Polipéptidos capaces de estimular una reacción inmune contra el cáncer.

Un polipéptido para uso como medicamento para el tratamiento de cáncer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cáncer;

en donde el polipéptido:

a) comprende una secuencia dada por la SEC ID Nº: 1 ó 2;

b) comprende 8 aminoácidos contiguos de la SEC ID Nº: 1 ó 2, con la condición de que al menos uno de dichos 8 aminoácidos contiguos proceda de la SEC ID Nº: 1; o

c) comprende 8 aminoácidos contiguos que tienen solo una, dos o tres sustituciones de aminoácidos respecto a los 8 aminoácidos contiguos descritos en anteriormente en b), con la condición de que al menos uno de los 8 aminoácidos contiguos presentes proceda de la SEC ID Nº: 1; en donde el polipéptido es capaz de inducir una respuesta de células T.

Polipeptidos capaces de estimular una reacción inmune contra el cancer La presente invención se refiere a polipeptidos y acidos nucleicos de ADN que codifican dichos polipeptidos, capaces de estimular una reacción inmune contra el cancer, a los metodos para generar linfocitos T capaces de reconocer y destruir celulas tumorales y a composiciones farmaceuticas para el tratamiento, profilaxis o diagnosis de cancer.

El cancer se desarrolla a traves de un proceso multietapa que implica varios episodios mutacionales. Estas mutaciones dan como resultado una expresión/función alterada de genes que pertenecen a dos categorías: oncogenes y genes supresores de tumores. Los oncogenes surgen en la naturaleza de proto-oncogenes a traves de mutaciones puntuales o traslocalizaciones, dando como resultado con ello un estado transformado de la celula que alberga la mutación. Los oncogenes codifican para, y función a traves de, una protefna. Los proto-oncogenes son genes normales de la celula que tienen el potencial de convertirse en oncogenes. En la mayoría de los casos, se ha demostrado que los proto-oncogenes son componentes de mecanismos de transducción de senal. Los oncogenes actuan de un modo dominante. Por otro lado, los genes supresores de tumor actuan de un modo recesivo, es decir a traves de la perdida de función, y contribuyen a la oncogenesis cuando ambos alelos que codifican la protefna funcional han sido alterados para producir productos genicos no funcionales.

En el campo de la inmunologfa de cancer humano, las dos ultimas decadas han contemplado importantes esfuerzos por caracterizar los antfgenos específicos de cancer genuinos. En particular, el esfuerzo se ha dedicado al analisis de anticuerpos para antfgenos tumorales humanos. La tecnica anterior sugiere que dichos anticuerpos pueden usarse con fines diagnósticos y terapeuticos, por ejemplo en relación con un agente anti-cancerfgeno. Sin embargo, los anticuerpos sólo se pueden unir a antfgenos tumorales que estan expuestos sobre la superficie de celulas tumorales. Por esta razón, el esfuerzo para producir un tratamiento de cancer basado en el sistema inmune del organismo ha tenido menos exito de lo anticipado.

Una caracterfstica fundamental del sistema inmune es que puede distinguir moleculas propias de no propias y normalmente no reacción contra moleculas propias. Se ha demostrado que el rechazo de tejidos u órganos injertados procedentes de otros individuos es una respuesta inmune a antfgenos extranos sobre la superficie de las celulas injertadas. La respuesta inmune comprende una respuesta humoral, mediada por anticuerpos, y una respuesta celular. Los anticuerpos son producidos y secretados por linfocitos B, y normalmente reconocen antfgenos libres en conformación nativa. Por tanto, potencialmente pueden reconocer casi cualquier sitio expuesto sobre la superficie del antfgeno. Al contrario que los anticuerpos, las celulas T, que median el brazo celular de la respuesta inmune, reconocen antfgenos solamente en el contexto de moleculas de complejo de histocompatibilidad principal (MHC, del ingles "major histocompatibility complex") , y sólo despues de un procesamiento del antfgeno apropiado. Dicho procesamiento de antfgeno normalmente consiste en la fragmentación proteolftica de la protefna, que da como resultado polipeptidos que se ajustan a la cavidad de las moleculas de MHC. Esto permite que las celulas T tambien reconozcan polipeptidos derivados de antfgenos/fragmentos de protefna intracelulares.

Las celulas T pueden reconocer polipeptidos aberrantes derivados de cualquier zona de la celula tumoral, en el contexto de moleculas de MHC sobre la superficie de la celula tumoral. Las celulas T pueden ser activadas posteriormente para eliminar la celula tumoral que alberga el polipeptido aberrante. En los modelos experimentales que implican tumores murinos se ha demostrado que las mutaciones puntuales en las protefnas "propias" intracelulares pueden dar lugar a antfgenos de rechazo del tumor, que consisten en polipeptidos que difieren en un unico aminoacido respecto al polipeptido normal. Las celulas T que reconocen dichos polipeptidos en el contexto de moleculas de MHC sobre la superficie de las celulas tumorales son capaces de matar las celulas tumorales y rechazar así el tumor del hospedante (Boon y col., 1989, Cell 58: 293-303) .

Las moleculas de MHC en humanos normalmente se denominan moleculas HLA (antfgeno de leucocito humano) . Existen dos clases principales de moleculas HLA: la clase I y la clase II. Las moleculas HLA de clase I se codifican mediante las sub-localizaciones de HLA A, B y C y activan principalmente celulas T citot6xicas CD8+. Las moleculas HLA de clase II, por otro lado, activan principalmente celulas T CD4+ (citot6xicas o colaboradoras) , y se codifican mediante las sub-localizaciones de HLA DR, DP y DO. Cada individuo normalmente tiene seis moleculas HLA de clase I diferentes, normalmente dos alelos de cada uno de los tres subgrupos A, B y C, aunque en algunos casos el numero de moleculas HLA de clase I diferentes se reduce debido a la aparición dos veces del mismo alelo de HLA. Para una revisión general, vease Roitt, I.M. y col. (1998) Immunology, 5a edición, Mosby, Londres.

Los productos genicos de HLA son altamente polim6rficos. Diferentes individuos expresan distintas moleculas HLA que difieren de las que se dan en otros individuos. Esto explica la dificultad para encontrar donantes de órganos para trasplantes con igual HLA. La significancia de la variación genetica de las moleculas HLA en inmunobiologfa subyace en su papel como genes de respuesta inmune. A traves de su capacidad de unión de polipeptidos, la presencia o la ausencia de determinadas moleculas HLA gobierna la capacidad de un individuo para responder a epftopos de polipeptido específicos. Como consecuencia, las moleculas HLA influyen en la resistencia o la susceptibilidad a la enfermedad.

Las celulas T pueden inhibir el desarrollo y el crecimiento de cancer mediante una variedad de mecanismos. Las celulas T citot6xicas, tanto las HLA de clase I CD8+ restringidas como las HLA clase II CD4+ restringidas, pueden matar directamente celulas tumorales que presenten los antfgenos tumorales apropiados. Normalmente, las celulas T CD4+ colaboradoras son necesarias para las respuestas de celulas T CD8+ citot6xicas, pero si el polipeptido antfgeno se presenta mediante un APC apropiado, las celulas T CD8+ citot6xicas pueden ser activadas directamente, lo que da como resultado una respuesta mas rapida, mas fuerte y mas eficiente.

En la Solicitud de Patente Internacional PCT/N092/00032 (publicada como W0 92/14756) se describen polipeptidos sinteticos y fragmentos de productos protefnicos de oncogenes que tienen un punto de mutación o traslocalizaciones con respecto a su proto-oncogen o protefna genica supresora de tumor. Estos polipeptidos corresponden, cubren completamente o son fragmentos del fragmento de protefna de oncogen procesado o del fragmento de gen supresor tumoral tal como se presentan por celulas cancerosas u otras celulas presentadoras de antfgenos, y son presentados como un complejo HLA-polipeptido por al menos un alelo en cada individuo. Se demostró que los polipeptidos inducen respuestas de celulas T específicas frente al fragmento de protefna de oncogen real producido por la celula mediante procesamiento y presentado en la molecula HLA. En particular, se describe en el documento W0 92/14756 que los polipeptidos derivados de la protefna p21-ras que presentaban mutaciones puntuales en posiciones concretas de aminoacidos, a saber, posiciones 12, 13 y 61. Se ha demostrado que estos polipeptidos son efectivos a la hora de regular el crecimiento de celulas cancerosas in vitro. Ademas, se demostró que los polipeptidos provocan inmunidad de celulas T CD4+ frente a celulas cancerosas albergando la protefna de oncogen p21-ras mutada a traves de la administración de dichos polipeptidos en vacunación o en esquemas de terapia contra el cancer. Posteriormente se ha demostrado que estos polipeptidos tambien provocan inmunidad de celulas T CD8+ contra celulas cancerosas albergando la protefna de oncogen p21 ras mutada a traves de la administración mencionada anteriormente (Gjertsen, M.K. y col., 1997, Int. J. Cancer 72: 784-790) .

La Solicitud de Patente Internacional PCT/N099/00143 (publicada como W0 99/58552) describe polipeptidos sinteticos y fragmentos de productos proteicos mutantes que surgen de las mutaciones estructurales que se producen en los genes de celulas cancerosas. Estos polipeptidos corresponden, cubren completamente o son fragmentos del fragmento de protefna mutante de estructura procesada tal como es presentado por... [Seguir leyendo]

1. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer; en donde el polipeptido: a) comprende una secuencia dada por la SEC ID N°: 1 6 2; b) comprende 8 aminoacidos contiguos de la SEC ID N°: 1 6 2, con la condición de que al menos uno de dichos 8 aminoacidos contiguos proceda de la SEC ID N°: 1; o c) comprende 8 aminoacidos contiguos que tienen solo una, dos o tres sustituciones de aminoacidos respecto a los 8 aminoacidos contiguos descritos en anteriormente en b) , con la condición de que al menos uno de los 8 aminoacidos contiguos presentes proceda de la SEC ID N°: 1; en donde el polipeptido es capaz de inducir una respuesta de celulas T.

2. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con la reivindicación 1; en donde el polipeptido:

a) tiene al menos un 55% de identidad de secuencia con una molecula que comprende la secuencia de SEC ID N°: 1, determinada mediante una busqueda con NCBI BLASTP Versión 2.1.2 con los parametros por defecto; o b) tiene al menos un 55% de identidad de secuencia con una molecula que comprende la secuencia de SEC ID N°: 2, determinada mediante una busqueda con NCBI BLASTP Versión 2.1.2 con los parametros por defecto.

3. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con la reivindicación 1; en donde el polipeptido comprende una secuencia dada en la SEC ID N°: 1 6 2 o es un fragmento de una secuencia como la mostrada en la SEC ID N°: 1.

4. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con cualquier reivindicación precedente; en donde la respuesta de celulas T se genera despues de la separación intracelular del polipeptido para proporcionar un fragmento que se ajusta a un sitio de unión de MHC o HLA.

5. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; en donde el polipeptido no necesita una separación intracelular para ajustarse al sitio de unión de MHC o HLA de clase I.

6. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con la reivindicación 5; en donde el polipeptido tiene una longitud de entre 8 y 10 aminoacidos.

7. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con las reivindicación 1 a 4; en donde el polipeptido no necesita una separación intracelular para ajustarse al sitio de unión de MHC o HLA de clase II.

8. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con la reivindicación 7; en donde el polipeptido tiene una longitud de entre 12 y 25 aminoacidos.

9. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con cualquier reivindicación precedente; en donde la respuesta de celulas T aumenta el numero y/o la actividad de celulas T colaboradoras y/o de celulas T citot6xicas.

10. Un polipeptido para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer de acuerdo con cualquier reivindicación precedente; en donde el polipeptido no estimula una respuesta de celulas T citot6xicas sustancial en un paciente contra uno o mas de los siguientes: celulas madre de medula ósea, celulas epiteliales de las criptas colónicas o linfocitos.

11. Una molecula de acido nucleico para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer; en donde la molecula de acido nucleico: a) tiene una cadena que codifica un polipeptido como el descrito en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10; b) tiene una cadena que es complementaria con una cadena como la descrita en a) anteriormente; o c) tiene una cadena que se hibrida con una molecula como la descrita en a) o b) anteriormente en condiciones severas.

12. Un vector o celula para uso como medicamento para el tratamiento de cancer mediante la estimulación de una reacción inmune contra el cancer que comprende una molecula de acido nucleico de acuerdo con la reivindicación 11 en forma recombinante.

13. Un linfocito T para uso como medicamento; en donde el linfocito T es capaz de matar a una celula que expresa un polipeptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o de ayudar a matar dicha celula.

14. El linfocito para uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 13; en done el linfocito T es una celula T citot6xica o una celula T colaboradora.

15. Una lfnea celular clonal para uso como medicamento que comprende una pluralidad de linfocitos T de acuerdo con la reivindicación 13 o la reivindicación 14.

16. Una mezcla de linfocitos T para uso como medicamento que comprende una celula T colaboradora de acuerdo con la reivindicación 14 o una lfnea celular clonal de dichas celulas de acuerdo con la reivindicación 15 y una celula T citot6xica de acuerdo con la reivindicación 14 o una lfnea celular clonal de dichas celulas de acuerdo con la reivindicación 15.

17. El polipeptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, el acido nucleico de acuerdo con la reivindicación 11, el vector o celula de acuerdo con la reivindicación 12, el linfocito T de acuerdo con la reivindicación 13 6 14, una lfnea celular de acuerdo con la reivindicación 15, o una mezcla de linfocitos T de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el cancer es un cancer de mamffero.

18. El polipeptido, acido nucleico, vector o celula, linfocito T, lfnea celular o mezcla de linfocitos T de acuerdo con la reivindicación 17; en donde el cancer es un cancer humano.

19. El polipeptido, acido nucleico, vector o celula, linfocito T, lfnea celular o mezcla de linfocitos T de acuerdo con la reivindicación 18; en donde el cancer es cancer de mama, cancer de pr6stata, cancer pancreatico, cancer colorrectal, cancer de pulmón, melanoma maligno, leucemia, linfoma, cancer de ovario, cancer cervical o un carcinoma del tractor biliar.