Composición farmacéutica para su uso en la inhibición de la fusión de virión de VHC:

célula, previniendo otratando de ese modo infecciones por VHC, comprendiendo la composición un péptido que consiste en unocualquiera de la SEQ ID NO:1, o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO:40.

Inhibidores de fusión de flavivirus

1. Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos y a métodos de inhibición de infección celular y/o fusión de virión:célula por miembros de la familia Flaviviridae.

2. Antecedentes de la invención

2.1. La entrada de virus animales con envuelta requiere la fusión entre la membrana viral y una membrana celular, o bien la membrana plasmática o bien una membrana interna. Las proteínas de fusión de clase I tienen un “péptido de fusión” en o próximo al extremo amino-terminal, un par de hélices a extendidas y, generalmente, una agrupación de aminoácidos aromáticos próximos a un dominio de anclaje transmembrana hidrófobo (Carr y Kim, 1993; Suarez et al., 2000; Wilson, Skehel y Wiley, 1981) . Varios virus por lo demás distintos, incluyendo ortomixovirus, paramixovirus, retrovirus, arenavirus y filovirus codifican para proteínas de fusión de clase I que varían en longitud y secuencia, pero altamente similares en la estructura global (Gallaher, 1996; Gallaher et al., 1989) . La cristalografía de rayos X de la glicoproteína E (proteína E) del virus de la encefalitis transmitida por garrapatas (VETG) , un miembro del género Flavivirus de la familia Flaviviridae, reveló una estructura para esta proteína de fusión distinta de otras proteínas de fusión (Rey et al., 1995) . La proteína E tiene un péptido de fusión interno estabilizado por uniones dicisteína y tres dominios (I-III) compuestos principalmente de láminas 1 antiparalelas. En la configuración en forma de varilla ligeramente curvada de la proteína E presente en el virión, el péptido de fusión se ubica en la punta del dominio II, el punto distal más lejano del anclaje transmembrana C-terminal. El examen por Lescar y colaboradores (2001) de E1, la proteína de fusión del togavirus, virus del bosque de Semliki (VBS) , reveló un ajuste notable al andamiaje de E del VETG. Recientemente, la glicoproteína E del virus del dengue, un flavivirus importante desde el punto de vista médico, también mostró que tiene una estructura de clase II (Kuhn et al., 2002) .

2.2. La familia Flaviviridae consiste en tres géneros, Flavivirus, Hepacivirus y Pestivirus. Sólo en los Estados Unidos, 4 millones de personas están infectadas con un miembro del género Hepacivirus, el virus de la hepatitis C (VHC) . Esto es cuatro veces el número de infectados por VIH. Cada año en los EE.UU., se producen 30-50.000 nuevas infecciones por VHC, y aproximadamente mueren 15-20.000 personas. Se espera que estos números aumenten drásticamente. La infección se propaga fundamentalmente a través de las agujas que se comparten entre los consumidores de drogas, aunque existe cierto riesgo de pinchazos accidentales con agujas, hemoderivados antes de 1992, diálisis sanguínea crónica y relaciones sexuales frecuentes. Los tratamientos actuales para el VHC usando ribavirina e interferón cuestan de 8.000$ a 20.000$ al año, y ayudan aproximadamente a la mitad de pacientes sólo parcialmente. La fase terminal de la enfermedad por VHC es la indicación más frecuente para los trasplantes de hígado y esto cuesta de 250.000$ a 300.000$. Se necesitan urgentemente mejores fármacos para tratar la infección por VHC y una vacuna eficaz para prevenir la infección por VHC. Los miembros del género Flavivirus, el virus del dengue, el virus de la encefalitis japonesa, el virus de la fiebre amarilla y el virus del oeste del Nilo, provocan enfermedades humanas importantes en todo el mundo. Los pestivirus, tales como el virus de la diarrea viral bovina y el virus de la enfermedad de la frontera, provocan enfermedades veterinarias significativas.

3. Sumario de la invención

El alcance de la presente invención está definido por las reivindicaciones y cualquier información que no se encuentre dentro de las reivindicaciones se proporciona sólo como información.

Basándose en similitudes de secuencia, es probable que las glicoproteínas E de otros miembros del género Flavivirus dentro de la familia Flaviviridae, incluyendo el virus del oeste del Nilo, también sean proteínas de fusión de clase II. Los análisis presentados en el presente documento indican que las glicoproteínas de virus de miembros de los otros dos géneros de la familia Flaviviridae, Hepacivirus y Pestivirus, tienen estructuras no descritas previamente. La glicoproteína de la envuelta E1 del virus de la hepatitis C, un hepacivirus, y la glicoproteína de la envuelta E2 de los pestivirus tienen estructuras novedosas, que se parecen a una versión truncada de una proteína de fusión de clase II. No se ha identificado previamente ninguna proteína viral con esta estructura. Estas observaciones eran inesperadas y contrastan con estudios publicados. El virus de la hepatitis C codifica para dos glicoproteínas de la envuelta, E1 (gp35) y E2 (gp70) , ambas con dominios de anclaje transmembrana C-terminales. Estudios anteriores indicaban que otra proteína del VHC, E2, tiene una estructura de clase II. Las determinaciones estructurales de las proteínas de fusión de hepacivirus y pestivirus permiten la identificación de varias características desconocidas hasta la fecha de proteínas de fusión de flavivirus para el desarrollo de fármacos y vacunas.

Por tanto, la presente invención enseña que la glicoproteína de la envuelta E1 del VHC tiene una estructura desconocida previamente, una proteína de fusión de clase II truncada. Esta estructura identifica regiones E1 del VHC y otras proteínas de fusión virales de clase II importantes para la fusión de virus:célula. Esta memoria descriptiva también enseña que pueden diseñarse péptidos para inhibir virus, incluyendo el VHC y otros miembros de la familia Flaviviridae, que tienen péptidos de fusión con una estructura de clase II.

Las características estructurales de las glicoproteínas de la envuelta de flavivirus identificadas en el presente documento proporcionan una orientación sorprendente para el desarrollo de vacunas y/o fármacos para prevenir o tratar infecciones por flavivirus. Antes de la disponibilidad de los datos estructurales de rayos X (Wild, Greenwell y Matthews, 1993; Wild et al., 1994) , se desarrollaron varios inhibidores potentes de TM del VIH-1 basados en el modelo de proteína de fusión de TM del VIH-1 de Gallaher (Gallaher et al., 1989) . Se ha mostrado que el péptido DP 178 (T20) (figura 5A) reduce sustancialmente la carga de VIH-1 en pacientes con SIDA en resultados preliminares de ensayos clínicos de fase III. (Hoffman-La Roche y Trimeris, 2002) . Los fármacos peptídicos basados en estas estructuras deben ser relativamente fáciles de desarrollar. Una vez que se describe un inhibidor peptídico eficaz puede desarrollarse un fármaco no peptídico.

Más específicamente, la presente descripción proporciona métodos de inhibición de infección viral por flavivirus y/o fusión entre la envoltura del virión de los flavivirus y las membranas de la célula diana (el proceso que suministra el genoma viral al citoplasma celular) . La invención se refiere al descubrimiento, tal como se describe en el presente documento, de que la glicoproteína de la envuelta E1 de hepacivirus y la glicoproteína E2 de pestivirus tienen estructuras novedosas. La invención proporciona composiciones que emplean péptidos o derivados de péptidos para su uso en la inhibición de la fusión de flavivirus:célula. La presente invención proporciona composiciones para su uso en el tratamiento y la profilaxis de enfermedades inducidas por flavivirus.

Diversas realizaciones de la presente invención proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más péptidos seleccionados de uno o más de los siguientes grupos:

(A) Péptidos que consisten en la SEQ ID NO:1;

(B) Péptidos homólogos a la SEQ ID NO:1 tal como se identifican en las reivindicaciones adjuntas

Diversos aspectos de esta realización de la invención proporcionan composiciones para su uso en la inhibición de la fusión de virión de VHC:célula, previniendo o tratando de este modo infecciones por VHC, que comprenden uno o más péptidos seleccionados de los siguientes:

(A) Péptidos que consisten en cualquiera de la SEQ ID NO:1 o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO:40, en el que el resto químico N-terminal es un grupo amino y el resto químico C-terminal es un grupo carboxilo.

(B) Péptidos que consisten en cualquiera de la SEQ ID NO:1 o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ... [Seguir leyendo]

1. Composición farmacéutica para su uso en la inhibición de la fusión de virión de VHC:célula, previniendo o tratando de ese modo infecciones por VHC, comprendiendo la composición un péptido que consiste en uno cualquiera de la SEQ ID NO:1, o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO:40.

2. Composición farmacéutica para su uso en la inhibición de la fusión de virión de VHC:célula, previniendo o tratando de ese modo infecciones por VHC, comprendiendo la composición uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en:

a) un péptido que consiste en uno cualquiera de la SEQ ID NO:1, o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO: 40 en el que el resto químico N-terminal del péptido es un grupo amino y el resto químico C-terminal del péptido es un grupo carboxilo;

b) un péptido que consiste en uno cualquiera de la SEQ ID NO:1, o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO:40, en el que el resto químico N-terminal del péptido se selecciona del grupo que consiste en: un grupo acetilo, un grupo hidrófobo, un grupo carbobenzoxilo, un grupo dansilo, un grupo tbutiloxicarbonilo y un grupo macromolecular seleccionado de un conjugado lipídico, polietilenglicol o un hidrato de carbono, o en el que el resto químico C-terminal del péptido se selecciona del grupo que consiste en un grupo amido, un grupo hidrófobo, un grupo t-butiloxicarbonilo y un grupo macromolecular seleccionado de un conjugado lipídico, polietilenglicol o un hidrato de carbono;

c) un péptido que consiste en uno cualquiera de la SEQ ID NO:1, o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO: 40, en el que al menos un enlace que une residuos de aminoácido adyacentes es un enlace no peptídico; y

d) un péptido que consiste en uno cualquiera de la SEQ ID NO:1, o un fragmento de la SEQ ID NO:1 que comprende la SEQ ID NO: 40, en el que al menos un residuo de aminoácido está en la configuración de isómero D.

3. Composición según la reivindicación 2, en la que el péptido seleccionado es la SEQ ID NO: 1.

4. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el resto químico N-terminal de uno o más de los péptidos seleccionados es un grupo acetilo, un grupo hidrófobo, un grupo carbobenzoxilo, un grupo dansilo, un grupo t-butiloxicarbonilo o un grupo macromolecular seleccionado de un conjugado lipídico, polietilenglicol o un hidrato de carbono; o el resto químico C-terminal de uno o más de los péptidos seleccionados es un grupo hidrófobo, un grupo t-butiloxicarbonilo o un grupo macromolecular seleccionado de un conjugado lipídico, polietilenglicol o un hidrato de carbono.

5. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el resto químico N-terminal de uno o más de los péptidos seleccionados es un grupo macromolecular seleccionado de un conjugado lipídico, polietilenglicol o un hidrato de carbono; o en la que el resto químico C-terminal de uno o más de los péptidos seleccionados es un grupo macromolecular seleccionado de un conjugado lipídico, polietilenglicol

o un hidrato de carbono.

6. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que al menos un enlace que une residuos de aminoácido adyacentes en uno o más de los péptidos seleccionados es un enlace no peptídico seleccionado del grupo que consiste en un enlace imido, en enlace éster, un enlace hidrazina, un enlace semicarbazida y un enlace azo.

7. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que al menos un aminoácido de uno o más de los péptidos seleccionados es un aminoácido de isómero D.

8. Composición según la reivindicación 2, en la que el péptido seleccionado es la SEQ ID NO:1, y en la que el resto químico N-terminal del péptido es un grupo amino y el resto químico C-terminal del péptido es un grupo carboxilo.

9. Composición según la reivindicación 2, en la que el péptido seleccionado es un fragmento de la SEQ ID NO: 1 que comprende la SEQ ID NO:40, en la que el resto químico N-terminal del péptido es un grupo amino y el resto químico C-terminal del péptido es un grupo carboxilo.

10. Composición según la reivindicación 9, en la que el péptido seleccionado es la SEQ ID NO:40.

11. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de infección por flavivirus.