Método de análisis de basófilos.

Un método para realizar un análisis de basófilos con un analizador de hematología automatizado,

comprendiendo el método:

(a) diluir una muestra de sangre completa que contiene una pluralidad de basófilos y linfocitos con un reactivo, en donde el reactivo incluye un agente de lisis de glóbulos rojos (GR) y un colorante fluorescente de unión al ácido nucleico permeable a la membrana celular;

(b) incubar la muestra de sangre diluida de la etapa (a) durante un período de incubación de menos de aproximadamente 30 segundos, a una temperatura que oscila de aproximadamente 30 °C a aproximadamente 50 °C;

(c) trasladar la muestra incubada de la etapa (b) a una cubeta de lectura del analizador de hematología;

(d) excitar la muestra incubada de la etapa (c) con una fuente de excitación a medida que la muestra incubada atraviesa la cubeta de lectura;

(e) captar una pluralidad de señales de dispersión de luz y una señal de emisión de fluorescencia de la muestra excitada;

(f) antes de realizar un análisis de basófilos, cribar los eventos que contienen núcleos que comprenden glóbulos blancos (GB) y glóbulos rojos nucleados (GRN) para eliminar la interferencia de los GR y fragmentos de GR no lisados utilizando el colorante fluorescente y un activador de fluorescencia, en donde el activador de fluorescencia se coloca entre las señales de emisión de fluorescencia de los GR y las señales de emisión de fluorescencia de GB y GRN; y

(g) realizar un análisis de agrupamiento de basófilos en los eventos que contienen núcleos de la etapa (f) en función de todas las señales captadas en la etapa (e).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/035163.

Solicitante: ABBOTT LABORATORIES.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 100 Abbott Park Road Abbott Park, IL 60064-3500 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: VACCA,GIACOMO, WU,JIONG, BUHL,MICHAEL R.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • G01N15/00 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › Investigación de características de partículas; Investigación de la permeabilidad, del volumen de los poros o del área superficial efectiva de los materiales porosos (identificación de microorganismos C12Q).
  • G01N15/14 G01N […] › G01N 15/00 Investigación de características de partículas; Investigación de la permeabilidad, del volumen de los poros o del área superficial efectiva de los materiales porosos (identificación de microorganismos C12Q). › Investigación por medios electroópticos.

PDF original: ES-2755785_T3.pdf

 

Método de análisis de basófilos.
Método de análisis de basófilos.

Reivindicaciones:

1. Un método para realizar un análisis de basófilos con un analizador de hematología automatizado, comprendiendo el método:

(a) diluir una muestra de sangre completa que contiene una pluralidad de basófilos y linfocitos con un reactivo, en donde el reactivo incluye un agente de lisis de glóbulos rojos (GR) y un colorante fluorescente de unión al ácido nucleico permeable a la membrana celular;

(b) incubar la muestra de sangre diluida de la etapa (a) durante un período de incubación de menos de aproximadamente 30 segundos, a una temperatura que oscila de aproximadamente 30 °C a aproximadamente 50 °C;

(c) trasladar la muestra incubada de la etapa (b) a una cubeta de lectura del analizador de hematología;

(d) excitar la muestra incubada de la etapa (c) con una fuente de excitación a medida que la muestra incubada atraviesa la cubeta de lectura;

(e) captar una pluralidad de señales de dispersión de luz y una señal de emisión de fluorescencia de la muestra excitada;

(f) antes de realizar un análisis de basófilos, cribar los eventos que contienen núcleos que comprenden glóbulos blancos (GB) y glóbulos rojos nucleados (GRN) para eliminar la interferencia de los g R y fragmentos de GR no lisados utilizando el colorante fluorescente y un activador de fluorescencia, en donde el activador de fluorescencia se coloca entre las señales de emisión de fluorescencia de los GR y las señales de emisión de fluorescencia de GB y GRN; y

(g) realizar un análisis de agrupamiento de basófilos en los eventos que contienen núcleos de la etapa (f) en función de todas las señales captadas en la etapa (e) .

2. El método de la reivindicación 1, en donde el reactivo incluye (a) al menos un tensioactivo, (b) al menos un tampón o al menos una sal, (c) al menos un agente antimicrobiano y (d) al menos un colorante fluorescente.

3. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde la fuente de excitación tiene una longitud de onda que oscila de 350 nm a 700 nm.

4. El sistema de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la fuente de excitación tiene una longitud de onda de 488 nm.

5. El sistema de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la pluralidad de señales de dispersión de luz incluye (1) pérdida de luz axial, (2) dispersión de ángulo intermedio, (3) dispersión lateral polarizada a 90° y (4) dispersión lateral despolarizada a 90°.

6. El sistema de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde realizar el análisis de agrupamiento de basófilos comprende distinguir los basófilos de dentro de la muestra de sangre de los neutrófilos, monocitos y eosinófilos de dentro de la muestra de sangre en función de las mediciones de (1) pérdida de luz axial, (2) dispersión de ángulo intermedio, (3) dispersión lateral a 90° y (4) fluorescencia.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el período de tiempo de incubación es inferior a 25 segundos.

8. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el período de tiempo de incubación es inferior a 17 segundos.

9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el período de tiempo de incubación es inferior a 9 segundos.

10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el reactivo contiene un único colorante fluorescente que se usa para identificar, calcular y analizar al mismo tiempo los GRN y una pluralidad de subpoblaciones de GB.

11. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el reactivo está formulado para permitir que los basófilos se observen como una población separada en una pluralidad de dimensiones ópticas y en al menos una dimensión fluorescente.

12. El método según la reivindicación 1, en donde el colorante fluorescente de unión al ácido nucleico es naranja de acridina.

 

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