Uso de un anticuerpo antagonista anti-NGF en la preparación de un medicamento para mejorar la rigidez en unindividuo que tiene osteoartritis.

Procedimientos para tratar dolor por osteoartritis administrando un antagonista del factor de crecimiento nervioso y composiciones que contienen el mismo.

Campo de la invención

La invención se refiere a anticuerpos anti-NGF (tal como anticuerpos antagonista anti-NGF) . La invención se refiere adicionalmente al uso de un anticuerpo antagonista anti-NGF en la preparación de un medicamento para la mejora de la rigidez en un individuo que tiene osteoartritis.

Antecedentes de la invención

El factor de crecimiento nervioso (NGF) fue la primera neurotrofina en identificarse, y su función en el desarrollo y la

supervivencia de neuronas tanto periféricas como centrales ha sido bien caracterizada. Se ha mostrado que el NGF es un factor de supervivencia y mantenimiento crítico en el desarrollo de neuronas sensitivas simpáticas y embrionarias periféricas y de neuronas colinérgicas del prosencéfalo basal. Smeyne y col., Nature 368:246-249 (1994) y Crowley y col., Cell 76:1001-1011 (1994) . El NGF regula por incremento la expresión de neuropéptidos en neuronas sensitivas (Lindsay y Harmer, Nature 337:362-364 (1989) ) y su actividad es mediada por dos receptores

unidos a membrana diferentes, el receptor de tirosina cinasa TrkA y el receptor de neurotrofina común p75 (algunas veces llamado receptores de NGF de “alta afinidad” y “baja afinidad”, respectivamente) . Chao y col., Science 232:518-521 (1986) . El receptor p75 está estructuralmente relacionado con otros miembros de la familia de receptores del factor de necrosis tumoral (Chao y col., Science 232:518-521 (1986) ) . Para una revisión sobre NGF, véanse Huang y col., Annu. Rev. Neurosci. 24:677-736 (2001) ; Bibel y col., Genes Dev. 14:2919-2937 (2000) . Se ha

determinado la estructura cristalina de NGF y NGF en complejo con el receptor trkA. Véase Nature 254:411 (1991) ; Nature 401:184-188 (1996) .

Además de sus efectos en el sistema nervioso, el NGF se ha implicado cada vez más en procedimientos fuera del sistema nervioso. Por ejemplo, se ha mostrado que el NGF potencia la permeabilidad vascular (Otten y col., Eur J Pharmacol. 106:199-201 (1984) ) , potencia respuestas inmunitarias de linfocitos T y B (Otten y col., Proc. Natl. Acad 25 Sci. USA 86:10059-10063 (1989) ) , induce diferenciación de linfocitos y proliferación de mastocitos y produce la liberación de señales biológicas solubles de mastocitos (Matsuda y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:6508-6512 (1988) ; Pearce y col., J. Physiol. 372:379-393 (1986) ; Bischoff y col., Blood 79:2662-2669 (1992) ; Horigome y col., J. Biol. Chem. 268:14881-14887 (1993) ) . Aunque se ha mostrado que el NGF exógenamente añadido puede tener todos estos efectos, es importante observar que sólo se ha mostrado raramente que el NGF endógeno es importante

en cualquiera de estos procedimientos in vivo (Torcia y col., Cell. 85 (3) :345-56 (1996) ) . Por tanto, no está claro qué podría ser ese efecto, si lo hubiera, para inhibir la bioactividad de NGF endógeno.

El NGF es producido por varios tipos de células que incluyen mastocitos (Leon y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3739-3743 (1994) ) , linfocitos B (Torcia y col., Cell 85:345-356 (1996) , queratinocitos (Di Marco y col., J. Biol. Chem. 268:22838-22846) ) , células de músculo liso (Ueyama y col., J. Hypertens. 11:1061-1065 (1993) ) , fibroblastos

(Lindholm y col., Eur. J. Neurosci. 2:795-801 (1990) ) , células epiteliales bronquiales (Kassel y col., Clin. Exp. Allergy 31:1432-40 (2001) ) , células mesangiales renales (Steiner y col., Am. J. Physiol. 261:F792-798 (1991) ) y miotubos de músculo esquelético (Schwartz y col., J Photochem. Photobiol. B66:195-200 (2002) ) . Se han encontrado receptores de NGF en una variedad de tipos de células fuera del sistema nervioso. Por ejemplo, se ha encontrado TrkA en monocitos humanos, linfocitos T y B y mastocitos.

Se ha observado una asociación entre niveles de NGF elevados y una variedad de afecciones inflamatorias en pacientes humanos, además de en varios modelos animales. Éstas incluyen lupus eritematoso sistémico (Bracci-Laudiero y col., Neuroreport 4:563-565 (1993) ) , esclerosis múltiple (Bracci-Laudiero y col., Neurosci. Lett. 147:9-12 (1992) ) , psoriasis (Raychaudhuri y col., Acta Derm. l'enereol. 78:84-86 (1998) ) , artritis (Falcim y col., Ann. Rheum. Dis. 55:745-748 (1996) ) , cistitis intersticial (Okragly y col., J. Urology 161:438-441 (1999) ) y asma (Braun y col., Eur.

45 J Immunol. 28:3240-3251 (1998) ) .

Coherentemente, un nivel elevado de NGF en tejidos periféricos está asociado a hiperalgesia e inflamación y se ha observado en varias formas de artritis. La membrana sinovial de pacientes afectados por artritis reumatoide expresa altos niveles de NGF, mientras que en la membrana sinovial no inflamada se ha informado que el NGF es indetectable (Aloe y col., Arch. Rheum. 35:351-355 (1992) ) . Se observaron resultados similares en ratas con artritis 50 reumatoide experimentalmente inducida (Aloe y col., Clin. Exp. Rheumatol. 10:203-204 (1992) ) . Se ha informado de niveles elevados de NGF en ratones artríticos transgénicos, junto con un aumento en el número de mastocitos (Aloe y col., Int. J. Tissue Reactions-Exp. Clin. Aspects 15:139-143 (1993) ) . La publicación PCT nº WO 02/096458 desvela el uso de anticuerpos anti-NGF de ciertas propiedades en el tratamiento de diversos trastornos relacionados con NGF tales como afección inflamatoria (por ejemplo, artritis reumatoide) . Se ha informado que un anticuerpo anti-NGF 55 purificado inyectado en ratones transgénicos artríticos que llevan el gen factor de necrosis tumoral a humano (TNFa) produjo la reducción en el número de mastocitos, además de una disminución en los niveles de histamina y sustancia P dentro de la membrana sinovial de ratones con artritis (Aloe y col., Rheumatol. Int. 14: 249-252 (1995) ) . Se ha mostrado que la administración exógena de un anticuerpo contra NGF redujo el nivel potenciado de TNF-a

que se produce en ratones artríticos (Manni y col., Rheumatol. Int. 18: 97-102 (1998) ) .

Por tanto, se observó un aumento de la expresión de NGF y el receptor de NGF de alta afinidad (TrkA) en condrocitos de osteoartritis humana (Iannone y col., Rheumatology 41:1413-1418 (2002) ) .

Se ha informado de anticuerpos de roedor antagonista anti-NGF. Véase, por ejemplo, Hongo y col., Hybridoma (2000) 19 (3) :215-227; Ruberti metal. (1993) Cell. Molec. Neurobiol. 13 (5) : 559-568. Sin embargo, si se usan anticuerpos de roedor terapéuticamente en seres humanos, una respuesta de anticuerpos humanos anti-murinos se desarrolla en números significativos de individuos tratados. Además, las funciones efectoras de anticuerpos de ratón han demostrado ser menos eficientes en el contexto humano. Por tanto, hay una gran necesidad de anticuerpos antagonista anti-NGF, que incluyen anticuerpos antagonista anti-NGF humanizados.

Breve resumen de la invención

En un aspecto, la invención proporciona el uso de un anticuerpo antagonista anti-NGF en la preparación de un medicamento para mejorar la rigidez en un individuo que tiene osteoartritis. La invención proporciona además un anticuerpo antagonista anti-NGF para su uso en mejorar la rigidez en un individuo que tiene osteoartritis. Otras características de la invención se proporcionan en las reivindicaciones adjuntas.

En un aspecto, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado y madurado por afinidad, E3, que se une específicamente al factor de crecimiento nervioso (“NGF”) humano y de roedor. Las secuencias de aminoácidos de las regiones variables de la cadena pesada y la cadena ligera de E3 se muestran en las Figuras 1A (SEC ID Nº:1) y 1B (SEC ID Nº:2) , respectivamente. Las porciones de CDR del anticuerpo E3 (incluyendo CDR de Chothia y Kabat) se representan en diagramas en las Figuras 1A y 1B. Las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesadas y ligeras de E3, y de las CDR extendidas individuales, también se muestran más adelante (véase, “secuencias de anticuerpos”, más adelante) .

En otro aspecto, el anticuerpo es un anticuerpo que comprende un fragmento o una región del anticuerpo E3 (indistintamente llamado “E3” en este documento) . En una realización, el fragmento es una cadena ligera del anticuerpo E3 como se muestra en la Figura 1B. En otra realización, el fragmento es una cadena pesada del anticuerpo E3 como se muestra en la... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo antagonista anti-NGF en la preparación de un medicamento para mejorar la rigidez en un individuo que tiene osteoartritis.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el individuo es un ser humano.

3. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es para administrar a una frecuencia de dosificación en un intervalo de una vez cada semana a una vez cada doce semanas.

4. El uso de la reivindicación 3, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es para administrar una vez cada ocho semanas.

5. El uso de la reivindicación 3, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es para administrar una vez cada mes,

una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, una vez cada cuatro meses, una vez cada cinco meses o una vez cada seis meses.

6. El uso de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es para administrar a una dosis en un intervalo de 3 μg/kg a 1 mg/kg.

7. El uso de la reivindicación 6, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es para administrar a una dosis de 100 15 μg/kg o de 300 μg/kg.

8. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es para administrar intravenosamente o subcutáneamente.

9. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es un anticuerpo monoclonal.

10. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es un anticuerpo humanizado.

11. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF se une a NGF humano.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF se une adicionalmente a NGF de 25 roedor.

13. El uso de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF:

(a) se une a NGF con una KD inferior a aproximadamente 2 nM; y/o

(b) inhibe la supervivencia dependiente de NGF humano de neuronas trigeminales E13.5 de ratón con una CI50 de 100 pM o menor en la que la CI50 se mide en presencia de NGF humano 15 pM; y/o

(c) inhibe la supervivencia dependiente de NGF humano de neuronas trigeminales E13.5 de ratón con una CI50 de 10 pM o menor en la que la CI50 se mide en presencia de 1, 5 pM de NGF.

14. El uso de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF comprende (i) una región variable de la cadena pesada que comprende:

(a) una región CDR1 que tiene la secuencia GFSLIGYDLN; 35 (b) una región CDR2 que tiene la secuencia IIWGDGTTDYNSAVKS; y

(c) una región CDR3 que tiene la secuencia GGYWYATSYYFDY; y (ii) una región variable de la cadena ligera que comprende:

(a) una región CDR1 que tiene la secuencia RASQSISNNLN;

(b) una región CDR2 que tiene la secuencia YTSRFHS; y 40 (c) una región CDR3 que tiene la secuencia QQEHTLPYT.

15. El uso de la reivindicación 14, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es un anticuerpo que comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia:

(b) una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia:

16. El uso de la reivindicación 15, en el que el anticuerpo antagonista anti-NGF es un anticuerpo que comprende:

(a) una cadena pesada que tiene la secuencia:

(b) una cadena ligera que tiene la secuencia:

17. Un anticuerpo antagonista anti-NGF para su uso en mejorar la rigidez en un individuo que tiene osteoartritis.

18. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo antagonista anti-NGF y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su uso en mejorar la rigidez en un individuo que tiene osteoartritis.

FIGURA 1ACDR: cursiva en negrita = Kabat; subrayada = Chothia

1A) REGIÓN VARIABLE DE LA CADENA PESADA

1 = anticuerpo 911 de ratón (CDR)

2 = línea germinal aceptora humana VH4-59

3 = injertada con CDR

4 = 3 + una mutación de la región estructural

= 4 + H1, H2 de maduración por afinidad6 = 5 + H3 de maduración por afinidad (región variable

de la cadena pesada del anticuerpo 3E)

FIGURA 1A (continuación)

FIGURA 1B

1B) REGIÓN VARIABLE DE LA CADENA LIGERA

1 = anticuerpo 911 de ratón (CDR)

2 = línea germinal aceptora humana 08

3 = injertada con CDR

4 = 3 + L1, L2 de maduración por afinidad

= 4 + L3 de maduración por afinidad (región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3E)

FIGURA 2

Db.911.3E estándar; ADN circular; 1429 pbEste archivo ha sido creado por Vector NTI

FIGURA 3

Eb.911.3E estándar; ADN circular; 729 pb Este archivo ha sido creado por Vector NTI

FIGURA 23A NUMERACIÓN DEL DOMINIO VARIABLE DE LA CADENA PESADA DE 3E

FIGURA 23A (continuación)

FIGURA 23B NUMERACIÓN DEL DOMINIO VARIABLE DE LA CADENA LIGERA DE 3E

FIGURA 23B (continuación)