Una IL-1 para su uso en un procedimiento de tratamiento de placas ateroscleróticas reduciendo dichas placas al menos un 10 % en un mamífero induciendo autoanticuerpos contra IL-1.

IL-1- para su uso en un procedimiento de tratamiento de placas ateroscleróticas.

Antecedentes de la invención

La IL-1 se caracteriza bien como un mediador principal de la inflamación y su función en enfermedades inflamatorias relacionadas se ha sugerido en diversos modelos animales. Se han detectado auto-anticuerpos (aAb) de IgG humana contra la interleucina (IL) -1 con una frecuencia relativamente alta en la población general. De hecho, se ha publicado que más de un 20 % de personas aparentemente sanas tienen aAb altamente específicos tales como aterosclerosis o artritis reumatoide, estos estudios no han descartado la presencia de otros autoanticuerpos en estos individuos y ha sido difícil establecer un vínculo causal y no se ha establecido claramente ninguna función fisiológica de estos anticuerpos anti-IL-1

El documento WO2004/100987 desvela el uso de un antagonista de IL-1 en el tratamiento de hiperplasia neoíntima.

Merhi-Soussi y col., (Cardiovasc. Res., 66, 583-593, 2005) desvelan que la IL-1 desempeña una función en aterosclerosis en ratones macho con el gen de apolipoproteína E inactivado (knockout) .

Svenson y col., (J. Immunol. Methods, 236, 1-8, 2000) desvelan que la IL-1 puede usarse para inmunizar y generar auto-anticuerpos neutralizantes contra IL-1 Massimo y col. (Immunity and Ageing, 3, 4, 2006) desvelan que la IL-1 es un marcador de senescencia celular endotelial.

Los documentos W02007/015128 y WO2007/039552 pueden citarse solo bajo el Artículo 54 (3) del CPE y se refieren al el uso de auto-anticuerpos contra IL-1 para el tratamiento de la aterosclerosis y el uso de IL-1 para el tratamiento de diversas enfermedades, respectivamente.

Breve descripción de los dibujos el día 56 en ratones C57BL/6 después de tres inyecciones subcutáneas con conjugado de IL-1 -DPP en alumbre ( ) . Ratones de control inmunizados solo con DPP en alumbre (■) .

FIG. 2. Destrucción mediada por complemento dependiente de anticuerpos de células EL-4. Las células EL-4 se incubaron con diluciones en serie de antisuero policlonal de ratón anti-IL- de ratón. La proporción de células destruidas frente a células viables es proporcional a la concentración de suero. Como control positivo se usó un anticuerpo monoclonal humano anti-IL-1 de ratón. La incubación con suero murino sin tratar o sólo medio cultivo sirvió como dos controles negativos.

Descripción detallada de la invención Los ratones ApoE-/- tienen un defecto en el transporte de lípidos modificado por ingeniería genética que da como resultado una evolución rápida de placas similares a aterosclerosis en arterias principales. Se considera que estos ratones son el modelo más convincente para la aterosclerosis humana, porque son hipercolesterolémicos y desarrollan espontáneamente lesiones arteriales. En consecuencia, los ratones ApoE-/- se han usado mucho como un sistema de modelo para el estudio de la aterosclerosis y tratamientos.

Inmunizando ratones ApoE-/- contra IL-1 puede obtenerse, por ejemplo, un modelo animal para la neutralización de anticuerpos de IL-1 . Todos los animales inmunizados desarrollan aAb de IgG contra IL-1 , que persiste a altos niveles. El aAb contra IL-1 de suero de ratones inmunizados inhibe la unión de IL-1 a NOB-1, una línea de linfocitos T murina sensible a IL-1 , y neutraliza la IL-1 (pero no la IL-6 inducida por IL-1 ) in vivo. Los ratones de control ApoE-/- que se alimentan con una dieta alta en grasas desarrollan lesiones similares a la aterosclerosis en las arterias principales. Las lesiones están marcadas por infiltración de macrófagos, un núcleo necrótico y células de la musculatura lisa proliferantes con diversas cantidades de matriz extracelular. Por el contrario, los animales ApoE-/- inmunizados contra IL-1 tienen niveles de lesiones ateroscleróticas drásticamente reducidos y una notable resistencia al avance de la aterosclerosis. En ratones que, antes de la inmunización, tienen estrías adiposas (el comienzo de la lesiones ateroscleróticas) la inmunización con IL-1 detiene el desarrollo de las lesiones ateroscleróticas de manera que el lecho vascular permanece esencialmente sano.

Lo ratones ApoE-/- están bien protegidos contra trastornos relacionados con la aterosclerosis (por ejemplo, cardiopatía isquémica periférica, arteropatía coronaria, enfermedad cerebrovascular, arteropatía periférica) por la presencia de auto-anticuerpos contra IL-1 endógenos generados mediante inmunización. El modelo animal apoya las observaciones clínicas anteriores de los autores de la invención de que el hombre con aAb naturales contra IL-1 tiene una frecuencia reducida de cardiopatías relacionadas con la aterosclerosis en comparación con el hombre que no tiene aAb neutralizantes contra IL-1

tanto, la invención también proporciona un procedimiento para el tratamiento de placas ateroscleróticas en un mamífero induciendo auto-anticuerpos contra IL-1 protectores contra la enfermedad. Observaciones clínicas de auto-anticuerpos contra IL-1 aproximadamente en el 20 % de la población, sin trastornos de salud evidentes, sugieren que la administración de autoanticuerpos neutralizantes contra IL-1 no supondría un riesgo para la salud. Además, ratones con el gen de IL-1 inactivado que también son aparentemente sanos, apoyan esta estrategia como inocua. La inducción de aAb contra IL-1 en seres humanos es por lo tanto una manera inocua y eficaz para reducir el riesgo y la gravedad de enfermedades relacionadas con la aterosclerosis.

Cualquiera de los procedimientos de inmunización conocidos en la técnica puede usarse para conseguir la respuesta de auto-anticuerpos deseada en cualquier modelo animal o paciente mamífero (por ejemplo, gatos, perros, ovejas, cerdos, cabras; preferentemente seres humanos) (véase a más adelante) .

ADYUVANTE EJEMPLO Sal inorgánica Hidróxido de aluminio, fosfato de calcio, hidróxido de berilio Sistemas de aplicación Adyuvante incompleto de Freund Productos bacterianos Adyuvante completo de Freund, BCG, plásmidos ADN Motivos CpG Complejos inmunoestimuladores (ISCOMS) Mezcla de Quil A que contiene proteínas virales Citocinas GM-CSF, IL-12, IL-1, IL-2 Virus recombinantes Gripe Conjugado de partículas similares a virus (Particle Like Virus, VLP) VLP 2/6 que contienen VP2 de rotavirus bovino y VP6 de rotavirus humano Bacterias recombinantes Samonella typhimurium atenuada

La descripción anterior describe en líneas generales la presente invención. Un entendimiento más completo puede obtenerse en relación con los siguientes ejemplos específicos, que solo se proporcionan con fines ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la invención.

Ejemplo 1

Ratones con el gen ApoE inactivado (Knockout)

Se obtuvieron ratones ApoE-/-de Jackson Laborator y , Bar Harbor, ME. Sólo se usaron animales macho para evitar posibles influencias de género sobre el desarrollo de lesiones vasculares; además, se han realizado estudios clínicos para observar una función protectora para aAb contra IL-1 en el avance de la aterosclerosis, hasta el momento, sólo en hombres. Se usaron ratones de diez semanas de vida y se alimentaron con una dieta de alto contenido de colesterol (colesterol al 1, 25 %, colato al 0 %; Research Diets, New Brunswick, NJ) . Los ratones se alimentaron con la dieta durante 10 semanas y después se sacrificaron. Se tomaron muestras de sangre y se perfundieron las aortas, se seccionaron en trozos y se fijaron o se congelaron de acuerdo con procedimientos convencionales.

Ejemplo 2

Inmunización con IL-1 murina Los ratones se inmunizaron con IL-1 murina conjugada con derivado proteico purificado (DPP) de tuberculina a una proporción de 0, 41 (p/p) de acuerdo con el procedimiento descrito por Svenson y col., J Immunol Methods. 6 de de marzo del 2000; 2361 (1-2) : 1-8. Se inoculó a los ratones inyecciones subcutáneas en la base de la cola. Las inoculaciones se repitieron tres veces, con tres semanas de diferencia. Para analizar los aAb contra IL-1 , 2 semanas después de cada inyección se extrajo sangre a los ratones del plexo retro-orbital. Los animales de control recibieron el mismo programa de inoculación con una solución de DPP que no contenía IL-1

Ejemplo 3

Ensayos Las respuestas de IgG de ratón contra IL-1 se determinaron como describen Svenson y col., 2000. El análisis de unión de saturación de IL-1 a IgG se realizó como se describe (Svenson y col., J Clin Invest. Nov 1993; 92 (5) : 2533-9) . Idénticas muestras se procesaron en paralelo... [Seguir leyendo]

1. Una IL-1 para su uso en un procedimiento de tratamiento de placas ateroscleróticas reduciendo dichas placas al menos un 10 % en un mamífero induciendo autoanticuerpos contra IL-1

2. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la IL-1 está unida a una partícula de tipo virus.

3. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o con la reivindicación 2, en el que el mamífero es un ser 5 humano.

4. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o con la reivindicación 2, en el que la IL-1 es una IL-1 recombinante.

5. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que la IL-1 recombinante es murina o humana.

6. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la IL-1 está unida a un vehículo.

7. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el vehículo es un derivado proteico purificado (DPP) de tuberculina.

8. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o con la reivindicación 2, en el que la IL-1 se usa en presencia de un adyuvante.

9. IL-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el adyuvante es hidróxido de aluminio.