Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores.

Uso de un inhibidor de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ IDNOs 18,

19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de unacomposición farmacéutica para evitar, aliviar o tratar enfermedades o afecciones asociadas con la degeneración olesión del tejido nervioso del vertebrado, asociado con convulsiones, asociado con trastornos angiogénicos otrastornos del sistema cardiovascular, en donde dicho inhibidor es un anticuerpo o un fragmento Fab, F(ab')2, Fv oscFv del mismo, o un aptámero, todos capaces de unirse a un polipéptido que tiene o comprende la secuencia deaminoácidos de la SEQ ID NO: 18, 20, 23 o 25, o es una molécula de ácido nucleico específica que interactúa conun polinucleótido que codifica dicho polipéptido.

Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores.

La presente invención se relaciona con las realizaciones como se define en las reivindicaciones. En particular, la invención proporciona el uso de un inhibidor como se define en las reivindicaciones de un polipéptido que tiene o comprende una secuencia de aminoácidos como se describe aquí o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para evitar, aliviar o tratar enfermedades o afecciones asociadas con la degeneración o lesión del tejido nervioso de vertebrados, asociado con convulsiones, asociado con trastornos angiogénicos o trastornos del sistema cardiovascular. Adicionalmente, la invención proporciona el uso de dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para evitar o tratar el crecimiento del tumor o formación de metástasis de tumor o como un marcador de mastocitos.

El mecanismo más importante en la formación de sistemas nerviosos embriónicos es la orientación de axones y crecimiento de conos mediante indicaciones de orientación direccional (Goodman, Annu. Rev. Neurosci. 19 (1996) , 341-77; Mueller, Annu. Rev. Neurosci 22, (1999) , 351-88) . Un sistema modelo adecuado para estudiar este proceso de orientación es el sistema retinotectal de los vertebrados. En el embrión de pollo aproximadamente 2 millones de axones de células de ganglio retinales (RGC) dejan cada ojo y crecen hacia el techo óptico contralateral para formar un mapa preciso (Mey & Thanos, (1992) ; J. Himforschung 33, 673-702) . Habiendo llegado en el polo anterior del techo óptico, los axones RGC comienzan a invadir su objetivo tectal para encontrar sus neuronas objetivo. El mapeo ocurre en tal forma, que los axones RGC de la retina nasal se proyectan hasta el techo posterior y los axones temporales hasta el techo anterior. A lo largo del eje dorso-ventral, los axones procedentes de la retina dorsal terminan en el techo ventral, mientras que aquellos de la retina ventral finalizan en el techo dorsal. Al final se forma un mapa topográfico preciso, cuando las relaciones vecinas en la retina se conservan en el techo, de tal manera que los axones de las células de ganglio vecinas en la retina hacen sinapsis con las neuronas tectales vecinas. Lo más importante para la formación de este mapa, son las indicaciones de orientación tectal clasificadas, leído mediante conos de crecimiento retinales que llevan los receptores correspondientes que también muestran una distribución clasificada (Sperr y , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 50 (1963) , 703-710; Bonhoeffer & Gierer, Trends Neurosci. 7 (1984) 378-381) . Por lo tanto se determina la posición de cada cono de crecimiento retinal en el campo tectal por dos conjuntos de gradientes: gradientes receptores en axones retinales encarnados y conos de crecimiento y los gradientes de ligando en las células tectales (Gierer, Development 101 (1987) , 479-489) . La existencia de los ligandos tectales clasificados se ha postulado del trabajo anatómico, sin embargo su identificación prueba ser extremadamente difícil y solo se hace posible con el desarrollo de sistemas in vivo simples (Walter, Development 101 (1987) , 685-96; Cox, Neuron 4 (1990) , 31-7) . En el ensayo de bandas los axones RGC crecen sobre una red de membranas, que consiste en alternar líneas de membranas tectales anterior (a) y posterior (p) . En estas redes, los axones retinales temporales crecen en las membranas tectales anteriores y se rechazan por las líneas posteriores, mientras que los axones nasales no se distinguen entre los miembros a y p (Walter, Development 101 (1987) , 68596) . También se observa la misma especificidad en el ensayo de colapso de cono de crecimiento (Raper & Kapfhammer, Neuron 4 (1990) , 21-29) , en donde el colapso de los conos de crecimiento retinal temporal después de la adición de vesículas de membrana tectales posteriores no reaccionan con las vesículas tectales anteriores y en donde los conos de crecimiento nasal son insensibles a cualquier tipo de vesículas (Cox, (1990) , loc. cit.) . En ambos sistemas de ensayo, el tratamiento de membranas tectales posteriores con la enzima fosfatidilinositol-fosfolipasa C específica (PI-PLC) que divide el anclaje lípido de proteínas ligadas a glucosilfosfatidilinositol (GPI) , retira su actividad de inducción-colapso y repulsión (Walter, J. Physiol 84 (1990) , 104-10) . Una de las primeras moléculas de orientación repulsiva identificadas en el sistema retinotectal de embriones de pollo es una glucoproteína de anclaje GPI con un peso molecular de 33/35 kDa (Stahl, Neuron 5 (1990) , 735-43) . Esta molécula de 33/35 kDa, denominada en adelante RGM (moléculas de orientación repulsivas) , es activa en los ensayos de colapso y banda y se muestra que se expresa en un gradiente posterior alto-anterior bajo en la tecta embriónica de pollos y ratas (Mueller, Curr. Biol. 6 (1996) , 1497-502; Mueller, Japan Scientific Societies Press (1997) , 215-229) . Debido al comportamiento bioquímico anormal de RGM, no se puede obtener la secuencia de aminoácidos precisa. Se describe RGM como una molécula que es activa durante el desarrollo del vertebrado. De manera interesante, el RGM se regula por disminución en el techo embrionario del pollo después de E12 y en el techo embrionario de la rata después de P2 y desaparece completamente después de las etapas embrionarias (Müller (1992) , Ph. D thesis University of Tübingen; Müller (1997) Japan Scientific Societies, 215-229) . En 1996, Müller (loc. cit) ha mostrado que CALI (inactivación láser asistida por cromóforo) de RGM elimina la actividad orientadora repulsiva de las membranas tectales posteriores /RGM. Sin embargo, debido a la presencia de otras moléculas orientadoras, en particular de RAGS (señal orientadora de axón repulsiva) y ELF-1 (Ligando Eph de la familia 1) , no siempre se detecta una eliminación completa de la orientación y se especula que el RGM actúa en concierto con RAGS (ahora denominado efrina-A5) y ELF-1 (efrina-A2) . Se prevé adicionalmente que RGM puede ser un co-factor que potencia la actividad de RAGS y ELF-1 en eventos de orientación embrionaria. Esto se argumenta específicamente por B. K. Müller ("RGM, una molécula de orientación repulsiva, está implicada en la orientación de axón retinal in vivo", TANIGUCHI SYMPOSIA ON BRAIN SCIENCES, vol. 20, Mol. Basis of Axon Growth & Nerve Pattern Form., 1997, p. 215 a 229) quien muestra adicionalmente que RGM, RAGS y ELF-1 se coexpresan en la capa tectal más superficial, comparte función similar in vitro pero son moléculas bioquímicamente diferentes. En 1980/81 el grupo de Aguayo encuentra que, cuando las neuronas periféricas se trasplantan/injertan en el SNC lesionado del adulto, se induce el crecimiento de axones de las neuronas del SNC (David, Science 214 (1981) , 931-933) . Por lo tanto, se especula que las neuronas del SNC aún tienen la capacidad de regeneración y/o excrecencia de neuritas, si se proporciona un ambiente adecuado. Adicionalmente, se especula que pueden existir los "inhibidores de regeneración de neuronas del SNC". En 1988, Caroni and Schwab (Neuron 1, 85-96) describe dos inhibidores de 35 kDa y 250 kDa, aislados de mielina del SNC de rata (NI-35 y NI-250; ver también Schnell, Nature 343 (1990) 269-272; Caroni, J.Cell Biol. 106 (1988) , 1291-1288) . En el 2000, el ADN que codifica NI-220/250 se deduce y el inhibidor potente correspondiente del crecimiento de neurita se denomina Nogo-A (Chen, Nature 403 (2000) , 434-438. El Nogo unido a la membrana resultó ser un miembro de la familia reticulón (GrandPré, Nature 403 (2000) , 439-444) . Los factores adicionales que median la inhibición de la excrecencia neuronal se han aislado primero en saltamontes, y denominado "fasciclina IV" y finalmente "colapsina" en pollos. Estos inhibidores pertenecen a la así llamada familia semaforina. Se han reportado las semaforinas en un amplio rango de especies y se describen como proteínas de transmembrana (ver, inter alia, Kolodkin Cell 75 (1993) 1389-99, Püschel, Neuron 14 (1995) , 941-948) . Aún, también se muestra que no todas las semaforinas tienen actividad inhibidora. Algunos miembros de dicha familia, por ejemplo semaforina E, actúan como una señal orientadora atractiva para los axones corticales (Bagnard, Development 125 (1998) , 50435053) . Un sistema adicional de la moléculas de orientación repulsivas es el sistema efrina-Eph. Las efrinas son ligandos de las quinasas del receptor Eph y están implicadas como marcas posicionales que pueden guiar el desarrollo de mapas topográficos neuronales (Flanagan, Ann. Rev. Neurosc. 21 (1998) , 309-345) . Las efrinas se agrupan en dos clases, las efrinas A que se ligan a la membrana mediante un anclaje glucosilfosfatidilinositol... [Seguir leyendo]

1. Uso de un inhibidor de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para evitar, aliviar o tratar enfermedades o afecciones asociadas con la degeneración o lesión del tejido nervioso del vertebrado, asociado con convulsiones, asociado con trastornos angiogénicos o trastornos del sistema cardiovascular, en donde dicho inhibidor es un anticuerpo o un fragmento Fab, F (ab’) 2, Fv o scFv del mismo, o un aptámero, todos capaces de unirse a un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18, 20, 23 o 25, o es una molécula de ácido nucleico específica que interactúa con un polinucleótido que codifica dicho polipéptido.

2. El uso de la reivindicación 1, en donde dichas enfermedades o afecciones asociadas con la degeneración o lesión del tejido nervioso del vertebrado se seleccionan del grupo que consiste de enfermedades neurodegenerativas, lesiones de fibra nerviosa y trastornos relacionados con pérdidas de la fibra nerviosa.

3. El uso de la reivindicación 2, en donde dicha enfermedad neurodegenerativa se selecciona del grupo que consiste de enfermedades neuronales motoras (MND) , ALS, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, parálisis ocular progresiva, atrofia muscular progresiva, demencia relacionada con VIH y atrofias musculares espinales, Síndrome de Down, Enfermedad de Huntington, Enfermedad de Creutzfeldt - Jacob, Síndrome de Gerstmann-Straeussler, kuru, Encefalopatía espongiforme bovina, encefalopatía transmisible del visón, atrofia de sistema múltiple, disautonomía familiar de Riley-Day en donde dichas lesiones de fibra nerviosa se seleccionan del grupo que consiste de lesiones de la médula espinal, lesiones cerebrales relacionadas con presión intracraneal elevada, trauma, daño secundario debido a presión intracraneal aumentada, infección, infarto, exposición a agentes tóxicos, síndromes paraneoplásicos y cáncer y en donde dichos trastornos relacionados con pérdidas de la fibra nerviosa se seleccionan del grupo que consiste de parálisis de nervio facial, nervio medio, nervio cubital, nervio axilar, nervio torácico largo, nervio del radio y de otros nervios periféricos.

4. El uso de la reivindicación 1, en donde dicha enfermedad o afección asociada con convulsiones es epilepsia.

5. El uso de la reivindicación 1, en donde dicha enfermedad o afecciones asociadas con trastornos angiogénicos se seleccionan del grupo que consiste de trastornos isquémicos, infarto, trastornos que conducen a la evolución de formación de placa vascular en trastornos cardio-vasculares, cerebrovasculares y/o nefro-vasculares o trastornos aquí se ha regulado la permeabilidad de la barrera hematoencefálica.

6. El uso de la reivindicación 1, en donde dichos trastornos del sistema cardiovascular comprenden trastornos de barrera hematoencefálica, edema cerebral, daños cerebrales secundarios debido a presión intracraneal aumentada, infección, infarto, isquemia, hipoxia, hipoglicemia, exposición a agentes tóxicos, cáncer, o síndromes paraneoplásicos.

7. Uso de un inhibidor de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID. NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para remielinización, en donde dicho inhibidor es un anticuerpo o un fragmento Fab, F (ab’) 2, Fv o scFv del mismo, o un aptámero, todos capaces de unirse a un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18, 20, 23 o 25, o es una molécula de ácido nucleico específica que interactúa con un polinucleótido que codifica dicho polipéptido.

8. Uso de un inhibidor de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para modificar y/o alterar la diferenciación de mastocitos neuronales y/o sus progenitores, en donde dicho inhibidor es un anticuerpo o un fragmento Fab, F (ab’) 2, Fv o scFv del mismo, o un aptámero, todos capaces de unirse a un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18, 20, 23 o 25, o es una molécula de ácido nucleico específica que interactúa con un polinucleótido que codifica dicho polipéptido.

9. Uso de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para evitar o tratar enfermedades o afecciones asociadas con desarrollo colateral excesivo de las fibras nerviosas.

10. Uso de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para evitar o tratar tumor el crecimiento o formación de metástasis de tumor.

11. Uso de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para evitar, aliviar o tratar enfermedades o afecciones asociadas con la actividad de las células inmunes autorreactivas o con células inflamatorias sobrerreactivas.

12. Uso de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de procesos de inflamación y/o alergias, para la curación de heridas o para la supresión/alivio de formación de cicatrices.

13. Uso de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 10 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido como un marcador de mastocitos.

14. Uso de un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs 18, 19, 20, 23 o 25 o de un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para aliviar, evitar y/o tratar trastornos hemorrágicos y/o homoestáticos y/o daño vascular.

15. El uso de de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, en donde dicho polipéptido es soluble.

16. Uso de un anticuerpo o un aptámero capaz de unirse a un polipéptido que tiene o comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18, 19, 20, 23 o 25, o una molécula de ácido nucleico específica que interactúa con un polinucleótido que codifica dicho polipéptido para la preparación de una composición diagnóstica para detectar las disposiciones o trastornos neurológicos, neurodegenerativos de la misma.