, representada por SEQ ID NO:15.

10. Un vector recombinante según la reivindicación 8, en el que las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef han sido obtenidas del aislado IIIB, estando la secuencia de nucleótidos de dicha proteína de fusión representada por SEQ ID NO:16.

11. Un vector recombinante según las reivindicaciones 9 y 10, en el que la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env da lugar a una proteína que reproduce la secuencia de la proteína gp120 del aislado BX08 y las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína de fusión Gag-Pol-Nef han sido obtenidas del aislado IIIB, estando representadas dichas secuencias, respectivamente, por SEQ ID NO:15 y SEQ ID NO:16.

12. Un vector recombinante según la reivindicación 7, en el que tanto la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env como las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína de fusión Gag-Pol-Nef han sido obtenidas de aislados naturales del clade C.

13. Un vector recombinante según la reivindicación 12, en el que la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env da lugar a una proteína que reproduce la secuencia de la proteína gp120 del aislado CN54, representada por SEQ ID NO:17.

14. Un vector recombinante según la reivindicación 12, en el que las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína de fusión Gag-Pol-Nef han sido obtenidas del aislado CN54, estando la secuencia de nucleótidos de la proteína de fusión representada por SEO ID NO:18.

15. Un vector recombinante según las reivindicaciones 13 y 14, en el que la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env da lugar a una proteína que reproduce la secuencia de la proteína gp120 del aislado CN54 y las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos de la proteína de fusión Gag-PolNef se han obtenido también del aislado CN54, estando representadas dichas secuencias, respectivamente, por SEO ID NO:17 y SEO ID NO:18.

16. Una composición que contiene, al menos, un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

17. Una composición que contiene, al menos, un vector recombinante según la reivindicación 16 destinada a ser administrada a un individuo con el propósito de provocar o reforzar una respuesta inmune que ayude a prevenir o a tratar una infección provocada por el virus VIH.

18. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, que contiene al menos un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11.

19. Una composición según la reivindicación 18, que contiene, al menos, un vector recombinante según la reivindicación 11.

20. Una composlclon según la reivindicación 19, destinada a ser administrada a un individuo con el propósito de provocar o reforzar una respuesta inmune que ayuda a prevenir o tratar una infección provocada por el virus VIH como parte de un protocolo de inmunización en el que se administra una primera dosis de vacunación para desencadenar la respuesta inmune y una o más dosis posteriores para reforzar la respuesta inmune inicial.

21. Una composición según la reivindicación 20, destinada a ser administrada como la primera dosis de vacunación con la que se desencadena la respuesta inmune.

22. Una composición según la reivindicación 20, destinada a ser administrada tras la primera dosis de vacunación como una o más de las dosis posteriores de vacunación que tienen el propósito de reforzar la respuesta inmune inicial.

23. Una composición según la reivindicación 20, destinada a ser administrada tanto en la primera dosis de vacunación que tiene el propósito de desencadenar la respuesta inmune como en una o más de las dosis posteriores de vacunación que tienen el propósito de reforzar la respuesta inmune inicial.

24. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, que contiene, al menos, un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15.

25. Una composición según la reivindicación 24, que contiene, al menos, un vector recombinante según la reivindicación 15.

26. Una composlclon según la reivindicación 25, destinada a ser administrada a un individuo con el propósito de provocar o reforzar una respuesta inmune que ayuda a prevenir o tratar una infección provocada por el virus VIH como parte de un protocolo de inmunización en el que se administra una primera dosis de vacunación para desencadenar la respuesta inmune y una o más dosis posteriores para reforzar la respuesta inmune inicial.

27. Una composición según la reivindicación 26, destinada a ser administrada como la primera dosis de vacunación que tienen el propósito de desencadenar la respuesta inmune.

28. Una composición según la reivindicación 26, destinada a ser administrada como una o más de las dosis posteriores de vacunación que tienen el propósito es reforzar la respuesta inmune inicial.

29. Una composición según la reivindicación 26, destinada a ser administrada tanto como la primera dosis de vacunación con la que se desencadena la respuesta inmune como en una o más de las dosis posteriores de vacunación que tienen el propósito de reforzar la respuesta inmune inicial.

30. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, que contiene al menos un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, Y al menos un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15.

31. Una composición según la reivindicación 30, que contiene, al menos un vector recombinante según la reivindicación 11 y al menos un vector recombinante según la reivindicación 15.

32. Una composlclon según la reivindicación 31, destinada a ser administrada a un individuo con el propósito de provocar o reforzar una respuesta inmune que ayuda a prevenir o tratar una infección provocada por el virus VIH como parte de un protocolo de inmunización en el que se administra una primera dosis de vacunación para desencadenar la respuesta inmune y una o más dosis posteriores para reforzar la respuesta inmune inicial.

33. Una composición según la reivindicación 32, destinada a ser administrada como la primera dosis de vacunación que tiene el propósito de desencadenar la respuesta inmune.

34. Una composición según la reivindicación 32, destinada a ser administrada tras la primera dosis de vacunación como una o más de las dosis posteriores de vacunación que tienen el propósito de reforzar la respuesta inmune inicial.

35. Una composición según la reivindicación 32, destinada a ser administrada tanto en la primera dosis de vacunación cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune como en una o más de las dosis posteriores de vacunación que tienen el propósito de reforzar la respuesta inmune inicial.

36. Uso de un vector recombinante derivado del virus MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para la fabricación de un medicamento destinado a ser utilizado como vacuna para ayudar a prevenir o a tratar una infección provocada por el virus VIH.

37. Uso según la reivindicación 36, en el que medicamento está diseñado para ser la única vacuna que se suministre a un individuo para ayudar a prevenir o a tratar una infección provocada por el virus VIH.

38. Uso según la reivindicación 37, en el que el medicamento contiene al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 y/o al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a

15.

39. Uso según la reivindicación 36, en el que el medicamento está diseñado para ser administrado como al menos una de las dosis que forman parte de un protocolo de inmunización en el que se administra una primera dosis de vacunación para desencadenar la respuesta inmune y una segunda o más dosis posteriores para reforzar la respuesta inmune inicial.

40. Uso según la reivindicación 39, en el que el medicamento está diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial.

41. Uso según la reivindicación 40, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial, contiene al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 y/o al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15.

42. Uso según la reivindicación 41, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos un vector según la reivindicación 11, y/o al menos un vector según la reivindicación 15, y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada, contiene al menos un vector recombinante derivado del virus NYVAC.

43. Uso según la reivindicación 42, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de o constituyendo la primera dosis de vacunación cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial, contiene al menos un vector según la reivindicación 11, Y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada, contiene al menos el vector recombinante NYVAC-B.

44. Uso según la reivindicación 42, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial, contiene al menos un vector según la reivindicación 15, y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada, contiene al menos el vector recombinante NYVAC-C.

45. Uso según la reivindicación 41, en el que tanto el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-, como el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada, contienen al menos un

vector según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, y/o al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15.

46. Uso según la reivindicación 45, en el que tanto el medicamento diseñado para ser administrado como parte de o constituyendo la primera dosis de vacunación que desencadena la respuesta inmune inicial como el medicamento diseñado para ser administrado como parte de o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial previamente desencadenada contienen al menos un vector según la reivindicación 12.

47. Uso según la reivindicación 46 en el que tanto el medicamento diseñado para ser administrado como parte de o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-como el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contienen al menos un vector según la reivindicación 15.

48. Uso según la reivindicación 39, en el que el medicamento está diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores cuyo propósito es reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada.

49. Uso según la reivindicación 48, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -cuyo propósito es reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contiene al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 y/o al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15.

50. Uso según la reivindicación 49, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -cuyo propósito es reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contiene al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, y/o al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, yen el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos un vector recombinante derivado del virus NYVAC.

51. Uso según la reivindicación 50, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-, contiene al menos un vector según la reivindicación 11 y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos el vector recombinante NYVAC-B.

52. Uso según la reivindicación 50, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-, contiene al menos un vector según la reivindicación 15, yen el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos el vector recombinante NYVAC-C.

53. Uso según la reivindicación 49, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contiene al menos un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, y/o al menos un vector según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, yen el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos un plásmido recombinante que contiene secuencias codificantes de antígenos del VIH-1.

54. Uso según la reivindicación 53, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contiene al menos un vector según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, y/o al menos un vector según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos un plásmido recombinante que contiene secuencias codificantes de antígenos del VIH-1 que están presentes también en al menos uno de los vectores según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, o según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15 que forman parte o constituyen la segunda dosis y/o dosis posteriores de vacunación.

55. Uso según la reivindicación 54, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contiene al menos un vector según la reivindicación 11, Y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos el plásmido recombinante DNA-B.

56. Uso según la reivindicación 54, en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la segunda y/o dosis posteriores -destinadas a reforzar la respuesta inmune inicial, previamente desencadenada-contiene al menos un vector según la reivindicación 15 y en el que el medicamento diseñado para ser administrado como parte de, o constituyendo la primera dosis de vacunación -cuyo propósito es desencadenar la respuesta inmune inicial-contiene al menos el plásmido recombinante DNA-C.

57. Un vector recombinante derivado del virus MVA capaz de expresar simultáneamente una forma de la proteína Env del VIH-1 que carece de la parte correspondiente a la proteína gp41 en su totalidad y una proteína de fusión que contiene secuencias de las proteínas Gag, Poi y Nef del virus de la inmunodeficiencia de simio, SIV, en el que las secuencias de nucleótidos de la proteína Env y de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef están controladas por promotores idénticos y en el que ambas secuencias están insertadas en el mismo lugar de inserción del vector, el locus de timidina quinasa, de manera que el vector recombinante carece del gen de la timidina quinasa.

58. Un vector recombinante según la reivindicación 57, en el que tanto la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env como las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef se generan a partir de las secuencias de proteínas Env, Gag, Poi y Nef de virus quiméricos de la inmunodeficiencia de simio y humano, SHIV.

59. Un vector recombinante derivado del virus MVA según la reivindicación 58, en el que la secuencia de nucleótidos de la proteína Env se ha generado realizando modificaciones en la secuencia correspondiente, destinadas a eliminar la expresión de la proteína gp41, mediante deleción de toda la secuencia del gen env que en la secuencia natural de dicho gen aparece tras el último triplete correspondiente a la proteína gp120.

60. Un vector recombinante derivado del virus MVA según cualquiera de las reivindicaciones 58 y 59, en el que la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión Gag-Pol-Nef no se proteoliza por acción de la proteasa retroviral.

61. Un vector recombinante derivado del virus MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 60, en el que los promotores que controlan las secuencias de la proteína Env y la proteína de fusión Gag-Pol-Nef son promotores idénticos que permiten la expresión de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef y de la proteína Env carente de la parte correspondiente a la proteína gp41 en su totalidad, tanto en etapas tempranas como tardías del ciclo infectivo del virus MV A.

62. Un vector recombinante derivado del virus MVA según la reivindicación 61, en el que los promotores que controlan las secuencias de la proteína Env y de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef son promotores sintéticos pE/L.

63. Un vector recombinante según las reivindicaciones 57 a 62, en el que la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env se ha generado eliminando toda la secuencia del gen env que en la secuencia natural de dicho gen aparece tras el último triplete correspondiente a la proteína gp120, la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión Gag-Pol-Nef da lugar a una poliproteína que no se proteo liza por acción de la proteasa del HIV y los promotores bajo cuyo control están las secuencias correspondientes a la proteína Env y a la proteína Gag-Pol-Nef son promotores sintéticos pE/L.

64. Un vector recombinante según la reivindicación 63, en el que tanto la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína Env como las secuencias utilizadas para generar la secuencia de nucleótidos correspondiente a la proteína de fusión Gag-Pol-Nef han sido obtenidas del virus quimérico SHIV89.6P.

65. Un vector recombinante según la reivindicación 64, en el que la secuencia de nucleótidos de la proteína Env está representada por SEQ ID NO:22.

66. Un vector recombinante según la reivindicación 64, en el que la secuencia de nucleótidos de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef está representada por SEQ ID NO:23.

67. Un vector recombinante según las reivindicaciones 65 y 66 que comprende un inserto cuya secuencia está representada por SEQ ID NO:24.

68. Una composición que comprende al menos un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67.

69. Una composición según la reivindicación 68, que comprende adicionalmente al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

70. Uso de un vector recombinante según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67, o de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 68 o 69, para evaluar la capacidad para conferir

protección frente a la infección por el VIH de un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 que presenta la misma estructura de organización génica, sitio de inserción y promotores que el vector según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67, evaluando tal capacidad para conferir protección sometiendo a un primate no humano a un protocolo de desencadenamiento/refuerzo de la respuesta inmune en el que el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67 se administra al primate, inoculando posteriormente al primate un virus capaz de infectarlo y de causar síntomas similares a los del SIDA y evaluando en el primate la capacidad que tiene la respuesta inmune generada para controlar la infección determinando una magnitud seleccionada entre el número de partículas virales presentes en el plasma de muestras de sangre extraídas del primate, el porcentaje de células CD4+ y/o CD8+ en el total de las células mononudeares de sangre periférica (PBMC) , la tasa de supervivencia de los primates infectados o combinaciones de las mismas.

71. Uso según la reivindicación 70, en el que se determina el número de partículas virales presentes en el plasma de las muestras de sangre extraídas del primate no humano determinando el número de copias de ARN viral presentes en el plasma.

72. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 70 ó 71, en el que el primate no humano es un macaco.

73. Uso según la reivindicación 72, en el que el virus capaz de infectar al macaco y de causar síntomas similares a los del SIDA es una forma patógena del virus de la inmunodeficiencia de simio y humana (SHIV) .

74. Uso según la reivindicación 73, en el que la forma patógena del virus de la inmunodeficiencia de simio y humana inoculada es el SHIV89.6P.

75. Uso según las reivindicaciones 73 ó 74, en el que el número de copias de ARN viral presentes en el plasma del macacos se determina transcurridos al menos 10 días desde el momento de la inoculación del virus SHIV.

76. Uso según la reivindicación 74, en el que el SHIV89.6P se inocula por vía intravenosa.

77. Uso según la reivindicación 76, en el que el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67 administrado a los macacos previamente a la inoculación del SHIV89.6P es un vector de la reivindicación 67.

78. Uso según la reivindicación 77, en el que el vector según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 que presenta la misma estructura de organización génica, sitio de inserción y promotores que el vector de la reivindicación 67 es el vector MVA-B y/o el vector MVA-C.

79. Uso según la reivindicación 78, en el que el vector de la reivindicación 67 se administra a los macacos en una o más dosis de potenciación de la respuesta inmune.

80. Uso según la reivindicación 79, en el que el vector de la reivindicación 67 se administra a los macacos en la tercera dosis de vacunación.

81. Uso según la reivindicación 80, en el que el vector de la reivindicación 67 se administra a los macacos adicionalmente en una cuarta dosis de vacunación.

82. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 80 u 81, en el que el vector de la reivindicación 67 está ausente de la primera y/o de la segunda dosis de vacunación administradas a los macacos.

83. Uso según la reivindicación 82, en el que el vector de la reivindicación 67 está ausente de la primera y/o de la segunda dosis de vacunación administradas a los macacos.

84. Uso según la reivindicación 83, en el que la primera y la segunda dosis de vacunación comprenden un vector de ADN desnudo a partir del cual pueden expresarse en los macacos antígenos del SHIV89.6P

85. Uso según la reivindicación 79, en el que el vector de la reivindicación 67 se administra por vía intramuscular.

86. Uso de un vector recombinante derivado del virus NYVAC que presenta la misma estructura de organización génica, sitio de inserción y promotores que un vector derivado de MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67 como control en un procedimiento en el que se evalúa la eficacia como vacuna de un vector derivado del virus MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 mediante el uso del vector según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67 que presenta la misma estructura de organización génica, sitio de inserción y promotores que el vector derivado de MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

87. Uso según la reivindicación 86, en el que el vector recombinante derivado del virus NYVAC comprende un inserto cuya secuencia está representada por SEO ID NO:24 y el vector recombinante derivado de MVA que se utiliza en el procedimiento en el que se evalúa la eficacia como vacuna de otro vector recombinante derivado del virus MVA según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 es un vector recombinante de la reivindicación 11.

88. Uso según la reivindicación 87, en el que se evalúa la eficacia como vacuna del vector MVA-B y/o del vector MVA-C.

89. Un plásmido que posee un inserto con la secuencia codificante de una forma de la proteína Env del VIH-1 que carece de la parte correspondiente a la proteína gp41 en su totalidad y la secuencia codificante de una proteína de fusión que contiene secuencias de las proteínas Gag, Poi y Nef del SIV, inserto en el cual la secuencia codificante de la proteína Env y la secuencia codificante de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef están bajo el control de promotores idénticos localizados en direcciones opuestas y en la zona más interna del inserto, caracterizado por que el inserto esté flanqueado, en uno de sus extremos, por una primera secuencia f1anqueante del locus de timidina quinasa y, en el otro extremo, por una segunda secuencia f1anqueante más corta comprendida en la secuencia que flanquea el extremo opuesto del locus de timidina quinasa, presentando adicionalmente el plásmido una tercera secuencia que corresponde a la secuencia que flanquea el extremo del locus de timidina quinasa oppuesto a la primera secuencia f1anqueante y que es más larga y que comprende la segunda secuencia f1anqueante más corta, y un gen marcador situado entre la segunda secuencia f1anqueante más corta y la tercera secuencia.

90. Plásmido según la reivindicación 89, en el que la secuencia codificante de la proteína Env del VIH-1 es la representada por SEO ID NO:22, la secuencia codificante de la proteína de fusión Gag-Pol-Nef es la representada por SEO ID NO:23, los promotores idénticos que controlan dichas secuencias codificantes son promotores sintéticos pE/L y el gen marcador es LAC-Z.