Procedimiento de identificación de agentes terapéuticos contra el melanoma y uso de agente identificado.

La invención se refiere a un procedimiento para la identificación de compuestos candidatos a ser utilizados como agentes terapéuticos para el tratamiento del melanoma entre aquellos que sean capaces de activar la proteína MDA-5 o de aumentar los niveles de la proteína NOXA, y de desencadenar autofagia. Se basa en que la activación del sensor de dsRNA MDA-5 es capaz de desencadenar la destrucción de células de melanoma por activación tanto de autofagia como de apoptosis, de manera autónoma y selectiva de las células tumorales, sin provocar la estabilización del antagonista natural de NOXA, MCL-1. La invención se refiere también al uso de RNAs de doble cadena o análogos del mismo tales como el ácido poliinosin-policitidílico (pIC), acomplejados con portadores policatiónicos tales como la polietilenimina (PEI), para la fabricación de medicamentos para el tratamiento del melanoma.

Procedimiento de identificación de agentes terapéuticos contra el melanoma y uso de agente identificado.

Campo técnico

La invención se refiere al campo del tratamiento del cáncer y a la identificación de compuestos válidos para ello. Más concretamente, la invención se refiere a un procedimiento para la identificación de compuestos candidatos a ser utilizados en el tratamiento del melanoma, así como al uso de una combinación de compuestos identificada por dicho procedimiento como combinación adecuada para tratar el melanoma.

Antecedentes de la invención

El melanoma representa un prototipo de los cánceres sólidos con una creciente incidencia y un pronóstico extremadamente grave en los estadios avanzados (Jemal et al., 2008). Al mismo tiempo, el melanoma metastásico continúa siendo un paradigma de los tumores quimio e inmunoresistentes, a pesar de los considerables esfuerzos que se han hecho para identificar las causas que determinan su quimio e inmunorresistencia a nivel molecular. Los únicos agentes aprobados por la Agencia de Fármacos y Alimentos de los EE.UU. (FDA: Food and Drugs Administration) para el tratamiento del melanoma metastásico son el agente alquilante dacarbazina (DTIC) y el inmunomodulador IL-2 (Tawbi and Kirkwood, 2007). Sin embargo, rara vez más del 5% de los pacientes se benefician de respuestas completas y duraderas en el caso de los melanomas metastásicos, y las toxicidades secundarias pueden ser graves. En consecuencia, la supervivencia media actual de los pacientes con melanoma metastásico es de 6 a 10 meses y, por ello, el desarrollo de terapias mejoradas es una prioridad en esta enfermedad (Jemal et al. 2007).

Inicialmente, el análogo sintético de dsRNA viral conocido como pIC (ácido poliinosin-policitidílico), un compuesto que se ha utilizado durante más de cuatro décadas para estimular el sistema inmune de manera dependiente de IFN (Field et al. 1967), pareció dar resultados prometedores como candidato a agente terapéutico contra el melanoma. Desgraciadamente, los estudios clínicos con pIC desnudo demostraron poca estabilidad del pIC y poca inducción del IFN, junto con ausencia de efecto antitumoral detectable en melanoma (Robinson et al., 1976). Así, se considera que el pIC desnudo es un pobre agente antimelanoma.

Los análisis histogenéticos de alta eficacia y los estudios sistemáticos funcionales han supuesto avances significativos en nuestra comprensión del inicio y progresión del melanoma, así como en el descubrimiento de los complejos mecanismos asociados con el fracaso de los tratamientos (Fecher et al., 2007; Gray-Schopfer et al., 2007). Se están identificando defectos consistentes y alteraciones en las cascadas de señalización de BRAF/MAPK, PI3K/AKT, NF-κB o NOTCH, proporcionando una plataforma excitante para el diseño racional de fármacos (Gray-Schopfer et al., 2007). Los programas de muerte celular en los que están implicados las mitocondrias, el retículo endoplásmico están siendo también objeto de estudio, aunque demuestran ser invariablemente ineficaces in vivo (Hersey and Zhang, 2008). Sin embargo, la terapia dirigida no ha demostrado ser eficaz en los estudios clínicos sobre melanoma (Flaherty, 2006): o bien los fármacos anticancerígenos no interaccionan con sus dianas de manera efectiva, o tienen que ser administrados siguiendo regímenes de dosificación que dan lugar a niveles de toxicidad inaceptables en los compartimentos celulares normales (Tawbi and Kirkwood, 2007). Es importante mencionar que durante el tratamiento pueden incluso activarse mecanismos compensatorios, que seleccionan poblaciones de células con una quimiorresistencia superior a la inicial (Lev et al., 2004; Shatton et al., 2008; Wolter et al., 2007). De hecho, se considera en general que el melanoma presenta una capacidad notoria para eludir la estimulación de la apoptosis por distintas rutas, capacidad que le resulta muy ventajosa para su progresión y la formación de metástasis, así como para desarrollar una notoria capacidad de resistencia a distintas terapias (revisado por Ivanov et al., 2003).

A diferencia de la quimioterapia estándar, cuyo objetivo es matar células tumorales principalmente "desde dentro" (es decir, activando programas intrínsecos de muerte celular), la inmunoterapia, tradicionalmente, ha implicado una cascada indirecta de interacciones célula-célula. En el melanoma, la mayor parte de los esfuerzos se han enfocado a incrementar los niveles o la eficacia funcional de dos compartimentos: las células presentadoras de antígenos y las células T citotóxicas (Wilcox and Markovic, 2007). También se están haciendo ensayos con vacunas, así como anticuerpos dirigidos contra inmunomoduladores inhibidores (p. ej. CTL4), aunque con resultados frustrantes en los ensayos clínicos en fase IV (Kirkwood et al., 2008). Más recientemente, se está persiguiendo la estimulación del sistema inmune innato por medio de la activación de los receptores similares a Toll (TLR)-3, - 4, -7 y -9, para apoyar la destrucción citotóxica de las células de melanoma mediante citocidas naturales (NK: natural killers), células dendríticas (DC: dendritic cells) y células T (para revisiones recientes, véanse Kirkwood et al., 2008, o Tormo et al. 2007). Sin embargo, múltiples estudios, incluidos estudios de los autores de la invención, han demostrado una capacidad inherente de las células para eludir las terapias inmunológicas regulando a la baja (editando) marcadores inmunorreactivos de superficie. Los melanomas también pueden ejercer efectos supresores sobre el hospedador (p. ej., inhibición de la maduración de las células presentadoras de antígenos o bloqueo de la activación completa de células T) (Tormo et al., 2006; Iikovitch and López, 2008; Verma et al., 2008). Así, puede decirse que los melanomas presentan también una capacidad inherente para eludir la actividad antitumoral de los inmunomoduladores.

En el marco de la inmunoterapia, una de las moléculas cuyo aumento de expresión ha sido estudiado como posible factor positivo en la terapia contra el melanoma es MDA-5 (gen 5 asociado a la diferenciación de melanoma), el producto de uno de los genes inicialmente descritos como asociados a la diferenciación del melanoma (Kang et al., 2002). MDA-5 es una helicasa con un dominio de unión al RNA de doble cadena (dsRNA), sustrato sobre el cual ejerce la actividad helicasa (Yoneyama et al., 2005), lo que le permite actuar como primera línea de defensa frente al dsRNA viral (Akira et al., 2006). Además, MDA-5 contiene un dominio de reclutamiento de caspasas (CARD), que se requiere para activar vías de señalización que conllevan la activación de NF-κB y otros factores de transcripción implicados en la regulación de citoquinas (Kawai et al., 2005). Los receptores de la familia de helicasas a la que pertenece MDA-5 comparten las mismas cascadas de señalización entre ellos y con el adaptador IPS-1. Otros miembros de la misma familia de helicasas son RIG-I (retinoic acid inducible protein 1, también abreviado como Ddx58) y LGP2 (también abreviado como Ddx58).

Se conoce que tanto IFN-β como el dsRNA provocan la inducción de la transcripción del gen Mda-5, por lo que se ha propuesto un papel potencial del aumento de la expresión de Mda-5 en la supresión del crecimiento inducido por IFN. Pero se ha visto (Kang et al., 2002) que la inducción del MDA-5 endógeno mediante IFN-β es primariamente citostática (es decir, induce la parada del ciclo celular). Así, para desencadenar muerte celular tumoral, MDA-5 tuvo que expresarse ectópicamente a niveles elevados (Kovacsovics et al., 2002). Aún así, esta actividad pro-apoptótica de la expresión ectópica de MDA-5 resultó ineficaz en células tumorales con una ruta RAS/MEK/EK hiperactiva (Lin et al., 2006), como es el caso de los melanomas (Chin et al., 2006).

La solicitud de patente norteamericana US 2007/0259372 propone la identificación de agonistas o antagonistas del IFN-β, IFN-α o el IFN-γ entre los compuestos capaces de incrementar la expresión de MDA-5 y sugiere también que los inductores de la expresión del gen Mda-5 pueden considerarse candidatos a compuestos inductores de la diferenciación terminal de células tumorales, en particular células de melanoma, por exhibir el promotor del gen de Mda-5 una expresión específica de tejido en los melanocitos. También sugiere un posible papel de MDA-5 en la generación de señales apoptóticas... [Seguir leyendo]

1. Compuesto que comprende una combinación de un fragmento de RNA de doble cadena (dsRNA), o un análogo del mismo, y un portador policatiónico.

2. Compuesto, según la reivindicación 1, que comprende una combinación de ácido poliinosin-policitidílico (pIC) y polietilenimina (PEI).

3. Uso del compuesto de las reivindicaciones 1 ó 2 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento del melanoma.

4. Uso, según la reivindicación 3, en el que el tratamiento va destinado al tratamiento de un paciente inmunocomprometido.

5. Medicamento destinado al tratamiento del melanoma que comprende el compuesto de las reivindicaciones 1 ó 2.