Un anticuerpo anti factor de crecimiento nervioso (NGF) o fragmento del mismo,

que comprende:

(a) tres CDR de una región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 1; y

(b) tres CDR de una región variable de cadena ligera de SEC ID Nº: 2;

en el que las CDR son CDR de Kabat, CDR de Chothia o una combinación de CDR de Kabat y Chothia, y uniéndose el anticuerpo o fragmento del mismo con NGF humano con una KD de 2 nM o menos como se determina por resonancia de plasmón superficial BIAcore.

Anticuerpos anti-NGF y procedimientos que usan los mismos Campo de la invención La invención se refiere a anticuerpos anti-NGF (tales como anticuerpos antagonistas anti-NGF) . La invención se 5 refiere además al uso de tales anticuerpos en el tratamiento y/o prevención de dolor, incluyendo dolor postquirúrgico, dolor de artritis reumatoide y dolor osteoartrítico.

Antecedentes de la invención

El factor de crecimiento nervioso (NGF) fue la primera neurotrofina que se identificó y su papel en el desarrollo y supervivencia de neuronas tanto periféricas como centrales se han caracterizado bien. Se ha mostrado que NGF es 10 un factor de supervivencia y mantenimiento crítico en el desarrollo de neuronas sensoriales simpáticas periféricas y embrionarias y de neuronas colinérgicas del prosencéfalo basal. Smeyne y col., Nature 368: 246-249 (1994) y Crowley y col., Cell 76: 1001-1011 (1994) . NGF regula positivamente la expresión de neuropéptidos en neuronas sensoriales (Lindsay y Harmer, Nature 337: 362-364 (1989) ) y su actividad está mediada a través de dos receptores unidos a membrana diferentes, el receptor TrkA y el receptor de neurotrofina común p75 (en ocasiones denominados receptores de NGF de "alta afinidad" y de "baja afinidad" respectivamente) . Chao y col., Science 232: 518-521 (1986) . Para una revisión sobre NGF, véase Huang y col., Annu. Rev. Neurosci. 24: 677-736 (2001) ; Bibel y col., Genes Dev. 14: 2919-2937 (2000) . Se ha determinado la estructura cristalina de NGF y NGF en complejo con receptor trkA. Véase Nature 254: 411 (1991) ; Nature 401:184-188 (1996) .

El factor de crecimiento nervioso (NGF) fue la primera neurotrofina que se identificó y su papel en el desarrollo y supervivencia de neuronas tanto periféricas como centrales se han caracterizado bien. Se ha mostrado que NGF es un factor de supervivencia y mantenimiento crítico en el desarrollo de neuronas sensoriales simpáticas periféricas y embrionarias y de neuronas colinérgicas del prosencéfalo basal. (Smeyne y col., Nature 368: 246-249 (1994) y Crowley y col., Cell 76: 1001-1011 (1994) ) . NGF regula positivamente la expresión de neuropéptidos en neuronas sensoriales (Lindsay y Harmer, Nature 337: 362-364 (1989) ) y su actividad está mediada a través de dos receptores unidos a membrana diferentes, el receptor de tirosina quinasa TrkA y el receptor de p75 que está estructuralmente relacionado con otros miembros de la familia de receptores del factor de necrosis tumoral (Chao, y col., Science 232: 518-521 (1986) ) .

Además de sus efectos en el sistema nervioso, NGF se ha implicado crecientemente en procesos fuera del sistema nervioso. Por ejemplo, se ha mostrado que NGF potencia la permeabilidad vascular (Otten, y col., Eur J Pharmacol. 30 106: 199-201 (1984) ) , potencia las respuestas inmunes de linfocitos T y B (Otten, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA

86: 10059-10063 (1989) ) , induce diferenciación de linfocitos y proliferación de mastocitos y provoca la liberación de señales biológicas solubles de mastocitos (Matsuda, y col., Proc. Natl. Acad Sci. USA 85: 6508-6512 (1988) ; Pearce, y col., J. Physiol. 372: 379-393 (1986) ; Bischoff, y col., Blood 79: 2662-2669 (1992) ; Horigome, y col., J. Biol. Chem.

268: 14881-14887 (1993) ) . Aunque se ha mostrado que NGF añadido de forma exógena es capaz de tener todos estos efectos, es importante observar que se ha mostrado sólo en pocas ocasiones que NGF endógeno es importante en cualquiera de estos procesos in vivo (Torcia, y col., Cell. 85 (3) : 345-56 (1996) ) . Por lo tanto, no está claro cuál podría ser el efecto, si lo hubiera, de inhibir la bioactividad de NGF endógeno.

NGF se produce por varios tipos celulares incluyendo mastocitos (Leon, y col., Proc. Natl. Acad Sci. USA 91: 37393743 (1994) ) , linfocitos B (Torcia, y col., Cell 85: 345-356 (1996) , queratinocitos (Di Marco, y col., J. Biol. Chem. 268: 40 22838-22846) , células de músculo liso (Ueyama, y col., J. Hypertens. 11: 1061-1065 (1993) ) , fibroblastos (Lindholm, y col., Eur. J. Neurosci. 2:795-801 (1990) ) , células epiteliales bronquiales (Kassel, y col., Clin, Exp. Allergy 31: 143240 (2001) ) , células mesangiales renales (Steiner, y col., Am. J. Physiol. 261: F792-798 (1991) ) y miotubos de músculo esquelético (Schwartz, y col., J Photochem. Photobiol. B66: 195-200 (2002) ) . Se han descubierto receptores de NGF en una diversidad de tipos celulares fuera del sistema nervioso. Por ejemplo se ha descubierto 45 TrkA en monocitos humanos, linfocitos T y B y mastocitos.

Se ha observado una asociación entre aumento de los niveles de NGF y una diversidad de afecciones inflamatorias en pacientes humanos así como varios modelos animales. Estas incluyen lupus eritematoso sistémico (Bracci-Laudiero, y col., Neuroreport 4: 563-565 (1993) ) , esclerosis múltiple (Bracci-Laudiero, y col., Neurosci. Lett. 147: 912 (1992) ) , psoriasis (Raychaudhuri, y col., Acta Derm. l'enereol. 78: 84-86 (1998) ) , artritis (Falcim, y col., Ann.

50 Rheum. Dis. 55: 745-748 (1996) ) , cistitis intersticial (Okragly, y col., J. Urology 161: 438-441 (1999) ) y asma (Braun, y col., Eur. Jlmmunol. 28: 3240-3251 (1998) ) .

Sistemáticamente, un nivel elevado de NGF en tejidos periféricos está asociado con hiperalgesia e inflamación y se ha observado en varias formas de artritis. El sinovio de los pacientes afectados por artritis reumatoide expresa altos niveles de NGF mientras que se ha indicado que en sinovio no inflamado NGF es indetectable (Aloe, y col., Arch. 55 Rheum. 35: 351-355 (1992) ) . Se vieron resultados similares en ratas con artritis reumatoide inducida experimentalmente (Aloe, y col., Clin. Exp. Rheumatol. 10: 203-204 (1992) ) . Se han indicado niveles elevados de NGF en ratones artríticos transgénicos junto con una aumento del número de mastocitos (Aloe, y col., Int. J. Tissue Reactions-Exp. Clin. Aspects 15: 139-143 (1993) ) . La Publicación de PCT Nº WO 02/096458 desvela el uso de

anticuerpos anti-NGF de ciertas propiedades en el tratamiento de diversos trastornos relacionados con NGF tales como afección inflamatoria (por ejemplo, artritis reumatoide) . Se ha indicado que un anticuerpo anti-NGF purificado inyectado en ratones transgénicos artríticos que portan el gen del factor de necrosis tumoral a (TNF-a) humano provocó reducción del número de mastocitos, así como una reducción de los niveles de histamina y sustancia P dentro del sinovio de ratones artríticos (Aloe y col., Rheumatol. Int. 14: 249-252 (1995) ) . Se ha mostrado que la administración exógena de un anticuerpo de NGF redujo el nivel potenciado de TNF-a que aparece en ratones artríticos (Manni y col., Rheumatol. Int. 18: 97-102 (1998) ) .

Además, se observó expresión aumentada de NGF y receptor de NGF de alta afinidad (TrkA) en condrocitos de osteoartritis humana (Iannone y col., Rheumatology 41: 1413-1418 (2002) ) .

Se han indicado anticuerpos antagonistas anti-NGF de roedores. Véase., por ejemplo, Hongo y col, Hybridoma (2000) 19 (3) : 215-227; Ruberti y col. (1993) Cell. Molec. Neurobiol. 13 (5) : 559-568. Sin embargo, cuando se usan anticuerpos de roedores de forma terapéutica en seres humanos, se desarrolla una respuesta de anticuerpo antimurino humano en números significativos de individuos tratados. Además, las funciones efectoras de anticuerpos de ratón han demostrado ser menos eficaces en el contexto humano. Por lo tanto, existe una necesidad importante de anticuerpos antagonistas anti-NGF incluyendo anticuerpos antagonistas anti-NGF humanizados.

Breve sumario de la invención

La invención desvelada en el presente documento se refiere a anticuerpos para factor de crecimiento nervioso.

En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-factor de crecimiento nervioso (NGF) o fragmento del mismo, que comprende:

(a) tres CDR de una región variable de cadena pesada de SEC ID Nº 1; y

(b) tres CDR de una región variable de cadena ligera de SEC ID Nº 2;

en el que las CDR son CDR de Kabat, CDR de Chothia o una combinación de CDR de Kabat y Chothia, y uniéndose el anticuerpo o fragmento del mismo a NGF humano con una KD de 2 nM o menos según se determina por resonancia de plasmón superficial de BIAcore.

En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo anti-factor de crecimiento nervioso (NGF) o un fragmento del mismo, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende:

(i) una región CDR1 de SEC ID Nº 3;

(ii) una región CDR2 de SEC ID Nº 4;

(iii) una región CDR3 seleccionada del grupo que consiste... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti factor de crecimiento nervioso (NGF) o fragmento del mismo, que comprende:

(a) tres CDR de una región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 1; y

(b) tres CDR de una región variable de cadena ligera de SEC ID Nº: 2;

en el que las CDR son CDR de Kabat, CDR de Chothia o una combinación de CDR de Kabat y Chothia, y uniéndose el anticuerpo o fragmento del mismo con NGF humano con una KD de 2 nM o menos como se determina por resonancia de plasmón superficial BIAcore.

2. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende:

(a) una región CDR1 mostrada en SEC ID Nº: 3;

(b) una región CDR2 mostrada en SEC ID Nº: 4; y

(c) una región CDR3 mostrada en SEC ID Nº: 5.

3. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 1 o 2, comprendiendo el anticuerpo una región variable de cadena ligera que comprende:

(a) una región CDR1 mostrada en SEC ID Nº: 6;

(b) una región CDR2 mostrada en SEC ID Nº: 7; y

(c) una región CDR1 mostrada en SEC ID Nº: 8.

4. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo el anticuerpo o fragmento del mismo adicionalmente una región constante de IgG2a de cadena pesada humana.

5. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 4, comprendiendo adicionalmente el anticuerpo o fragmento del mismo una región constante kappa de cadena ligera humana.

6. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 4 o 5, en el que la región constante de IgG2a de cadena pesada humana está modificada.

7. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 6, en el que la región constante de IgG2a de cadena pesada humana comprende las mutaciones A330P331 a S330S331, numeración de aminoácidos con referencia a la secuencia de IgG2a de tipo silvestre.

8. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 1: y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de SEC ID Nº: 2.

9. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 8, comprendiendo el anticuerpo:

(a) una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 16; y

(b) una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 17.

10. Un anticuerpo anti factor de crecimiento nervioso (NGF) o fragmento del mismo, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende:

(i) una región CDR1 de SEC ID Nº: 3;

(ii) una región CDR2 de SEC ID Nº: 4;

(iii) una región CDR3 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº: 58 y 60; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende:

(i) una región CDR1 de SEC ID Nº: 6;

(ii) una región CDR2 de SEC ID Nº: 7;

(iii) una región CDR3 seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº: 57, 59 y 61;

uniéndose el anticuerpo o fragmento del mismo a NGF humano con una KD de 2 nM o menos como se determina por resonancia de plasmón superficial de BIAcore.

11. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 10, comprendiendo adicionalmente el anticuerpo o fragmento del mismo una región constante de IgG2a de cadena pesada humana.

12. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 11, comprendiendo adicionalmente el

anticuerpo o fragmento del mismo una región constante kappa de cadena ligera humana.

13. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 11 o 12, en el que la región constante de IgG2a de cadena pesada humana está modificada.

14. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 13, en el que la región constante de IgG2a de cadena pesada humana comprende las mutaciones A330P331 a S330S331, numeración de aminoácidos con referencia a la secuencia de IgG2a de tipo silvestre.

15. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, uniéndose adicionalmente al anticuerpo o fragmento del mismo a NGF de roedor.

16. Una composición farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de cualquiera de las reivindicaciones precedentes y (b) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

17. Un kit que comprende el anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a

15.

18. Un procedimiento para preparar el anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, comprendiendo dicho procedimiento expresar un polinucleótido que codifica el anticuerpo o fragmento del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en una célula huésped no humana in vitro.

19. Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

20. El polinucleótido de la reivindicación 19, comprendiendo el polinucleótido la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº: 65.

21. El polinucleótido de la reivindicación 19, comprendiendo el polinucleótido la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº: 66.

22. El polinucleótido de la reivindicación 19, comprendiendo el polinucleótido la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº: 67.

23. El polinucleótido de la reivindicación 19, comprendiendo el polinucleótido la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº: 68.

24. El polinucleótido de la reivindicación 19, comprendiendo el polinucleótido la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº: 66 y la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº: 68.

25. Un vector que comprende un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

26. Una célula huésped aislada que comprende un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15.

27. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para su uso en el tratamiento del dolor.

28. Un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de la reivindicación 27, comprendiendo el anticuerpo o fragmento del mismo las secuencias de aminoácidos como se muestran en SEC ID Nº: 1 y 2.

29. Uso de un anticuerpo anti-NGF o fragmento del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en la preparación de un medicamento para el tratamiento del dolor.

30. Uso de la reivindicación 29, en el que el anticuerpo o fragmento del mismo comprende las secuencias de aminoácidos como se muestran en SEC ID Nº: 1 y 2.

Figura 2

Patrón Db.911.3E; ADN circular; ; 1429 PB. Este archivo se creó mediante Vector NTI http:/ /www.informaxinc.com/ VNTDATE|285871584| VNTDBDATE|285873257| VNTAUTHORNAME|Demo User| Secuencia 1429 PB; 331 A; 440 C; 380 G; 278 t;

Figura 3

Patrón Eb.911.3E; ADN circular; ; 729 PB. Este archivo se creó mediante Vector NTI http: / /www.informaxinc.com/ VNTDATE|285871514| VNTDBDATE|285872959| VNTAUTHORNAME|Demo User| Secuencia 729 PB: 182 A; 231 C; 161 G; 154 t; 1 distinto;

FIGURA 23A NUMERACIÓN DE DOMINIO VARIABLE DE CADENA PESADA DE 3E A-NUMERACIÓN SECUENCIAL DE PROTEÍNAS B-NUMERACIÓN DE KABAT C-NUMERACIÓN DE CHOTHIA

CAJAS: CDR COMO KABAT , SUBRAYADO = CDR COMO CHOTHIA

FIGURA 23A (CONT.)

FIGURA 23B NUMERACIÓN DE DOMINIO VARIABLE DE CADENA LIGERA DE 3E

CAJAS: CDR COMO KABAT , SUBRAYADO = CDR COMO CHOTHIA FIGURA 23B (CONT.)