Genes de elongasa y usos de los mismos La presente solicitud es una Continuación en Parte de la solicitud de Patente de Estados Unidos en trámite nº de serie 09/903.456 presentada el 11 de julio de 2001, que es una Continuación en Parte de la solicitud de Patente de Estados Unidos en trámite nº de serie 09/624.670 presentada el 24 de julio de 2000, que es una Continuación en Parte de solicitud de Patente de Estados Unidos en trámite nº de serie 09/379.095 presentada el 23 de agosto de 1999, que es una Continuación en parte de la solicitud de Patente de Estados Unidos en trámite nº de serie 09/145.828 presentada el 2 de septiembre de 1998.

Antecedentes de la invención

Campo técnico

La presente invención se refiere a la identificación de varios genes implicados en la elongación de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (es decir, "elongasas") y a usos de los mismos. En particular, la enzima elongasa se utiliza en la conversión de un ácido graso a otro. Por ejemplo, la elongasa cataliza la conversión de ácido gamma linolénico (GLA) a ácido dihomo-y-linolénico (DGLA, 20:3n-6) y la conversión de ácido estearidónico (STA, 18:4n-3) a ácido (n-3) -eicosatetraenoico (20:4n-3) . La elongasa también cataliza la conversión de ácido araquidónico (AA, 20:4n-6) a ácido adrénico (ADA, 22:4n-6) , la conversión de ácido eicosapentaenoico (EPA, 20:50n-3) a ácido 03docosapentaenoico (22:5n-3) y la conversión de ácido a-linolénico (ALA, 18:3n-3) a 20:3n-3. DGLA, por ejemplo, puede utilizarse en la producción de otros ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) , tales como ácido araquidónico (AA) que pueden añadirse a composiciones farmacéuticas, composiciones nutricionales, piensos animales, así como otros productos tales cómo cosméticos.

Información de antecedentes

Las elongasas que se han identificado en el pasado difieren con respecto a los sustratos sobre los que actúan. Además, están presentes tanto en animales como en plantas. Las halladas en mamíferos tienen la capacidad de actuar sobre ácidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados. Por el contrario, las halladas en plantas son específicas para ácidos grasos saturados o monoinsaturados. Por lo tanto, para generar ácidos grasos poliinsaturados en plantas, existe la necesidad de una elongasa específica de PUFA.

Tanto en plantas como en animales, se cree que el proceso de elongación es el resultado de un mecanismo de cuatro etapas (Lassner et al., The Plant Cell 8:281 -292 (1996) ) . CoA es el vehículo de acilo. La etapa uno implica condensación de malonil-CoA con una acil-CoA de cadena larga para producir dióxido de carbono y una 1-cetoacil-CoA en la que el resto de acilo se ha elongado por dos átomos de carbono. Las reacciones posteriores incluyen reducción a 1-hidroxiacil-CoA, deshidratación a una enoil-CoA y una segunda reducción para producir la acil-CoA elongada. La reacción de condensación inicial no es solamente la etapa específica de sustrato sino también la etapa limitante de velocidad.

Como se ha observado previamente, las elongasas, más específicamente, las que utilizan PUFA como sustratos, son críticas en la producción de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga que tienen muchas funciones importantes. Por ejemplo, los PUFA son componentes importantes de la membrana plasmática de una célula en la que se halla en forma de fosfolípidos. También actúan como precursores de prostaciclinas, eicosanoides, leucotrienos y prostaglandinas de mamíferos. Adicionalmente, los PUFA son necesarios para el desarrollo apropiado del cerebro infantil en desarrollo así como para la formación y reparación de tejido. A la vista de la significación biológica de los PUFA, se han realizado intentos de producirlos, así como intermedios que conducen a su producción, de forma eficaz.

Varias enzimas están implicadas en la biosíntesis de PUFA incluyendo elongasas (elo) (véase Figura 1) . Por ejemplo, se produce ácido linolénico (LA, 18:2-º9, 12 ó 18:2n-6) a partir de ácido oleico (OA, 18:1-º9 ó 18:1n-9) por una º12 desaturasa. GLA (18:3-º6, 9, 12) se produce a partir de ácido linolénico por una º6-desaturasa. AA (20:º5, 8, 11, 14) se produce a partir de ácido dihomo-y-linolénico (DGLA, 20:3-º8, 11, 14) por una º5-desaturasa. Como se ha observado anteriormente, DGLA se produce a partir de GLA por una elongasa.

Debe observarse que los animales no pueden desaturar más allá de la posición º9 y por lo tanto no pueden convertir ácido oleico en ácido linolénico. De forma similar, el ácido a-linolénico (ALA, 18:3-º9, 12, 15 ó 18:3n-3) no puede sintetizarse por mamíferos, puesto que carecen de actividad º15 desaturasa. Sin embargo, el ácido a-linolénico puede convertirse a ácido estearidónico (STA, 18:4-º6, 9, 12, 15) por una º6-desaturasa (véase publicación de PCT WO 96/13591; véase también Patente de Estados Unidos Nº 5.552.306) , seguido de elongación a ácido (n-3) eicosatetraenoico (20:4-º8, 11, 14, 17 ó 20:4n-3) en mamíferos y algas. Este ácido graso poliinsaturado (es decir, 20:4-º8, 11, 14, 17) puede después convertirse a ácido eicosapentaenoico (EPA, 20:5-º5, 8, 11, 14, 17) por una º5desaturasa. Otras eucariotas, incluyendo hongos y plantas, tienen enzimas que desaturan en los carbonos 12

(véase publicación de PCT WO 94/11516 y Patente de Estados Unidos Nº 5.443.973) y 15 (véase publicación de PCT WO 93/11245) . Los ácidos grasos poliinsaturados principales de animales derivan por lo tanto de la dieta y/o de desaturación y elongación de ácido linolénico o ácido a-linolénico. A la vista de la incapacidad de los mamíferos para producir estos ácidos grasos de cadena larga esenciales, es de interés significativo aislar genes implicados en la biosíntesis de PUFA de especies que producen de forma natural estos ácidos grasos y para expresar estos genes en un sistema microbiano, vegetal o animal que pueda alterarse para proporcionar producción de cantidades comerciales de uno o más PUFA. En consecuencia, existe una necesidad inequívoca de la enzima elongasa, el gen que codifica la enzima, así como métodos recombinantes para producir esta enzima. Adicionalmente, existe una necesidad de aceites que contengan niveles de PUFA por encima de los presentes de forma natural así como los enriquecidos en nuevos PUFA. Tales aceites pueden prepararse solamente por aislamiento y expresión del gen de la elongasa.

Uno de los PUFA de cadena larga más importantes, observado anteriormente, es el ácido araquidónico (AA) . AA se encuentra en hongos filamentosos y también puede purificarse a partir de tejidos de mamífero incluyendo el hígado y las glándulas suprarrenales. Como se ha observado anteriormente, la producción de AA a partir de DGLA está catalizada por una 5-desaturasa y producción de DGLA a partir de ácido y-linolénico (GLA) se cataliza por una elongasa. Sin embargo, hasta la presente invención, no se había identificado elongasa que fuera activa sobre ácidos grasos sustrato en las rutas para la producción de PUFA de cadena larga y, en particular, AA, ácido eicosapentanoico (EPA) , ácido adrénico, ácido docosahexaenoico (DHA, 22:6n-3) , ácido 0-3-docosapentaenoico (22:5n-3) o ácido 06-docosapentaenoico (22:5n-6) .

Dos genes parecían ser de interés en la presente búsqueda del gen de la elongasa. En particular, la 1-cetoacilcoenzima A sintasa de jojoba (KCS) o KCS de jojoba (nº de Acceso GenBank U37088) , cataliza la reacción inicial de la ruta de elongación de acil-CoA grasa (es decir, la condensación de malonil-CoA con acil-CoA de cadena larga (Lassner et al., The Plant Cell 8:281-292 (1996) ) . La preferencia de sustrato de KCS de jojoba es 18:0, 20:0, 20:1, 18:1, 22:1, 22:0 y 16:0. La elongasa de Saccharomyces cerevisiae (ELO2) también cataliza la conversión de ácidos grasos saturados y monoinsaturados de cadena larga, produciendo altos niveles de 22:0, 24:0 y también 18:0, 18:1, 20:0, 20:1, 22:0, 22:1 y 24:1 (Oh et al., The Journal of Biological Chemistr y 272 (28) : 17376-17384 (1997) ; véase también Patente de Estados Unidos Nº 5.484.724 para una secuencia de nucleótidos que incluye la secuencia de ELO2; véase publicación de PCT WO 88/07577 para un análisis de la secuencia de un factor inhibidor de glucosilación que se describe en el Ejemplo V) . La búsqueda de una elongasa específica de PUFA de cadena larga en Mortierella alpina comenzó basándose en una revisión de las homologías compartidas entre estos dos genes y por exploración de la expresión con respecto a actividad elongasa de PUFA.

El documento WO 02/08401... [Seguir leyendo]

1. Una secuencia de nucleótidos aislada o fragmento de la misma que comprende o es complementaria de una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene actividad elongasa, en la que el polipéptido elonga ácidos grasos poliinsaturados de cadena de 20 carbonos de longitud y en la que la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido tiene al menos 50 % de identidad con una secuencia de aminoácidos que comprende SEC ID Nº :

121.

2. Una secuencia de nucleótidos aislada o fragmento de la misma que codifica un polipéptido que tiene actividad elongasa, en la que el polipéptido elonga ácidos grasos poliinsaturados de cadena de 20 carbonos de longitud, comprendiendo o siendo complementaria dicha secuencia de nucleótidos o fragmento de la misma de una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 50 % de identidad de secuencia de nucleótidos con una secuencia de nucleótidos que comprende SEC ID Nº : 119.

3. La secuencia de nucleótidos aislada o fragmento de la misma de la reivindicación 2 en la que dicha identidad de secuencia de nucleótidos es al menos 75 %.

4. La secuencia de nucleótidos aislada o fragmento de la misma de la reivindicación 2 en la que dicha identidad de secuencia de nucleótidos es al menos 95 %.

5. La secuencia de nucleótidos aislada de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 codificando dicha secuencia una elongasa funcionalmente activa que utiliza un ácido graso poliinsaturado como un sustrato.

6. La secuencia de nucleótidos aislada de la reivindicación 1 derivando dicha secuencia de un alga.

7. La secuencia de nucleótidos aislada de la reivindicación 6 en la que dicha alga es Pavlova sp.

8. Una proteína purificada codificada por dicha secuencia de nucleótidos de una cualquiera de las reivindicaciones 1

4.

9. Un método para producir una enzima elongasa que comprende las etapas de:

a) aislar una secuencia de nucleótidos que comprende SEC ID Nº : 119; b) construir un vector que comprende: i) dicha secuencia de nucleótidos aislada ligada operativamente a ii) un promotor; c) introducir dicho vector en una célula hospedadora en el tiempo y condiciones suficientes para expresión de dicha enzima elongasa.

10. Un vector que comprende:

a) una secuencia de nucleótidos que comprende SEC ID Nº : 119 ligado operativamente a b) un promotor.

11. Una célula hospedadora que comprende dicho vector de la reivindicación 10.

12. Una célula vegetal, planta o tejido vegetal que comprende dicho vector de la reivindicación 10, en la que la expresión de dicha secuencia de nucleótidos de dicho vector da como resultado la producción de un ácido graso poliinsaturado por dicha célula vegetal, planta o tejido vegetal.

13. La célula vegetal, planta o tejido vegetal de la reivindicación 12 en la que dicho ácido graso poliinsaturado se selecciona del grupo que consiste en ADA y ácido 03-docosapentaenoico.

14. Una planta transgénica que comprende dicho vector de la reivindicación 10, en la que la expresión de dicha secuencia de nucleótidos de dicho vector da como resultado la producción de un ácido graso poliinsaturado en semillas de dicha planta transgénica.

15. Un método para producir un ácido graso poliinsaturado que comprende las etapas de:

a) aislar una secuencia de nucleótidos que comprende SEC ID Nº : 119; b) construir un vector que comprende dicha secuencia de nucleótidos aislada; c) introducir dicho vector en una célula hospedadora en tiempo y condiciones suficientes para la expresión de una enzima elongasa codificada por dicha secuencia de nucleótidos aislada; y d) exponer dicha enzima elongasa expresada a un ácido graso poliinsaturado sustrato para convertir dicho sustrato a un ácido graso poliinsaturado producto.

16. El método de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho ácido graso poliinsaturado sustrato se selecciona

del grupo que consiste en AA y EPA y dicho ácido graso poliinsaturado producto se selecciona del grupo que consiste en ADA y ácido 03-docosapentaenoico, respectivamente.

17. El método de acuerdo con la reivindicación 15 que comprende adicionalmente la etapa de exponer dicho ácido graso poliinsaturado producto a al menos una desaturasa para convertir dicho ácido graso poliinsaturado producto en otro ácido graso poliinsaturado.

18. El método de acuerdo con la reivindicación 17 en el que dicho ácido graso poliinsaturado producto se selecciona del grupo que consiste en ADA y ácido 03-docosapentaenoico, seleccionándose dicho otro ácido graso poliinsaturado del grupo que consiste en ácido 06-docosapentaenoico, ácido 03-docosapentaenoico y ácido docosahexaenoico, y dicha al menos una desaturasa es 4-desaturasa con respecto a producción de ácido 06docosapentaenoico o ácido docosahexaenoico y 19-desaturasa con respecto a producción de ácido 03docosapentaenoico o ácido docosahexaenoico.

19. El método de la reivindicación 17 que comprende adicionalmente la etapa de exponer dicho otro ácido graso poliinsaturado a una o más enzimas seleccionadas del grupo que consiste en al menos una elongasa y al menos una desaturasa adicional para convertir dicho otro ácido graso poliinsaturado a un ácido graso poliinsaturado final.

20. El método de la reivindicación 19 en el que dicho ácido graso poliinsaturado final es ácido docosahexaenoico.

PUNTUACIONES Initl: 153 Initn: 199 Opt: 495 57, 4 % de identidad en solapamiento de 549 pb

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pCGN7875) 334 (pYES2) 334 (pYX242) 334 (pRAE-5) 334 (pRAE-6) 334 (pYX242) 334 (pRAE-5) SUSTRATO AÑADIDO OA 25 !M OA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M SINSUSTRATO SINSUSTRATO ÍCIDO GRASO LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) C16, 0 11, 948 23, 601 35, 123 92, 011 85, 160 16, 294 25, 34 C16:1 30, 665 71, 217 32, 789 315, 464 115, 456 56, 183 113, 913 C18:0 6, 185 9, 704 10, 515 22, 628 18, 879 5, 535 11, 092 C18:1n-9 35, 340 57, 429 33, 989 154, 386 106, 881 28, 388 51, 538 C18:3n-6 48, 856 58, 084 12, 434 C20:0 0, 474 0, 710 0, 244 C20:1n-9 (0, 375 %) *0, 352 (0, 309 %) *0, 527 1, 405 0, 867 0, 516 C20:3n-6 ND ND (0, 092 %) * 0, 226 (0, 324 %) * 2, 504 (0, 269 %) * 1, 006 ND ND C22:0 0, 460 C22:1n-9 0, 321 0, 315 C24:0 1, 825 0, 999 LÍPIDO TOTAL 93, 760 170, 490 245, 090 771, 690 374, 420 112, 99 256, 52 NO = NO DETECTADO* % DE ÍCIDO GRASO TOTAL

FIG. 10A

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pYX242) 334 (pYX242) 334 (pRAE-5) 334 (pRAE-5) 334 (pRAE-6) SUSTRATO AÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M ÍCIDO GRASO LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) C16:0 60, 683 61, 487 100, 998 96, 193 66, 761 C16:1 79, 838 79, 586 359, 754 220, 440 87, 359 C18:0 9, 784 10, 106 15, 317 15, 165 16, 744 C18:1n-9 38, 536 39, 936 108, 472 89, 637 71, 631 C18:3n-6 17, 974 17, 833 82, 866 56, 596 17, 766 C20:0 0, 510 0, 570 C20:1n-9C20:3n-6 (0, 136 %) * 0, 389 (0, 130 %) * 0, 374 (0, 336 %) * 3, 035 (0, 401 %) * 2, 689 (0, 353 %) * 1, 185C22:0 0, 414 C22:1n-9 0, 383 C24:0 1, 513 1, 626 LÍPIDO TOTAL 285, 560 288, 045 902, 560 671, 113 335, 496 * % ÍCIDO GRASO TOTAL

FIG. 10B

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRAE-5/pCGR4) 334 (pYX242/pYES2) HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRAE-5/pCGR4) 334 (pYX242/pYES2) SUSTRATO AÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M SUSTRATOAÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M ÍCIDO GRASO LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) C16:0 41, 050 37, 169 C16-, 0 96, 986 32, 221 C16:1 99, 393 100, 552 C16:1n-7 209, 667 62, 757 C1B:0 34, 432 27, 852 C18:0 80, 418 14, 027 C1B:1 110, 631 92, 786 C18:1n-9 207, 104 28, 701 C18:3n-6 15, 004 7, 924 C18:3n-6 25, 264 10, 543 C20:0 0, 643 0, 574 C20:0 2, 038 C20:1 1, 996 1, 684 C20:1n-9 3, 591 C20:3n-6 0, 542 0, 607 C20:3n-6 1, 284 0, 326 C20:4n-6 0, 579 C20:4n-6 1, 394 C22:0 1, 242 2, 604 C22:0 1, 124 C24:0 4, 754 4, 563 C24:0 3, 952 LÍPIDO TOTAL 334 300 LÍPIDO TOTAL 756 197

FIG. 11

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pYX242) 334 (pRAE-5) 334 (pREL0-1) 334 (pREL0-2) SUSTRATO AÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M 25 º C/48 H 25 º C/48 H 25 º C/48 H 25 º C/48 H ÍCIDO GRASO LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) LÍPIDO (!g) C16:0 28, 7 76, 707 84, 424 77, 445 C16:1 0, 729 2, 513 1, 532 1, 056 C18:0 7, 432 15, 761 27, 17 21, 32 C18:1n-9 28, 9 77, 323 109, 419 82, 844 C18:3n-6 9, 729 29, 236 19, 085 18, 804 C20:0 0, 643 0, 522 0, 537 C20:1n-9 0, 77 0, 426 0, 299 C20:3n-6 (0, 185 %) * 0, 374 (0, 279 %) * 1, 472 (0, 153 %) * 0, 748 (0, 200 %) * 0, 832C22:0 0, 451 C22:1n-9 0, 224 C24:0 0, 918 LÍPIDO TOTAL 202 527 490 416 * % ÍCIDO GRASO TOTAL

FIG. 12

PUNTUACIONES Initl: 156 Initn: 215 Opt: 295 Puntuación de Smith-Waterman: 296: 28, 8 % de identidad en solapamiento de 264 aa

PUNTUACIONES Initl: 178 Initn: 178 Opt: 318 Puntuación de Smith-Waterman: 318: 33, 0 % de identidad en solapamiento de 188 aa

PUNTUACIONES Initl: 30 Initn: 30 Opt: 40 Puntuación de Smith-Waterman: 49: 22, 1 % de identidad en solapamiento de 86 aa

Ratón PUNTUACIONES Initl: 161 Initn: 191 Opt: 325 Puntuación de Smith-Waterman: 325; 28, 8 % de identidad en solapamiento de 285 aa

Humano PUNTUACIONES Initl: 147 Initn: 147 Opt: 211 Puntuación de Smith-Waterman: 211; 28, 7 % de identidad en solapamiento de 150 aa

PUNTUACIONES Initl: 87 Initn: 218 Opt: 232 Puntuación de Smith-Waterman: 272: 29, 7 % de identidad en solapamiento de 232 aa

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (MAD708-2) 34 (MAD708-10) 334 (MA0708-18) 334 (MA0708-19) 334 (MAD708-30) 334 (pRAE5) SUSTRATO AÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M GLA 25 !M ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTALC16:0 14, 1 H, 68 14, 38 15, 45 14, 13 13, 59 C16:1 42, 84 43, 42 42, 57 38, 03 43, 58 43, 98 C18:0 3, 19 3, 28 3, 63 4, 08 3, 37 2, 04 C18:1n-9 17, 66 19, 39 19, 6 20, 8 20, 06 10, 88 C18:3n-6 6, 65 5, 58 10, 24 9, 46 3, 56 11, 14 C20:0 0, 26 0, 3 0, 32 0, 4 0, 46 0, 57 C20:3n-6 (47, 5 %) 6, 03 (41, 2 %) 3, 92 (8, 0 %) 0, 91 (21, 5 %) 2, 59 (49 %) 3, 43 (3, 4 %) 0, 24 LÍPIDO TOTAL (!g) 238, 47 307, 86 188, 51 167, 31 207, 47 466, 65 (% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTOO)

FIG. 20

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRPB2) 334 (pYES2) SUSTRATO AÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M (n=4) ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTALC16:0 15, 65 15, 23 C16:1 35, 2 38, 59 C18:0 5, 68 5, 55 C18:1n-9 25, 55 25, 27 C18:3n-6 3, 1 6, 75 C20:0 0, 36 0, 14 C20:3n-6 (62, 0 %) 5, 06 (2, 6 %) 0, 18 LÍPIDO TOTAL (!g) 314 247 (% DE CONVERSIÓN) =PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 24

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) SUSTRATO AÑADIDO SA 25 mM OA 25 mM LA 25 mM DGLA 25 mM AA 25 Mm ADRÉNICO 25 mMC18:0 C18:1n-9 C18:2n-6 C20:3n-6 C20:4n-6 C22:4n-6 ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTALC16:0 15, 07 14, 52 15, 74 15, 69 16, 06 15, 15 C16:1 33, 7 32, 37 32, 23 25, 65 33, 65 33, 39 C18:0 *9, 78 5, 83 5, 61 8, 33 4, 52 5, 35 C18:1n-9 31, 2 *37, 25 26, 05 20, 15 24, 54 28, 54 C18:2n-6 *10, 4 C18:3n-6C20:2n-6 0, 29 C20:3n-6 *16, 5 C20:4n-6 0, 27 *11, 7 C22:4n-6 *7, 46 LÍPIDO TOTAL (mg) 132 130 171 55 225 163

FIG. 25A

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) 334 (pRPB2) SUSTRATO AÑADIDO ALA 25 !M STA 25 !M EPA 25 !M C18:3n-3 C18:4n-3 C20:5n-3 ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTALC16:0 17, 32 16, 01 20, 67 C16:1 27, 68 34, 31 50, 7 C18:0 6, 75 5, 39 6, 14 C18:1n-9 28, 4 28, 54 C18:3n-3 *8, 39 C18:4n-3 *1, 95 C20:4n-3 (73, 2 %) 5, 33 C20:5n-3 *10, 33 C22:5n-3 0, 25 LÍPIDO TOTAL (!g) 114 199 201

* INDICA SUSTRATO AÑADIDO (% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 25B

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRPB2+PRPE31) 334 (pYES2+pYX242) SUSTRATO AÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTAL C16:0 15, 54 18, 26 C16:1 30, 16 33, 51 C18:0 8, 76 5, 58 C18:1n-9 27 27, 37 C18:3n-6 *2, 6 *5, 6 C20:0 0, 4 0, 32 C20:3n-6 (57, 4 %) 3, 55 (19 %) 0, 17 C20:4n-6 (27, 6 %) 132 ND LÍPIDO TOTAL (!g) 254 258

*INDICA SUSTRATO AÑADIDO (% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 26A

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRPB2+PRPE31) 334 (pYES2+pYX242) SUSTRATO AÑADIDO STA 25 !M STA 25 !M ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTAL C16:0 18 16, 4 C16:1 28, 37 34, 78 C18:0 7, 42 5, 71 C18:1n-9 26, 44 30, 15 C18:4n-3 *2, 93 *4, 57 C20:0 0, 25 0, 17 C20:4n-3 4, 13 0, 32 C20:5n-3 (39 %) 1, 87 (2, 1 %) , 10 LÍPIDO TOTAL (!g) 257 304

*INDICA SUSTRATO AÑADIDO (% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 26B

PUNTUACIONES Initl: 114 Initn: 278 Opt: 278 Puntuación de Smith-Waterman: 308; 30, 9 % de identidad en solapamiento de 259 aa

PUNTUACIONES Initl: 83 Initn: 186 Opt: 271 Puntuación de Smith-Waterman: 297: 28, 5 % de identidad en solapamiento de 242 aa

PUNTUACIONES Initl: 88 Initn: 208 Opt: 272 Puntuación de Smith-Waterman: 279; 28, 2 % de identidad en solapamiento de 266 aa

PUNTUACIONES Initl: 88 Initn: 207 Opt: 223 Puntuación de Smith-Waterman: 236: 30, 4 % de identidad en solapamiento de 191 aa PUNTUACIONES Initl: 51 Initn: 115 Opt: 168 Puntuación de Smith-Waterman: 168: 30, 4 % de identidad en solapamiento de 115 aa

PUNTUACIONES Marco: (3) Initl: 332 Initn: 332 Opt: 384 40, 3 % de identidad en solapamiento de 144 aa

PUNTUACIONES Initl: 316 Initn: 384 Opt: 477 Puntuación de Smith-Waterman: 477; 34, 2 % de identidad en solapamiento de 240 aa

PUNTUACIONES Initl: 80 Initn: 114 Opt: 178 Puntuación de Smith-Waterman: 178; 28, 8 % de identidad en solapamiento de 146 aa

PUNTUACIONES Initl: 288 Initn: 288 Opt: 399 Puntuación de Smith-Waterman: 399: 34, 6 % de identidad en solapamiento de 211 aa

PUNTUACIONES Initl: 160 Initn: 227 Opt: 269 Puntuación de Smith-Waterman: 269; 35, 3 % de identidad en solapamiento de 119 aa

PUNTUACIONES Initl: 64 Initn: 129 Opt: 233 Puntuación de Smith-Waterman: 239; 23, 7 % de identidad en solapamiento de 279 aa

PUNTUACIONES Initl: 100 Initn: 205 Opt: 271 Puntuación de Smith-Waterman: 271; 30, 7 % de identidad en solapamiento de 218 aa

PUNTUACIONES Initl: 189 Initn: 264 Opt: 358 Puntuación de Smith-Waterman: 358; 28, 7 % de identidad en solapamiento de 296 aa

PUNTUACIONES Initl: 77 Initn: 155 Opt: 264 Puntuación de Smith-Waterman: 264; 27, 2 % de identidad en solapamiento de 206 aa

PUNTUACIONES Initl: 181 Initn: 279 Opt: 328 Puntuación de Smith-Waterman: 328; 30, 0 % de identidad en solapamiento de 237 aa

HOSPEDADOR (PLASMIDO) 334 (pYX242) 334 (pRAE-58-A1) 334 (pYX242) 334 (pRAE-58-A1) SUSTRATOAÑADIDO GLA 25 !M GLA 25 !M AA 25 !M AA 25 !M ÍCIDO GRASO % DE ÍCIDOGRASO TOTAL % DE ÍCIDOGRASO TOTAL % DE ÍCIDOGRASO TOTAL % TOTAL ÍCIDOGRASO C18:3n-6 4, 40 2, 71 0, 03 0, 04 C20:3n-6 0, 09 (50, 34 %) * 2, 75 0, 02 0, 02 C20:4n-6 7, 48 3, 97 C224n-6 ND (23, 37 %) 1, 21 C16:1n-7 41, 11 34, 72 41, 49 35, 07 C18:1n-7 1, 85 11, 33 2, 01 11, 57 C20:1n-7 0, 04 1, 48 0, 04 1, 62 C18:1n-9 15, 60 15, 66 15, 16 14, 57 C20:1n-9 0, 06 0, 22 0, 06 0, 23 G18:1n-5 0, 11 0, 62 0, 12 0, 58 LÍPIDO TOTAL 370 969 359 514 * % DE CONVERSIÓN = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 45

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pYX242) 334 (pRET-21) 334 (pRET-22) SUSTRATOS AÑADIDOS GLA 50 !M + GLA 50 !M + GLA 50 !M + AA 50 !M AA 50 !M AA 50 !M ÍCIDO GRASO % DE ÍCIDO GRASO TOTAL % DE ÍCIDO GRASO TOTAL % DE ÍCIDO GRASO TOTALC16:0 9, 22 12, 46 9, 9 C16:1 0, 09 0, 18 0, 13 C18:0 1, 46 2, 41 1, 49 C18:1n-9 4, 03 4, 92 3, 91 C18:3n-6 10, 02 11, 89 8, 69 C20:3n-6 (1, 28 %) * 0, 13 (11, 1 %) * 1, 48 (19, 4 %) * 2, 09 C20:4n-6 46, 98 28, 87 35, 25 C20:4n-6 0 0 0 LÍPIDO TOTAL (mq) 212 174 187 * % DE CONVERSIÓN = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 48

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 PYX242 pRAE-58 PYX242 pRAE-58 PYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 SUSTRATO GLA GLA M M STA STA EPA EPA OA OA ALA ALA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC18:1n-9 18, 75 12, 96 16, 95 12, 76 16, 06 14, 48 19, 55 13, 78 29, 42 23, 06 ND 14, 58 C18:1n-7 2, 00 18, 49 2, 30 18, 70 1, 45 13, 26 2, 75 13, 62 2, 50 16, 42 1, 87 13, 76 C18:1n-5 0, 29 1, 63 0, 24 1, 61 0, 33 0, 97 0, 32 1, 10 0, 30 1, 64 0, 28 1, 18 C18:3n-6 4, 61 2, 02 0, 04 0, 04 0, 02 0, 09 0, 06 0, 05 0, 02 0, 05 0, 01 0, 01 C18:3n-3 0, 02 0, 08 0, 02 0, 07 0, 01 0, 03 0, 04 0, 05 0, 02 0, 08 14, 74 14, 08 C18:4n-3 ND ND ND ND 7, 01 2, 65 ND ND ND ND ND ND C20:1n-9 0, 10 0, 77 0, 11 0, 70 0, 15 0, 55 0, 15 0, 46 0, 27 2, 25 0, 10 0, 57 C20:1n-7 0, 08 8, 45 0, 10 8, 06 0, 04 3, 95 0, 14 4, 48 0, 10 (8, 9 %) 19, 35 0, 06 3, 53 C20:3n-6 0, 17 (78, 3 %) 17, 29 0, 01 0, 07 ND 0, 04 ND ND ND ND ND ND C20:3n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 0, 41 (30, 4%) 16, 15 C20:4n-6 ND ND 22, 07 8, 40 ND 0, 07 ND ND ND ND ND ND C20:4n-3 ND ND ND ND 0, 25 (79, 2 %) 10, 07 ND ND ND ND ND ND C20:5n-3 ND ND 0, 01 ND 0, 18 0, 08 8, 21 2, 63 ND 0, 02 ND ND C22:4n-6 ND ND ND (42, 7 %) 16, 26 ND ND ND ND ND ND ND ND C22:5n-3 ND ND ND ND ND 0, 18 ND (71, 7 %) 16, 66 ND ND ND ND LÍPIDO TOTAL 158 104 144 112 324 209 178 94 148 87 243 315

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 51

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 SUSTRATO GLA GLA GLA GLA AA AA AA AA EPA EPA EPA EPA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 100 !M 100 !M 25 !M 25 !M 100 !M 100 !M 25 !M 25 !M 100 !M 100 !M % DE LÍPIDO TOTALC18:1n-9 23, 82 21, 49 18, 49 17, 41 22, 09 19, 23 17, 45 18, 44 24, 78 21, 28 19, 42 18, 85 C18:1n-7 252 18, 35 1, 71 11, 82 2, 54 18, 77 1, 78 12, 67 2, 64 19, 48 1, 79 12, 40 C18:1n-5 0, 15 1, 13 0, 10 0, 54 0, 15 1, 23 0, 10 0, 63 0, 15 1, 18 0, 09 0, 62 C18:3n-6 6, 10 2, 38 23, 30 14, 46 0, 04 0, 02 0, 04 0, 02 0, 04 0, 02 0, 01 0, 01 C20:1n-9 0, 08 0, 83 0, 05 0, 48 0, 10 1, 18 0, 04 0, 56 0, 10 1, 30 0, 06 0, 63 C20:1n-7 0, 10 5, 75 0, 07 3, 09 0, 11 9, 49 0, 05 3, 62 0, 10 9, 94 0, 08 4, 07 C20:3n-6 0, 15 (62, 4 %) 1195 0, 31 (39, 8 %) 9, 56 0, 02 ND ND 0, 04 ND 0, 02 0, 01 0, 01 C20:4n-6 ND ND 0, 01 ND 11, 76 7, 68 28, 39 21, 02 0, 02 0, 02 ND 0, 01 C20:5n-3 ND ND ND ND 0, 03 0, 02 0, 10 0, 07 4, 79 2, 04 26, 47 13, 69 C22:4n-6 ND ND ND ND ND (27, 5 %) 2, 91 0, 01 (15, 7 %) 3, 90 ND ND 0, 00 ND C22:5n-3 ND ND ND ND ND ND ND 0, 03 0, 02 (70, 3 %) 4, 82 0, 04 (45, 7 %) 11, 50 LÍPIDO TOTAL 230 419 590 576 249 332 1014 961 372 390 1323 1065

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 52

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE58 pYX242 pRAE58 pYX242 pRAE58 pYX242 pRAE58 pYX242 pRAE58 pYX242 pRAE58 pYX242 pRAE-58 SUSTRATO PA PA SA SA ARA ARA BA BA PTA PTA OA OA EA EA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC16:0 24, 17 17, 23 11, 22 7, 90 7, 74 7, 98 7, 62 7, 11 17, 28 11, 04 16, 06 12, 76 14, 37 11, 98 C16:1n-7 39, 83 33, 83 30, 62 20, 56 21, 61 19, 81 21, 34 22, 89 50, 06 39, 43 40, 95 30, 06 43, 34 29, 51 C16:1n-5 0, 30 0, 74 0, 29 0, 58 0, 17 0, 47 0, 18 0, 59 0, 38 0, 80 0, 34 0, 68 0, 37 0, 71 C18:0 1, 90 1, 50 35, 82 38, 10 1, 12 0, 89 1, 03 0, 88 1, 90 1, 44 1, 82 1, 43 1, 51 1, 23 C18:1n-9 15, 36 14, 11 11, 52 10, 88 8, 29 10, 03 8, 09 10, 25 14, 55 13, 86 20, 12 21, 37 14, 12 15, 15 C18:1n-7 1, 36 11, 44 0, 90 8, 72 0, 69 8, 51 0, 69 8, 58 1, 30 12, 76 1, 30 13, 79 1, 21 12, 66 C18:1n-5 0, 11 0, 78 0, 08 0, 69 0, 08 0, 54 0, 06 0, 61 0, 19 0, 76 0, 10 0, 90 0, 15 0, 84 C20:0 0, 15 0, 17 0, 09 0, 12 52, 07 41, 48 ND ND ND ND ND ND 0, 17 0, 23 C20:1n-9 0, 09 0, 45 0, 05 0, 30 0, 03 ND 0, 06 0, 28 0, 05 0, 38 0, 18 0, 58 7, 47 10, 97 C20:1n-7 0, 20 2, 84 NO 1, 52 0, 05 1, 43 0, 14 1, 60 0, 07 2, 76 0, 12 2, 08 ND 2, 30 C22:0 0, 43 0, 56 0, 29 0, 22 0, 31 0, 19 52, 91 38, 43 ND ND ND ND ND 0, 32 C24:0 0, 59 1, 39 0, 36 0, 85 0, 45 0, 71 0, 53 1, 14 0, 45 1, 63 0, 66 1, 02 0, 56 0, 79 LÍPIDO TOTAL 297 272 573 542 558 846 585 519 464 295 306 448 309 648

ND = NO DETECTADO

FIG. 53A

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 SUSTRATO LA LA GLA GLA DGLA DGLA AA AA ADA ADA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC1B:1n-9 15, 27 16, 83 14, 85 15, 58 13, 62 16, 24 15, 08 15, 64 16, 18 13, 98 C18:1n-7 1, 21 13, 53 1, 22 11, 80 1, 16 12, 63 1, 18 11, 70 1, 30 10, 67 C18:1n-5 0, 13 0, 95 0, 20 0, 73 0, 12 0, 72 0, 14 0, 59 0, 12 0, 70 C18:2n-6 4, 09 4, 85 0, 09 0, 07 0, 07 0, 04 0, 04 0, 04 0, 03 0, 07 C18:3n-6 ND ND 4, 66 2, 33 ND ND ND ND ND ND C20:1n-9 0, 07 2, 60 0, 07 0, 33 0, 07 0, 33 0, 04 0, 27 0, 08 0, 33 C20:1n-7 0, 10 0, 18 0, 14 1, 65 0, 08 1, 68 0, 12 1, 58 0, 12 1, 85 C20:2n-6 ND (13, 2 %) 0, 74 ND ND ND ND ND ND ND ND C20:3n-6 ND ND ND (51, 4 %) 2, 46 6, 37 7, 86 ND 0, 03 ND ND C20:4n-6 ND ND ND ND ND 0, 09 6, 49 5, 77 ND ND C22:4n-6 ND ND ND ND ND ND ND (27, 1 %) 2, 14 10, 91 15, 57 C24:0 0, 59 1, 61 0, 64 1, 12 0, 69 0, 79 0, 52 0, 77 0, 54 1, 26 LÍPIDO TOTAL 333 373 260 392 260 672 553 690 706 440

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 53B

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 pYX242 pRAE-58 SUSTRATO ALA AU STA STA EPA EPA DPA DPA CONCENTRARON !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC18:1n-9 17, 21 17, 36 16, 85 17, 71 16, 45 16, 93 17, 08 16, 68 18, 36 18, 77 C18:1n-7 1, 29 12, 20 1, 15 11, 38 1, 23 11, 48 1, 33 11, 61 1, 46 13, 72 C18:1n-5 0, 14 0, 68 0, 12 0, 57 0, 12 0, 54 0, 12 0, 63 0, 13 0, 79 C18:3n-3 4, 42 3, 61 ND 0, 03 ND 0, 03 ND 0, 03 ND 0, 03 C18:4n-3 ND 0, 13 3, 04 1, 38 ND 0, 13 ND 0, 13 ND 0, 17 C20:1n-9 0, 09 0, 33 0, 11 0, 34 0, 05 0, 31 0, 09 0, 30 0, 13 0, 34 C20:1n7 0, 13 1, 55 0, 05 1, 38 0, 23 1, 89 0, 18 1, 73 0, 15 1, 76 C20:3n-3 0, 06 (22, 2 %) 1, 03 ND ND ND 0, 11 ND ND ND ND C20:4n-3 ND ND 0, 06 (61, 9 %) 2, 24 ND ND ND ND ND ND C20:5n-3 ND ND 0, 05 0, 05 7, 43 4, 88 ND ND 0, 07 ND C22:4n-3 ND ND ND 0, 39 ND ND ND ND ND ND C22:5n-6 HD ND ND ND ND ND 0, 28 0, 41 ND ND C22:5n-3 ND ND ND ND ND (39, 5 %) 3, 19 3, 99 5, 94 ND ND C24:0 0, 43 0, 73 0, 33 0, 73 0, 45 0, 84 0, 64 1, 07 0, 68 0, 77 C24:5n-3 ND ND ND ND ND 0, 08 ND 0, 06 ND LÍPIDO TOTAL 696 729 911 710 719 703 602 642 397 684

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 53C

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE84 pYX242 pRAE-84 PYX242 pRAE-84 PYX242 pRAE-84 PYX242 pRAE-84 PYX242 pRAE-84 SUSTRATO GLA GLA AA AA ADA ADA STA STA EPA EPA DPA DPA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC18:1n-9 15, 94 14, 16 12, 30 15, 67 11, 77 11, 41 14, 81 17, 92 15, 91 16, 33 15, 04 14, 63 C18:1n-7 1, 25 1, 21 1, 10 1, 50 1, 13 1, 18 1, 19 1, 38 1, 33 1, 49 1, 37 1, 38 CI8:3n-6 4, 53 4, 21 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND CI8:4n-3 ND ND ND ND ND ND 2, 78 2, 70 ND ND ND ND C20:1n-7 ND ND NO ND ND 0, 32 ND 0, 03 ND 0, 05 ND ND C20:3n-6 0, 10 0, 37 ND ND ND ND ND 0, 05 ND ND ND ND C20:4n-6 ND ND 11, 44 5, 55 ND ND ND ND ND ND ND NO C20:4n-3 ND ND ND ND ND ND ND (14 %) 0, 44 ND ND ND ND C20:5n-3 ND ND ND ND ND 23, 61 ND ND 9, 68 3, 02 ND ND C22:4n-6 ND ND ND (10, 4 %) 0, 64 20, 41 ND ND ND ND ND ND ND C22:4n-3 ND ND ND ND ND ND ND (42, 3 %) 0, 33 ND ND 0, 57 0, 57 C22:5n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND ND (32, 7*) 1, 47 7, 87 4, 88 C24:4n-6 ND ND ND (62, 6 %) 1, 07 ND (9, 2 %) 2, 4 ND ND ND ND ND ND C24:5n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND ND (82, 8 %) 7, 06 ND (43, 9 %) 3, 82 LÍPIDO TOTAL 208 126 115 189 158 149 124 433 221 271 127 126

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 56

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLASMIDO pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 SUSTRATO PA PA SA SA ARA ARA BA BA PTA PTA OA OA EA EA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC16:0 36, 30 39, 95 7, 12 8, 31 5, 78 4, 42 4, 17 5, 76 18, 69 18, 85 14, 69 18, 91 15, 25 18, 88 CI6:1n-7 26, 22 23, 52 11, 77 15, 25 10, 23 6, 29 7, 01 10, 10 38, 48 41, 23 20, 55 34, 48 25, 89 40, 32 C16:1n-5 0, 23 0, 28 0, 16 0, 20 0, 13 0, 07 0, 09 0, 13 0, 38 0, 38 0, 26 0, 43 0, 35 0, 41 C18:0 2, 26 2, 14 64, 90 58, 73 0, 94 1, 01 0, 64 0, 85 2, 17 2, 29 3, 02 2, 73 2, 71 2, 15 C18:1n-9 14, 83 11, 27 6, 35 7, 22 5, 20 4, 33 3, 84 5, 12 14, 25 14, 27 18, 44 22, 20 14, 62 16, 91 C18:1n-7 1, 44 1, 36 0, 57 0, 73 0, 54 0, 51 0, 41 0, 56 1, 5? 1, 68 1, 53 1, 67 1, 65 1, 84 C18:1n-5 0, 10 ND ND 0, 06 ND ND ND 0, 06 0, 17 0, 15 ND 0, 18 ND 0, 16 C20:0 0, 59 0, 24 0, 09 0, 08 66, 40 74, 78 0, 10 0, 05 0, 17 0, 17 0, 24 0, 20 0, 33 0, 04 C20:1n-9 0, 06 0, 10 ND 0, 04 0, 05 0, 06 ND ND ND ND 0, 25 0, 16 13, 15 7, 07 C20:1n-7 0, 07 ND ND ND ND 0, 12 ND ND ND ND 0, 40 ND ND 0, 04 C22:0 0, 45 0, 75 0, 29 0, 30 0, 43 0, 31 77, 35 70, 71 0, 74 0, 80 0, 98 0, 74 0, 83 0, 44 C24:0 0, 55 1, 09 0, 38 0, 41 0, 69 0, 62 0, 50 0, 45 0, 94 0, 92 1, 67 0, 96 ND 0, 53 LÍPIDO TOTAL 158 104 144 112 324 209 178 94 148 87 243 315 70 529

ND = NO DETECTADO

FIG. 57A

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 SUSTRATO LA LA GLA GLA DGLA DGLA AA AA ADA ADA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALCI8:1n-9 12, 30 16, 12 15, 63 16, 28 14, 28 13, 77 16, 21 15, 04 15, 38 12, 94 C18:1n-7 1, 34 1, 87 1, 69 1, 90 1, 41 1, 61 1, 61 1, 62 1, 51 1, 47 C18:2n-6 2, 67 3, 61 0, 17 0, 20 0, 24 0, 21 0, 09 0, 09 0, 06 0, 14 C18:3n-6 ND ND 2, 03 2, 49 ND ND ND ND ND ND C20:3n-6 ND ND ND (14, 7 %) 0, 43 10, 59 10, 73 ND ND ND ND C20:4n-6 ND ND ND ND ND ND 14, 03 5, 27 ND ND C22:4n-6 ND ND ND ND ND ND ND (8, 7 %) 0, 5 11, 44 16, 60 C24:0 0, 79 1, 00 1, 08 1, 16 1, 30 0, 87 0, 87 0, 72 0, 77 1, 18 C24:4n-6 ND ND ND ND ND ND ND (43, 8 %) 0, 39 ND (7, 3 %) 1, 3 C24:5n-6 ND ND ND ND ND ND ND 0, 38 ND ND LÍPIDO TOTAL 85 87 88 79 107 98 208 212 304 122

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 57B

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334, 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 pYX242 pRAE-84 SUSTRATO ALA ALA STA STA EPA EPA DPA DPA CONCENTRACIÓN !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M 25 !M % DE LÍPIDO TOTALC18:1n-9 16, 69 16, 38 18, 24 15, 95 14, 07 15, 16 16, 05 15, 06 17, 47 17, 15 C18:1n-7 1, 37 1, 43 1, 71 1, 40 1, 37 1, 47 1, 67 1, 51 1, 75 1, 73 C18:2n-6 0, 08 0, 08 0, 12 0, 04 0, 13 0, 06 0, 11 0, 18 0, 13 0, 15 C18:3n-3 4, 47 4, 28 ND ND ND ND ND ND ND ND C18:4n-3 ND ND 2, 28 2, 39 ND ND ND ND ND ND C20:3n-3 (1, 3 %) 0, 06 (3, 6 %) 0, 16 ND ND ND 0, 26 ND ND ND 0, 12 C20:4n-3 ND ND ND (11, 1 %) 0, 3 ND ND ND ND ND ND C20:5n-3 ND 0, 07 ND , ND 9, 97 3, 84 ND ND ND ND C22:4n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND C22:5n-6 ND ND ND (43, 4 %) 0, 23 ND ND 0, 64 0, 55 ND ND C22:5n-3 ND ND ND ND ND (24, 0 %) 1, 21 8, 79 3, 57 ND ND C24:0 0, 65 0, 43 1, 41 0, 58 1, 38 0, 78 1, 45 1, 35 0, 89 0, 67 C24:5n-3 ND ND ND ND ND (73, 6 %) 3, 38 ND (46, 4 %) 3, 09 ND ND LÍPIDO TOTAL 362 384 173 393 124 280 137 151 190 200

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 57C

HOSPEDADOR 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 334 PLÍSMIDO pYX242 pRAE-87 pYX242 pRAE-87 pYX242 pRAE-87 pYX242 pRAE-87 pYX242 pRAE-87 pYX242 pRAE-87 SUSTRATO GLA GLA AA AA ADA ADA STA STA EPA EPA DPA OPA CONCENTRACIÓN mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM % DE LÍPIDO TOTALC18:1n-9 15, 94 12, 05 12, 30 12, 61 11, 77 10, 91 14, 81 15, 52 15, 91 16, 66 15, 04 8, 07 C18:1n-7 1, 25 8, 00 1, 10 9, 60 1, 13 8, 87 1, 19 8, 94 1, 33 11, 60 1, 37 6, 90 C18:3n-6 4, 53 1, 11 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND C18:4n-3 ND ND ND 0, 09 ND 0, 14 2, 78 0, 80 ND ND ND ND C20:1n-7 ND 0, 98 ND 0, 91 ND 0, 63 NO 0, 62 ND 0, 94 ND 1, 34 C20:3n-6 0, 10 (78, 7 %) 4, 1 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND C20:4n-6 ND ND 11, 44 11, 28 ND ND ND ND ND ND ND ND C20:4n-3 ND ND ND No ND ND ND (81, 0 %) 3, 4 ND ND ND ND C20:5n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND 9, 68 4, 58 ND ND C22:4n-6 ND ND ND (36, 0 %) 6, 33 20, 41 21, 15 ND ND ND ND ND ND C22:4n-3 ND ND ND ND ND ND NO ND ND ND 0, 57 ND C22:5n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND ND (57, 4 %) 6, 18 7, 87 17, 24 C24:4n-6 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND C24:5n-3 ND ND ND ND ND ND ND ND ND (4, 2 %) 0, 27 ND (1, 4 %) 0, 25 LÍPIDO TOTAL 208 102 115 177 158 117 124 200 221 199 127 91

(% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) ND = NO DETECTADO

FIG. 60

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pYX242) 334 (pRET-22) 334 (pYX242) 334 (pRET-22) 334 (pYX242) 334 (pRET-22) SUSTRATO AÑADIDO GLA 50 mM GLA 50 mM AA 50 mM AA 50 mM SIN SUSTRATO SIN SUSTRATO % DE LÍPIDO TOTALÍCIDO GRASO C16:0 19, 8 18, 59 13, 8 6, 23 13, 62 13, 63 C16:1n-7 20, 92 17, 74 26, 62 13, 01 40, 1 47, 67 C18:0 5, 79 4, 94 3, 62 2 4, 86 5, 031 C18:1n-7 (3, 9 %) 0, 85 (9, 12 %) 1, 78 (3, 5 %) 0, 97 (12, 54 %) 1, 18 (3, 6 %) 1, 5 (7, 53 %) 3, 88C18:1n-9 8, 46 7, 45 10, 27 5, 36 13, 7 16, 93 C18:3n-6 *26, 62 *22, 03 0, 03 0, 01 C20:3n-6 (1, 1 %) 0, 3 (38, 2 %) 13, 61C20:4n-6 *27, 36 *65, 38 C22:4n-6LÍPIDO TOTAL (!g) 36 42 85 280 55 79 (% DE CONVERSIÓN) =PRODUCTO/ (SUBSTRATO+PRODUCTO) * INDICA SUSTRATO AÑADIDO

FIG. 61

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRET22) 334 (pRET22) 334 (pRET22) 334 (pRET22) 334 (pRET22) 334 (pRET22) SUSTRATO AÑADIDO SA 50 !M O4 50 !M LA 50 !M DGLA 50 !M AA 25 !M ADRÉNICO 50 !M C18:0 C18:1n-9 C18:2n-6 C20:3n-6 C20:4n-6 C22:4n-6 ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTALC16:0 12, 9 12, 54 15, 23 9, 1 10, 2 3, 42 C16:1 37, 71 23, 83 24, 87 16, 61 18, 375 7, 66 C18:0 11, 44 4, 7 4, 49 2, 7 2, 9 1, 23 C18:1n-9 14, 03 *16, 87 9, 54 6, 74 6, 39 2, 99 C18:2n-6 16, 87 0, 15 0, 28 C18:3n-6C20:2n-6 0, 05 C20:3n-6 *44, 34 C20:4n-6 0, 34 *25, 78 0, 26 C22:4n-6 *75, 72 LÍPIDO TOTAL (/q) 63 103 71 110 97 277

FIG. 62A

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRET22) 334 (pRET22) 334 (pRET22) 334 (pRET22) SUSTRATO AÑADIDO ALA 50 !M PA 50 !M EPA 50 !M STA 50 !M C18:3n-3 C18:0 C20:5n-3 C18:4n-3 ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTALC16:0 13, 91 15, 06 16, 92 20, 08 C16:1 14, 74 31, 77 23, 57 20, 17 C18:0 4, 06 *4, 85 4, 94 6, 02 C18:1n-9 6, 65 13, 59 10, 46 9, 29 C18:3n-3 *38, 66 C18:4n-3 *20, 45 C20:4n-3 (12, 57 %) 2, 94 C20:5n-3C22:5n-3 *15, 48 LÍPIDO TOTAL (!g) 80 84 81 60

*INDICA SUSTRATO AÑADIDO (% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 62B

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRET-22+pCGR-4) 334 (pYX242+pYES2) SUSTRATO AÑADIDO GLA 50 !M GLA 50 !M ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTAL C16:0 15, 92 15, 07 C16:1n-7 24, 97 19, 48 C18:0 8, 52 6, 48 C18:1n-7 3, 9 1, 61 C18:1n-9 18, 48 12, 71 C18:3n-6 *7, 0 *10, 54 C20:0 0 0 C20:3n-6 (27, 81 %) 4, 36 (1, 58 %) 0, 17 C20:4n-6 (27, 55 %) 4, 32 0 LÍPIDO TOTAL (!g) 508 168

FIG. 63A

HOSPEDADOR (PLÍSMIDO) 334 (pRET-22+pCGR-4) 334 (pYX242+pYES2) SUSTRATO AÑADIDO STA 50 !M STA 50 !M ÍCIDO GRASO % DE LÍPIDO TOTAL C16:0 18, 74 16, 21 C16:1n-7 21, 35 26, 09 C18:0 6, 78 7, 57 C18:1n-7 1, 97 1, 7 C18:1n-9 20, 73 22, 41 C18:4n-3 *6, 05 M3, 43 C20:0 0 0, 45 C20:4n-3 (15, 88 %) 1, 68 (4, 73 %) 0, 69 C205n-3 (26, 93 %) 2, 85 (3, 22 %) 0, 47 LÍPIDO TOTAL (!g) 335 161

*INDICA SUSTRATO AÑADIDO (% DE CONVERSIÓN) = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 63B

334 (PLÍSMIDO) pRAT-4-A1 pRAT-4-A2 pRAT-4-A3 pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-D1 pYX242 SUSTRATO AÑADIDO GLA GLA GLA GLA GLA GLA GLA GLA % DE LÍPIDO TOTALC16:1n-7 16, 95 5, 22 15, 52 11, 06 14, 49 15, 69 15, 18 11, 24 C18:0 4, 95 6, 73 5, 94 4, 17 4, 57 4, 25 4, 79 5, 64 C18:1n-9 20, 26 44, 21 22, 54 17, 22 16, 89 16, 51 18, 92 28, 72 C18:1n-7 2, 87 1, 64 2, 97 7, 51 1, 85 3, 90 3, 50 1, 70 C18:2n-6 1, 03 13, 79 1, 44 0, 67 1, 32 0, 28 0, 36 5, 53 C18:3n-6 3, 05 1, 09 5, 28 2, 38 1, 89 2, 45 2, 79 2, 24 C20:3n-6 10, 09 0, 43 0, 21 11, 04 5, 76 10, 77 9, 28 C22:0 0, 57 % DE CONVERSIÓN* 76, 8 % 28, 4 % 3, 8 % 82, 2 % 75, 3 % 81, 5 % 76, 9 %

* % DE CONVERSIÓN =PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 81A

334 (PLÍSMIDO) pRAT-4-Al pRAT-4-A2 pRAT-4-A3 pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-D1 pYX242 SUSTRATO AÑADIDO EPA EPA EPA EPA EPA EPA EPA EPA % DE LÍPIDO TOTALC16:1n-7 18, 35 17, 65 7, 96 11, 80 14, 06 11, 53 9, 68 20, 66 C18:0 3, 41 3, 69 2, 57 2, 90 3, 18 3, 10 3, 20 8, 49 C18:1n-9 15, 22 16, 44 10, 69 12, 28 13, 01 11, 50 12, 85 16, 27 C18:1n-7 1, 36 2, 12 1, 60 5, 62 2, 13 2, 02 2, 35 1, 33 C18:2n-6 1, 07 0, 40 0, 17 0, 21 0, 83 C20:5n-3 23, 24 31, 54 46, 96 37, 98 40, 40 32, 68 43, 67 13, 55 C22:1n-9 0, 09 0, 12 0, 09 C22:5n-3 0, 40 0, 16 3, 13 1, 37 4, 61 1, 27 % DE CONVERSIÓN* 1, 7 % 0, 5 % 7, 6 % 3, 3 % 12, 4 % 2, 8 %

* % DE CONVERSIÓN=PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO)

FIG. 81B

PUNTUACIÓN Initl: 259 Initn: 259 Opt: 509 Puntuación z: 86, 5 E () : 0, 28 >>EN:HSEL01 (300 aa)

Puntuación de Smith-Waterman: 511; 34, 0 % de identidad en solapamiento de 265 aa

(4-265:9-257) PUNTUACIONES Initl: 278 Initn: 278 Opt: 515 Puntuación z: 86, 1 E () : 0, 3 >>EN:MEL04 (293 aa) initn: 278 initl: 278 opt: 515 Puntuación z: 86, 1 expectativa () : 0, 3 Puntuación de Smith-Waterman: 517: 34, 1 % de identidad en solapamiento de 267 aa (8-270:16-265)

PUNTUACIONES Initl: 412 Initn: 541 Opt: 628 Puntuación z: 102, 7 E () : 0, 035 >>EN:GLELO (319 aa) initn: 541 initl: 412 opt: 628 Puntuación z: 102, 7 expectativa () : 0, 035 Puntuación de Smith-Waterman: 628; 43, 4 % de identidad en solapamiento de 244 aa (34-272:69-308) PUNTUACIONES Initl: 94 Initn: 220Opt: 302 Puntuación z: 61, 6 E () : 6, 5 >>EN:GLELO (288 aa) initn: 220 initl: 94 opt: 302 Puntuación z: 61, 6 expectativa () : 6, 5 Puntuación de Smith-Waterman: 312; 34, 4 % de identidad en solapamiento de 239 aa (49-270:54-278)

334 (PLÍSMIDO) pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-D1 pXY242 pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-D1 pYX242 pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-AD1 pYX242 SUSTRATO AÑADIDO GLA GLA GLA GLA GLA AA AA AA AA AA STA STA STA STA STA % DE LÍPIDO TOTALC16:1n-7C18:0C18:1n-9C18:1w7 C18:3w6 C18:4w3 C20:3w6 C20:4w6 C20:4w3 C22:4w6 C22:4n-3 36, 29 39, 18 38, 58 38, 84 45, 68 30, 36 35, 19 33, 47 33, 70 45, 06 34, 43 39, 63 38, 03 38, 74 45, 94 2, 78 3, 13 2, 73 3, 05 1, 76 2, 51 2, 78 2, 56 2, 72 1, 65 4, 01 3, 13 3, 06 3, 76 1, 82 15, 89 16, 55 15, 92 16, 34 13, 23 14, 60 15, 14 15, 39 15, 26 13, 01 16, 05 16, 51 17, 37 19, 07 14, 10 5, 91 2, 01 3, 44 2, 06 0, 93 5, 72 1, 94 3, 75 2, 22 1, 03 4, 92 1, 78 3, 78 2, 52 0, 95 2, 10 1, 96 1, 60 2, 19 5, 29 0, 83 0, 88 0, 53 1, 09 3, 42 4, 56 4, 23 5, 42 3, 88 0, 04 16, 53 13, 61 14, 21 17, 13 7, 54 2, 27 3, 25 3, 95 4, 01 0, 06 0, 57 0, 20 0, 75 0, 18 1, 10 0, 19 0, 63 0, 16 % DE CONVERSIÓN*DE C18 68, 4 % 68, 4 % 77, 2 % 64, 0 % 80, 3 % 79, 6 % 89, 7 % 79, 3 % % DE CONVERSIÓN*DE C20 3, 4 % 1, 5 % 5, 0 % 1, 0 % 32, 6 % 5, 5 % 13, 8 % 3, 8 %

FIG. 87A

334 (PLÍSMIDO) pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-D1 pYX242 pRAT-4-A4 pRAT-4-A6 pRAT-4-A7 pRAT-4-D1 pYX242 SUSTRATO AÑADIDO EPA EPA EPA EPA EPA NINGUNO NINGUNO NINGUNO NINGUNO NINGUNO % DE LÍPIDO TOTALC16:1w7C18:0C18:1w9C18:1w7C20:1w7C20:5w3C22:5n-3 31, 51 33, 92 34, 31 34, 74 47, 12 39, 54 41, 51 41, 44 43, 02 46, 45 2, 76 3, 09 2, 78 2, 77 1, 79 2, 45 3, 21 2, 59 3, 07 2, 05 15, 69 15, 79 16, 49 15, 22 13, 95 18, 56 19, 08 17, 98 18, 80 14, 03 6, 07 1, 97 3, 72 1, 89 1, 05 8, 77 2, 57 4, 86 2, 77 1, 07 0, 22 0, 08 0, 13 0, 07 0, 61 0, 07 0, 14 0, 07 11, 88 15, 20 11, 32 13, 91 6, 41 1, 49 0, 54 1, 74 0, 54 % DE CONVERSIÓN* 11, 1 % 3, 4 % 13, 3 % 3, 7 %

% DE CONVERSIÓN = PRODUCTO/ (SUSTRATO+PRODUCTO) *

FIG. 87B

334 (PLÍSMIDO) pYX242 pRAT-4-A7 pYX242 pRAT-A47 pYX242 pRAT-4-A7 pYX242 pRAT-4-A7 pYX242 pRAT-4-A7 pYX242 pRAT-4-A7 pYX242 pRAT-4-A7 pYX242 pRAT-4-A7 SUSTRATO AÑADIDO LA LA LA LA GLA GLA STA STA DGLA DGLA ETA ETA AA AA EPA EPA % DE LÍPIDO TOTALC16:1n-7 38, 73 27, 71 39, 05 26, 97 35, 28 30, 13 34, 75 30, 95 35, 96 28, 51 34, 91 31, 45 34, 71 24, 76 40, 02 24, 75 C16:1ln-5 0, 37 0, 17 0, 32 0, 20 0, 25 0, 21 0, 27 0, 18 0, 33 0, 22 0, 31 0, 21 0, 32 0, 20 0, 40 0, 21 C18:0 2, 21 2, 80 2, 14 3, 27 2, 12 3, 14 2, 44 3, 28 2, 15 2, 86 2, 55 3, 52 2, 42 2, 71 2, 75 3, 26 C18:1n-9 11, 14 12, 79 11, 73 15, 73 10, 14 14, 24 11, 13 14, 79 11, 17 14, 59 11, 33 16, 32 11, 63 13, 85 12, 86 15, 99 C18:1n-7 0, 85 3, 19 0, 73 3, 84 0, 64 3, 31 0, 78 3, 01 0, 96 3, 71 0, 95 3, 89 1, 06 3, 49 1, 11 3, 87 C18:2n-6 3, 04 3, 54 C18:3n-6 4, 49 1, 59 C18:3n-3 3, 55 3, 56 C18:4n-3 3, 09 0, 85 C20:1n-7 0, 10 0, 09 0, 24 0, 24 0, 09 0, 10 0, 22 0, 27 C20;2n-6 1, 07 0, 08 C20:3n-6 5, 84 9, 08 14, 13 0, 06 C20:4n-6 14, 60 20, 89 C20:3n-3 2, 71 0, 10 C20:4n-3 4, 19 5, 06 8, 49 C20:5n-3 0, 16 0, 25 6, 47 15, 32 C22:4n-7 0, 11 0, 19 0, 14 0, 18 0, 13 0, 14 0, 13 0, 24 0, 14 0, 22 0, 27 C22:4n-6 0, 76 C22:4n-3 0, 74 1, 04 C22:5n-3 1, 99 % DE CONVERSIÓN DEC18% DE CONVERSIÓN DEC20 23, 2 % 43, 3 % 78, 6 % 85, 3 % 15, 0 % 10, 9 % 3, 5 % 11, 5 %

FIG. 88

PUNTUACIONES Initl: 82 Initn: 410 Opt: 512 Puntuación z: 93, 2 E () : 0, 18 >>EL:MEL04 (293 aa) initn: 410 initl: 282 opt: 512 Puntuación Z: 93, 2 expectativa () : 0, 18 Puntuación de Smith-Waterman: 512: 34, 1 % de identidad en solapamiento de 261 aa (17-263:13-268) PUNTUACIONES Initl: 233 Initn: 319 Opt: 424 Puntuación z: 84, 7 E () : 0, 52 >>DEL:GLEL0 (319 aa) initn: 319 initl: 233 opt: 424 Puntuación Z: 84, 72 expectativa () : 0, 52 Puntuación de Smith-Waterman: 433: 33, 8 % de identidad en solapamiento de 240 aa (38-267:78-316) PUNTUACIONES Initl: 211 Initn: 271 Opt: 436 Puntuación z: 84, 5 E () : 0, 54 >>DEL:HSEL01 (300 aa) initn: 271 initl: 211 opt: 436 Puntuación Z: 84, 5 expectativa () : 0, 54 Puntuación de Smith-Waterman: 436: 28, 5 % de identidad en solapamiento de 274 aa (11-271:4-275) PUNTUACIONES Initl: 233 Initn: 284 Opt: 404 Puntuación Z: 77, 9 E () : 1, 2 >>DEL:TEL01 (273 aa) initn: 284 initl: 233 opt: 404 Puntuación Z: 77, 9 expectativa () : 1, 2 Puntuación de Smith-Waterman: 405: 32, 5 % de identidad en solapamiento de 246 aa (26-257:23-267)

334 (plásmido) pYX242 pRPL-6-82 pYX242 pRPL-6-B2 pYX242 pRPl-6-B2 pYX242 pRPL-6-B2 sustrato añadido LA LA GLA GLA DCLA DCLA AA AA % de lípido total C18:2n-6 4, 68 1, 85 C20:2n-6 C18:3n-6 7, 33 5, 94 C20:3n-6 7, 32 5, 58 C22:3n-6 C20:4n-6 13, 98 8, 57 C22:4n-6 1, 40 % DE CONVERSIÓN* 14, 0 %0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 334 (plásmido) pYX242 pRPL-6-B2 pYX242 pRPl-6-B2 pYX242 pRPl-6-B2 pYX242 pRPL-6-B2 SUSTRATO AÑADIDO ALA ALA STA STA ETA ETA EPA EPA % de lípido total C18:3n-3 6, 97 3, 87 C20:3n-3 C18:4n-3 5, 22 3, 53 C20:4n-3 4, 17 3, 85 C22:4n-3 C20:5n-3 11, 36 15, 43 C22:5n-3 2, 54 % DE CONVERSIÓN* 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 14, 1 % 334 (plásmido) pYX242 pRPL-6-B2 pYX242 pRPL-6-B2 sustrato añadido C20:0 C20:0 C20:1 C20:1 % de lípido total C20:0 0, 85 1, 12 C22:0 C20:1 3, 20 4, 07 C22:1 % DE CONVERSIÓN* 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 % 0, 0 %

% DE CONVERSIÓN = [PRODUCTO/ (PRODUCTO+SUSTRATO]X100

FIG. 101