Un polipéptido de FGF-21 que comprende una secuencia mostrada en SEC ID Nº:

1-7, excepto que se sustituyeun aminoácido por un aminoácido no codificado de forma natural en la posición 108 (SEC ID Nº: 1 o los aminoácidoscorrespondientes en SEC ID Nº: 2-7), en el que un polímero soluble en agua se une al aminoácido no codificado deforma natural presente en dicho polipéptido de FGF-21.

Polipéptidos de FGF-21 modificados y sus usos

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica la prioridad y el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos Nº 5 de Serie 60/921.297, presentada el 30 de marzo de 2007, y de la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos Nº de Serie 60/988.060, presentada el 14 de noviembre de 2007.

Campo de la invención La presente invención se refiere a polipéptidos de FGF-21 opcionalmente modificados con al menos un aminoácido no codificado de forma natural.

10 Antecedentes de la invención

Los factores de crecimiento de fibroblastos son polipéptidos grandes expresados ampliamente en tejidos en desarrollo y adultos (Baird y col., Cancer Cells, 3: 239-243, 1991) y desempeñan papeles cruciales en múltiples funciones fisiológicas incluyendo angiogénesis, mitogénesis, formación de patrones, diferenciación celular, regulación metabólica y reparación de lesiones tisulares (McKeehan y col., Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 59: 15 135-176, 1998; Burgess, W. H. y col., Annu. Rev. Biochem. 58: 575-606 (1989) ) . Los factores de crecimiento de fibroblastos prototípicos (FGF) , FGF-1 y FGF-2, se aislaron originalmente de cerebro e hipófisis como mitógenos para fibroblastos. Se identificó que FGF-3 era una diana común para activación por el virus de tumor mamario de ratón (Dickson y col., Ann. N.Y. Acad. Sci. 638: 18-26 (1991) ; FGF-4 a FGF-6 se identificaron como productos de oncogenes (Yoshida y col., Ann. NY Acad. Sci. 638: 27-37 (1991) ; Goldíarb y col., Ann. NY Acad. Sci 638: 38-52 20 (1991) ; Coulier y col., Ann. NY Acad. Sci. 638: 53-61 (1991) ) . FGF-10 se identificó a partir de pulmón de rata por reacción en cadena de la polimerasa basada en homología (PCR) (Yamasaki y col., J. Biol. Chem. 271: 1591815921 (1996) ) . FGF-11 a FGF-14 (factores homólogos de FGF (FHF) 1 a 4) se identificaron a partir de la retina humana por una combinación de secuenciación de ADNc aleatoria, búsquedas en bases de datos y PCR basada en homología (Smallwood y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 9850-9857 (1996) ) . FGF-15 se identificó como una 25 diana corriente abajo de una oncoproteína de homeodominio quimérica (McWhirter y col., Development 124: 32213232 (1997) ) . FGF-16, FGF-17, y FGF-18 se identificaron a partir de corazón de rata y embriones por PCR basada en homología, respectivamente (Miyake y col., Biochem. Biophys. Res. Commun. 243: 148-152 (1998) ; Hoshikawa y col. Biochem. Biophys. Res. Commun. 244: 187-191 (1998) ; Ohbayashi y col., J. Biol. Chem. 273:1 8161-18164 (1998) ) . FGF-19 se identificó a partir de cerebro fetal humano por búsqueda en una base de datos (Nishimura y col., Biochim. Biophys. Acta 1444: 148-151 (1999) ) . Tienen un núcleo de º120 restos de aminoácidos con º30 a 60% de identidad de aminoácidos.

Los modelos animales, sobreexpresión y análisis de mutaciones de origen natural implican a factores de crecimiento de fibroblastos y sus receptores en una amplia serie de enfermedades (por ejemplo, Wilkie y col., Current Biology, (1995) 5: 500-507; Pugh-Humphreys y col, En: The Cytokine Handbook, A. Thomson ed, 2ª edición, Academic 35 Press, Harcourt Brace & co. publishers, Londres, pág. 525-566) , lo que sugiere que la regulación de la actividad podría usarse para tratamiento. Por ejemplo, la inhibición del factor de crecimiento de fibroblastos 2 por el compuesto Suramina evita la neovascularización y crecimiento tumoral en ratones (Pesenti y col., British Journal of Cancer, 66: 367-372) . Los factores de crecimiento de fibroblastos también actúan en la angiogénesis (Lyons, M. K., y col., Brain Res. (1991) 558: 315-320) , curación de heridas (Uhl, E., y col., Br. J. Surg. (1993) 80: 977-980, 1993) , astrogliosis, proliferación y diferenciación de células gliales (Biagini, G. y col., Neurochem. Int. (1994) 25: 17-24) , vasodilatación cerebral (Tanaka, R. y col., Stroke (1995) 26: 2154-2159) y procesos neurotróficos/neuromoduladores.

El factor de crecimiento de fibroblastos también tiene múltiples efectos positivos que incluyen el flujo sanguíneo y protección de toxicidad por calcio para mejorar el resultado en isquemia cerebral (Mattson, M. P. y col., Semin.

45 Neurosci. (1993) 5: 295-307; Doetrocj. W. D. y col., J. Neurotrauma (1996) 13: 309-316) . El tratamiento con FGF básico promueve la neoangiogénesis en miocardio isquémico (Schumacher y col., Circulation (1998) 97: 645-650) . El FGF básico mejora la recuperación funcional y promueve el crecimiento neuronal después de un infarto cerebral focal (Kawamata y col., Proc.Natl. Acad. Sci. (1997) 94 (15) : 8179-84) . De acuerdo con la bibliografía publicada, la familia de FGF consiste en al menos veintidós miembros (Reuss y col., Cell Tissue Res. 313: 139-157 (2003) ) .

50 Se ha notificado que el factor de crecimiento de fibroblastos 21 (FGF-21) se expresa preferentemente en el hígado (Nishimura y col., Biochimica et Biophysica Acta, 1492: 203-206 (2000) ; documento WO 01/36640; y documento WO 01/18172) y se ha descrito como un tratamiento para enfermedad vascular isquémica, curación de heridas y enfermedades asociadas con pérdida de células o función pulmonares, bronquiales o alveolares y otros numerosos trastornos. FGF-21 se expresa principalmente en hígado, riñón y tejido muscular (véase el Ejemplo 2 de la 55 Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040259780) . El gen de FGF-21 se compone de 3 exones y se localiza en el cromosoma 19. A diferencia de otros FGF, el FGF-21 no tiene efectos proliferativos y tumorigénicos (Genome Biol. 2001; 2 (3) : REVIEWS3005) .

La Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20010012628 describe una secuencia de nucleótidos y proteica para FGF-21 humano (véase la SEC ID Nº: 1 y 2, respectivamente de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20010012628) . La SEC ID Nº: 2 en la publicación anteriormente mencionada, denominada sbgFGF-19, es de 209 aminoácidos de longitud y contiene una secuencia líder de 28 aminoácidos en el extremo N terminal. La secuencia de FGF-21 humana presentada como SEC ID Nº: 3 en el presente documento es la misma secuencia que la SEC ID Nº: 2 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20010012628. Esta secuencia tiene un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) con prolina (P) en la posición 174, denominado en lo sucesivo en el presente documento la “forma P de 209 aminoácidos de FGF-21”.

La Patente de Estados Unidos Nº 6.716.626 analiza FGF-21 humano y proteínas homólogas en otros mamíferos, particularmente ratones y ratas. El FGF de ratón mostrado como SEC ID Nº: 1 de la Patente de Estados Unidos Nº

6.716.626 se expresaba en gran medida en hígado y se expresaba en los testículos y el timo, y se sugirió que el FGF-21 humano puede desempeñar un papel en el desarrollo y recuperación de enfermedades hepáticas y/o trastornos de la función testicular o función de células derivadas del timo. La SEC ID Nº: 4 de la Patente de Estados Unidos Nº 6.716.626 es de 209 aminoácidos de longitud y contiene una secuencia líder de 28 aminoácidos en el extremo N terminal. La secuencia de FGF-21 humano presentada como SEC ID Nº: 6 en el presente documento es la misma secuencia que la SEC ID Nº: 4 de la Patente de Estados Unidos Nº 6.716.626. Esta secuencia tiene un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) con leucina (L) en la posición 174, denominada en lo sucesivo en el presente documento la “forma L de 209 aminoácidos de FGF-21”.

La Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040259780 analiza el FGF-21 y presenta una secuencia de 208 aminoácidos de longitud (SEC ID Nº: 2 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040259780) y contiene una secuencia líder de 27 aminoácidos en el extremo N terminal. La secuencia de FGF-21 humana presentada como SEC ID Nº: 7 en el presente documento es la misma secuencia que la SEC ID Nº: 2 de la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040259780. Esta secuencia tiene un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) con leucina (L) en la posición 173, denominada en lo sucesivo en el presente documento la “forma L de 208 aminoácidos de FGF-21”.

Se ha mostrado que el FGF-21 estimula la captación de glucosa en adipocitos 3T3-L1 de ratón en presencia y ausencia de insulina, y reduce los niveles de glucosa, triglicéridos y glucagón en sangre, posprandiales y en ayunas, en ratones ob/ob y db/db y ratas ZDF de 8 semanas de edad de una manera dependiente de dosis, proporcionando de este modo la base para el uso... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido de FGF-21 que comprende una secuencia mostrada en SEC ID Nº: 1-7, excepto que se sustituye un aminoácido por un aminoácido no codificado de forma natural en la posición 108 (SEC ID Nº: 1 o los aminoácidos correspondientes en SEC ID Nº: 2-7) , en el que un polímero soluble en agua se une al aminoácido no codificado de forma natural presente en dicho polipéptido de FGF-21.

2. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el polipéptido está unidoa un engarce, polímero o molécula biológicamente activa.

3. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el polipéptido está unidoa un polímero bifuncional, engarce bifuncional o al menos un polipéptido de FGF-2 adicional.

4. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 3, en el que el engarce bifuncional o polímero se une a un segundo polipéptido.

5. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 4, en el que el segundo polipéptido es un polipéptido de FGF-21.

6. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el polímero soluble en agua comprende un resto de poli (etilenglicol) .

7. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el aminoácido no codificado de forma natural comprende un grupo carbonilo, un grupo aminooxi, un grupo hidracina, un grupo hidracida, un grupo semicarbacida, un grupo azida o un grupo alquino.

8. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 7, en el que el aminoácido no codificado de forma natural comprende un grupo carbonilo.

9. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el polímero soluble en agua tiene un peso molecular de entre aproximadamente 0, 1 kDa y aproximadamente 100 kDa.

10. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 9, en el que el polímero soluble en agua tiene un peso molecular de entre aproximadamente 0, 1 kDa y aproximadamente 50 kDa.

11. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, que se fabrica haciendo reaccionar un polipéptido de FGF-21 que comprende un aminoácido que contiene carbonilo con un polímero soluble en agua que comprende un grupo aminooxi, hidracina, hidracida o semicarbacida.

12. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 11, en el que el grupo aminooxi, hidracina, hidracida, o semicarbacida se une al polímero soluble en agua a través de un enlace de amida.

13. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, que se fabrica haciendo reaccionar un polímero soluble en agua que comprende un grupo carbonilo con un polipéptido que comprende un aminoácido no codificado de forma natural que comprende un grupo aminooxi, hidracina, hidracida, o semicarbacida.

14. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el polímero soluble en agua es un polímero ramificado

o de múltiples ramas.

15. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 14, en el que cada rama del polímero soluble en agua tiene un peso molecular de entre aproximadamente 1 kDa y aproximadamente 100 kDa.

16. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el aminoácido no codificado de forma natural comprende un resto de sacárido.

17. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 2, en el que el engarce, polímero o molécula biológicamente activa está unido al polipéptido mediante un resto de sacárido.

18. Una composición que comprende el polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

19. Un polipéptido de FGF-21 de acuerdo con la reivindicación 1, codificado por un polinucleótido que tiene una secuencia mostrada en SEC ID Nº: 8, 9, 10, 11, 12, 13, ó 14, comprendiendo dicho polinucleótido un codón selector.

20. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 19, en el que el polímero soluble en agua comprende un resto de poli (etilenglicol) .

21. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 19, en el que el aminoácido no codificado de forma natural comprende un grupo carbonilo, un grupo aminooxi, un grupo hidracida, un grupo hidracina, un grupo semicarbacida, un grupo azida o un grupo alquino.

22. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 20, en el que el resto de poli (etilenglicol) tiene un peso molecular de entre aproximadamente 0, 1 kDa y aproximadamente 100 kDa.

23. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 20, en el que el resto de poli (etilenglicol) es un polímero ramificado

o de múltiples ramas.

24. La composición de la reivindicación 23, en la que el resto de poli (etilenglicol) tiene un peso molecular de entre aproximadamente 1 kDa y aproximadamente 100 kDa.

25. Una composición que comprende el polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 19 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

26. Un polipéptido de FGF-21 de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende un polímero soluble en agua unido por un enlace covalente con el polipéptido de FGF-21 en el aminoácido de origen no natural.

27. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 26, en el que el polímero soluble en agua comprende un resto de poli (etilenglicol) .

28. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 7, en el que el dicho aminoácido no codificado de forma natural está unido a una molécula de poli (etilenglicol) .

29. Un polipéptido de FGF-21 de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende al menos un engarce, polímero o molécula biológicamente activa, en el que dicho engarce, polímero o molécula biológicamente activa está unida al polipéptido a través de un grupo funcional del aminoácido no codificado de forma natural, que se incorpora por ribosomas al polipéptido.

30. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 29, siendo dicho polipéptido de FGF-21 monoPEGilado.

31. Un polipéptido de FGF-21 de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende un engarce, polímero o molécula biológicamente activa, que está unido al aminoácido no codificado de forma natural, en el que dicho aminoácido no codificado de forma natural está incorporado por ribosomas en el polipéptido.

32. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 31, comprendiendo el polipéptido de FGF-21 un engarce, polímero

o molécula biológicamente activa.

33. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el aminoácido no codificado de forma natural comprende un grupo cetona.

34. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido de FGF-21 comprende una secuencia como se muestra en SEC ID Nº: 1, excepto que un aminoácido está sustituido por un aminoácido no codificado de forma natural en la posición 108.

35. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que dicho aminoácido no codificado de forma natural es para-acetil-fenilalanina.

36. El polipéptido de FGF-21 de la reivindicación 1, en el que el dicho polímero soluble en agua es un resto de poli (etilenglicol) que tiene un peso molecular de 30 kDa.

Figura 5

Sedimento de B-PER

Figura 6

Sobrenadante de B-PER

Figura7a

Figura 7b

Figura 8

Expresión de FGF-21 no marcado

Análisis de SDS-PAGE de FGF-21 expresado en E. coli

Figura 9

Purificación; FGF-21-Y83pAF no marcado

Concentración de FGF21 en suero Concentración de FGF21 en suero (ng/ml) (ng/ml)

Figura 10 FGF21 WT N-His

Concentración en suero de FGF21 WT N-His después de inyección SC sencilla en rata

Tiempo (minutos)

Concentración en suero de FGF21 WT N-His después de inyección SC sencilla en rata

Tiempo (minutos)

Figura 11

Cmáx frente a dosis

Dosis (mg/kg)

FGF21 WT N-His Valores de mejor ajuste Pendiente: 348, 5 ± 91, 22 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 11, 55 ± 30, 17 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 - 0, 03315 1/pendiente 0, 002870

Intervalos de confianza al 95% Pendiente 145, 2 a 551, 7 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 -55, 67 a 78, 77 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 - 0, 5647 a 0, 1635

Bondad del ajuste r2 0, 5934 Sy.x 49, 27

Figura 12

Semivida terminal frente a dosis

Dosis (mg/kg)

Tiempo de concentración en sueroAUCinf (ng*h/ml)

Figura 13

Concentración en suero. Tiempo frente a dosis

Dosis (mg/kg)

FGF21 WT N-His

Valores de mejor ajuste Pendiente: 1079 ± 194, 1 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 4, 274 ± 64, 19 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 - 0, 003959 1/pendiente 0, 0009265

Intervalos de confianza al 95% Pendiente 646, 9 a 1512 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 --138, 7 a 147, 3 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 - 2567 a 0, 1357

Bondad del ajuste r2 0, 7556 Sy.x 104, 8

Concentración de FGF21 en suero Concentración de FGF21 en suero (ng/ml) (ng/ml)

Figura 14 FGF21 WT derivado de periplasma Concentración en suero de FGF21 WT PP después de inyección SC sencilla en rata Tiempo (minutos)

Concentración en suero de FGF21 WT PP después de inyección SC sencilla en rata

Tiempo (minutos)

Figura 15

Cmáx frente a dosis

Dosis (mg/kg)

FGF21 WT PP

Valores de mejor ajuste Pendiente: 454, 2 ± 42, 42 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 - 19, 66 ± 14, 03 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 0, 04329 1/pendiente 0, 002202

Intervalos de confianza al 95% Pendiente 359, 6 a 548, 7 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 -50, 92 a 11, 60 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 - 0, 55351 a 0, 1176

Bondad del ajuste r2 0, 9197 Sy.x 22, 91

Figura 16

Semivida terminal frente a dosis

Dosis (mg/kg)

Tiempo de concentración en sueroAUCinf (ng*h/ml)

Figura 17

AUC frente a dosis

Dosis (mg/kg)

FGF21 WT PP

Valores de mejor ajuste Pendiente: 1565 ± 137, 1 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 -86, 76 ± 45, 33 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 0, 05474 1/pendiente 0, 0006309

Intervalos de confianza al 95% Pendiente 1280 a 1890 Ordenada en el origen cuando X = 0, 0 -187, 8 a 14, 25 Abscisa en el origen cuando Y = 0, 0 -0, 03184 a 0, 1230

Bondad del ajuste r2 0, 9304 Sy.x 74, 03

Figura 18

FGF-R-003 Comparación con WT

Semivida terminal (SC 0, 5 mg/kg) Parámetro Valor

Tabla analizada HL Columna A N-His-WT frente a frente a Columna B PP WT

Ensayo de t de muestras no relacionadas Valor p 0, 3540 Sumario Valor p ns Son las medias significativamente diferentes? (P < 0, 05) No Valor p de una o dos colas? dos colas t, df t = 0, 9772 df = 9

Artículo de ensayo Figura 19

FGF-R-003 Comparación con WT

Cmáx (SC 0, 5 mg/kg) Parámetro Valor Tabla analizada Cmáx Columna A N-His-WT frente a frente a Columna B PP WT

Ensayo de t de muestras no relacionadas Valor p 0, 1785 Sumario Valor p ns Son las medias significativamente diferentes? (P < 0, 05) No Valor p de una o dos colas? dos colas t, df t = 1, 459 df = 9

Artículo de ensayo

Tiempo de concentración en sueroAUCinf (ng*h/ml)

Figura 20

FGF-R-003 Comparación con WT

Tiempo de concentración en suero (SC 0, 5 mg/kg) Parámetro Valor Tabla analizada AUC Columna A N-His-WT frente a frente a Columna B PP WT

Ensayo de t de muestras no relacionadas Valor p 0, 4372 Sumario Valor p ns Son las medias significativamente diferentes? (P < 0, 05) No Valor p de una o dos colas? dos colas t, df t = 0, 8238 df = 7

Artículo de ensayo Concentración en suero de FGF21 Concentración en suero de FGF21 (ng/ml) (ng/ml)

PEG30K-E91 inyección SC frente a IV

Tiempo (horas)

PEG30K-E91 inyección SC

Tiempo (horas)

* Biodisponibilidad reducida Concentración en suero de FGF21

Concentración en suero de (ng/ml)

FGF21 (ng/ml)

PEG30K-E110 inyección SC frente a IV

Tiempo (horas)

PEG30K-E110 inyección SC

Tiempo (horas)

* Biodisponibilidad reducida Concentración en suero de FGF21 Concentración en suero de FGF21 (ng/ml) (ng/ml)

Figura 23

Comparación de PEG PK parte 2 Inyección SC sencilla de 0, 25 mg/kg

Tiempo (horas)

Inyección IV sencilla de 0, 25 mg/kg

Tiempo (horas)

Figura 25 Secuencia de pVK10 FGF21

Figura 26

Concentración de FGF21 en suero Concentración de FGF21 en suero (ng/ml) (ng/ml)

Evaluación farmacocinética de FGF21 marcado con N-His 6 de tipo silvestre (WT)

Tiempo (minutos)

Concentración en suero de FGF21 WT N-His después de inyección SC sencilla en rata

Tiempo (minutos)

Figura 27

Dosis (mg/kg)

B.

Semivida terminal frente a dosis

Dosis (mg/kg)

Figura 27 (continuación)

C.

Concentración en suero. Tiempo frente a dosis

Dosis (mg/kg)

Figura 28

A.

Concentración en suero de FGF21 WT PP

Tiempo (minutos)

B.

Concentración en suero de FGF21 WT PP después de inyección sencilla en rata

Tiempo (minutos)

Dosis (mg/kg)

B.

Semivida terminal frente a dosis

Dosis (mg/kg)

Figura 29 (continuación)

C.

AUC frente a dosis

Dosis (mg/kg)

Semivida Terminal (SC 0, 5 mg/kg) Cmáx (SC 0, 5 mg/kg)

Artículo de ensayo Artículo de ensayo

C.

Tiempo de concentración en suero (SC 0, 5 mg/kg)

Artículo de ensayo

Figura 31

A.

Análisis PK de rata de isómeros de FGF21

Tiempo (horas)

Figura 31 (continuación)

B.

Análisis PK de rata de isómeros de FGF21 (absorción)

Tiempo (horas)

Figura 31 (continuación)

C.

Análisis PK de rata de isómeros de FGF21

Tiempo (horas)

Figura 32

Concentración en suero de FGF21 N6-His después de inyección SC sencilla en rata

Tiempo (horas)

Figura 33

Concentración en suero de FGF21 WT N-His después de inyección sencilla en rata

Tiempo (horas)

Figura 34 Secreción de FGF21 en E. coli