Una composición farmacéutica estabilizada exenta de HSA que comprende interferón-beta (IFN-β

) sustancialmente monómero o una variante biológicamente activa de este solubilizada en una formulación de concentración iónica baja, en donde dicha formulación de concentración iónica baja es una solución que comprende un tampón en una cantidad suficiente para mantener el pH de dicha composición dentro de más o menos 0,5 unidades de un pH especificado, donde el pH especificado es de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 5,0, teniendo dicha formulación una concentración iónica que no es mayor de aproximadamente 20 mM.

Formulaciones de interferón-beta exentas de HSA

Campo de la invención

La invención se refiere, de forma general, a composiciones farmacéuticas, más particularmente a formulaciones estabilizadas de interferón-1 que están exentas de seroalbúmina humana como un excipiente farmacéutico añadido.

Antecedentes de la invención

Los interferones son una familia de glucoproteínas cuya secreción desde las células está inducida por varias señales que incluyen virus, ARN bicatenarios, otros polinucleótidos, antígenos y mitógenos. Los interferones muestran múltiples actividades biológicas, que incluyen actividades antivirales, antiproliferativas e inmunomoduladoras. Basándose en varios factores, que incluyen actividades antivirales y antiproliferativas, se han diferenciado al menos tres tipos distintos de interferones humanos, a, 1 y y.

El interferón-1 (IFN-1) es el primer tratamiento eficaz identificado para los que tienen esclerosis múltiple (EM) y se ha demostrado que reduce el número de ataques padecidos por los pacientes con EM recidivante y en remisión y EM progresiva secundaria. Las composiciones de IFN-1 también son útiles en el tratamiento de infecciones por hepatitis B yC.

Al igual que con todos los productos farmacéuticos basados en proteínas, un obstáculo importante que debe superarse con el uso de IFN-1 como un agente terapéutico, es la pérdida de utilidad farmacéutica que puede producirse debido a su inestabilidad en formulaciones farmacéuticas. Las inestabilidades físicas que ponen en peligro la actividad y la eficacia de los polipéptidos en las formulaciones farmacéuticas incluyen la desnaturalización y la formación de agregados solubles e insolubles, mientras que las inestabilidades químicas incluyen hidrólisis, formación de imida, oxidación, racemización y desamidación. Se sabe que algunos de estos cambios conducen a la pérdida o a la reducción de la actividad farmacéutica de la proteína de interés. En otros casos, se desconocen los efectos exactos de esos cambios, pero todavía se considera que los productos de degradación resultantes son farmacéuticamente inaceptables debido a los posibles efectos secundarios no deseables.

La estabilización de polipéptidos en composiciones farmacéuticas sigue siendo un área en el que el ensayo y error desempeña un papel principal (revisado por Wang (1999) Int. J. Pharm. 185: 129-188; Wang y Hanson (1988) J. Parenteral Sci. Tech. 42: S3-S26) . Los excipientes que se añaden a formulaciones farmacéuticas de polipéptidos para aumentar su estabilidad incluyen tampones, azúcares, tensioactivos, aminoácidos, polietilenglicoles y polímeros, pero los efectos estabilizantes de estos aditivos químicos varían dependiendo de la proteína.

Uno de los obstáculos principales para preparar formulaciones farmacéuticas de IFN-1 estabilizadas ha sido la mala solubilidad de la molécula de IFN-1. Las formulaciones actuales emplean el uso de HSA como un agente potenciador de la solubilidad para IFN-1. Sin embargo, el uso de HSA tiene inconvenientes. El HSA es un producto de la sangre humana y, por lo tanto, se tiene que recoger de sujetos humanos. Aunque se han adoptado etapas para reducir el riesgo, el uso de productos de sangre humana, tales como HSA, conlleva la posible introducción de virus humanos tales como VIH y VHC. La introducción de HSA en la formulación también interfiere con la capacidad de determinar apropiadamente la estabilidad de IFN-1 en la formulación. Esto se debe a que tanto la HSA como el IFN1 son proteínas y la HSA interfiere con algunos de los ensayos indicadores de estabilidad de IFN-1. Se han descrito algunas formulaciones de IFN-1 exentas de HSA, por ejemplo, algunas realizaciones de los documentos US5004605 y WO 99/15193.

Además, el IFN-1 es una proteína que muestra formación de agregados cuando se prepara en composiciones farmacéuticas y, por tanto, la cantidad de esta proteína en su estado biológicamente activo monómero está comprometida durante el almacenamiento de estas composiciones. La formación de agregados por un polipéptido tal como IFN-1 durante el almacenamiento de una composición farmacéutica puede afectar de manera adversa a la actividad biológica de ese polipéptido, dando como resultado la pérdida de la eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la formación de agregados puede causar otros problemas, tal como el bloqueo de conductos, membranas o bombas cuando la composición farmacéutica de IFN-1 se administra usando un sistema de infusión. Además, la inyección de una composición farmacéutica que comprende la forma agregada de una proteína tiene la posibilidad de generar una reacción inmunógena a la proteína agregada.

Por consiguiente, existe la necesidad de composiciones farmacéuticas de IFN-1 adicionales que comprendan estabilizantes fisiológicamente compatibles que mejoren la solubilidad de esta proteína y estabilicen la proteína frente a la formación de agregados, aumentando de este modo su utilidad farmacéutica.

Sumario de la invención

Se proporcionan composiciones que comprenden interferón-beta (IFN-1) como un componente terapéuticamente activo y procedimientos útiles en su preparación. Las composiciones son composiciones farmacéuticas estabilizadas que están exentas de seroalbúmina humana (HSA) como un excipiente farmacéutico y que comprenden IFN-1 sustancialmente monomérico solubilizado en una formulación de fuerza iónica baja. La formulación de fuerza iónica baja es una solución que comprende un tapón en una cantidad suficiente para mantener la composición a un pH especificado más o menos 0, 5 unidades, en el que el pH especificado es de aproximadamente 3, 0 a aproximadamente 5, 0 y que tiene una fuerza iónica de no más de aproximadamente 20 mM. En las composiciones farmacéuticas se incorpora un agente tonificante no iónico para hacer las composiciones isotónicas, en las que el agente tonificante es un hidrato de carbono. También se proporcionan métodos para aumentar la solubilidad de IFN1 en composiciones farmacéuticas y para aumentar la cantidad de IFN-1 monómero en estas composiciones sin el uso de seroalbúmina humana.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra la solubilidad de IFN-1-1b en soluciones de cloruro sódico. La Figura 2 muestra la solubilidad de IFN-1-1b en formulaciones de fuerza iónica baja. La Figura 3 muestra el efecto de pH 3, 0 sobre el estado de agregación de IFN-1-1b. La Figura 4 muestra el efecto de pH 4, 0 sobre el estado de agregación de IFN-1-1b. La Figura 5 muestra el efecto de pH 5, 0 sobre el estado de agregación de IFN-1-1b. La Figura 6 muestra el efecto de la fuerza iónica (NaCl 0 mM) sobre el estado de agregación de IFN-1-1b. La Figura 7 muestra el efecto de la fuerza iónica (NaCl 50 mM) sobre el estado de agregación de IFN-1-1b. La Figura 8 muestra el efecto de la fuerza iónica (NaCl 150 mM) sobre el estado de agregación de IFN-11b. La Figura 9 muestra el estado de agregación de IFN-1-1b en una formulación de pH 3, 0 que contiene solamente el agente de tamponamiento glicina 5 mM. La Figura 10 muestra el efecto de un agente tonificante no iónico (sacarosa al 9%) sobre el estado de agregación de IFN-1-1b en la formulación mostrado en la Figura 9. La Figura 11 muestra el efecto de un agente tonificante no iónico (trehalosa al 9%) sobre el estado de agregación de IFN-1-1b en la formulación mostrado en la Figura 9. La Figura 12 muestra el porcentaje de la fuerza de IFN-1-1b inicial en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% o sacarosa al 9% después de 8 semanas de almacenamiento a 40 º C. La fuerza se determinó mediante absorción UV. La Figura 13 muestra el porcentaje del pico principal de IFN-1-1b en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% o sacarosa al 9% después de 8 semanas de almacenamiento a 40 º C. El porcentaje del pico principal se determinó mediante análisis de RP-HPLC. La Figura 14 muestra el porcentaje de la fuerza de IFN-1-1b inicial en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% después de 9 meses de almacenamiento a 5 º C o 30 º C. La fuerza se determinó mediante espectroscopia UV. La Figura 15 muestra el porcentaje del pico principal de IFN-1-1b en formulaciones liofilizadas que contienen trehalosa al 9% después de 9 meses de almacenamiento a 5 º C o 30 º C. El porcentaje del pico principal se determinó mediante análisis de RP-HPLC. La Figura 16 muestra el porcentaje de la fuerza de IFN-1-1b inicial en formulaciones líquidas que contienen trehalosa al 9% o sacarosa al 9% después de 3 semanas de almacenamiento a 30 º C. La fuerza se... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica estabilizada exenta de HSA que comprende interferón-beta (IFN-º) sustancialmente monomérico o una variante biológicamente activa del mismo solubilizada en una formulación de fuerza iónica baja que tiene una fuerza iónica que no es mayor de aproximadamente 20 mM, en el que dicha formulación de fuerza iónica baja es una solución que comprende un tampón a una fuerza de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM para mantener el pH de dicha composición dentro de más o menos 0, 5 unidades de un pH especificado, y en el que la composición tiene un pH de 3, 0 a 4, 5

2. La composición de la reivindicación 1, en el que dicho tampón está presente en una fuerza de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 20 mM.

3. La composición de la reivindicación 1, en el que dicho tampón está presente en una fuerza de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 10 mM.

4. La composición de la reivindicación 3, en el que dicho tampón está presente en una fuerza de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 10 mM.

5. La composición de la reivindicación 4, en el que dicho tampón está presente en una fuerza de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 7 mM.

6. La composición de la reivindicación 5, en el que dicho tampón está presente en una fuerza de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 5 mM.

7. La composición de la reivindicación 6, en el que dicho tampón está presente en una fuerza de aproximadamente 5 mM.

8. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el tampón se selecciona de: glicina; ácido aspártico; succinato de sodio; citrato; formiato; acetato; ácido glutámico; histidina; imidazol; y fosfato.

9. La composición de la reivindicación 8, en el que el tampón es glicina.

10. La composición de la reivindicación 8, en el que el tampón es citrato.

11. La composición de la reivindicación 8, en el que el tampón es acetato.

12. La composición de la reivindicación 8, en el que el tampón es formiato.

13. La composición de la reivindicación 8, en el que el tampón es histidina.

14. La composición de la reivindicación 8, en el que el tampón es succinato de sodio.

15. La composición de cualquier reivindicación anterior, en la que la fuerza iónica de dicha formulación está determinada exclusivamente por la fuerza de tampón.

16. La composición de la reivindicación 15, en la que la formulación no contiene especies iónicas adicionales.

17. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el pH de la composición es de 3, 0 a 4, 0.

18. La composición de la reivindicación 17, en el que el pH es de 3, 5 a 4, 0.

19. La composición de la reivindicación 18, en el que el pH es de 4, 0.

20. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que la formulación comprende un agente tonificante no iónico en una cantidad suficiente para hacer la formulación isotónica con los fluidos corporales.

21. La composición de la reivindicación 20, en el que el agente tonificante no iónico es un monosacárido aldosa o cetosa.

22. La composición de la reivindicación 20, en el que el agente tonificante no iónico es un disacárido.

23. La composición de la reivindicación 20, en el que el agente tonificante no iónico es un alditol.

24. La composición de la reivindicación 22, en el que el agente tonificante no iónico es trehalosa.

25. La composición de la reivindicación 22, en el que el agente tonificante no iónico es sacarosa.

26. La composición de la reivindicación 23, en el que el agente tonificante no iónico es manitol.

27. La composición de la reivindicación 20, en el que el agente tonificante no iónico es trehalosa, sacarosa, manitol o una combinación de estos.

28. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 27, en el que el agente tonificante no iónico está presente en una fuerza de aproximadamente 1% a aproximadamente 10%.

29. La composición de la reivindicación 28, en el que el agente tonificante no iónico es trehalosa o sacarosa en una fuerza de aproximadamente 8% a aproximadamente 10% en peso por volumen.

30. La composición de la reivindicación 29, en el que el agente tonificante no iónico es manitol en una fuerza de aproximadamente 4% a aproximadamente 6% en peso por volumen.

31. La composición de la reivindicación 30, en el que el agente tonificante no iónico es manitol en una fuerza de aproximadamente 5% en peso por volumen.

32. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el IFN-º es FN -º muºano.

33. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el IFN-º está glicosilado.

34. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 32, en el que el IFN-º no está glucosilado.

35. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el IFN-º está enlazado covalentemente con polietilenglicol.

36. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el IFN-º está producido recombinantemente.

37. La composición de la reivindicación 36, en el que el IFN-º se produce por cultivo de una cuesped

élula h transformada con un vector de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido IFN-ºº en la que la célula hospedadora es procariota.

38. La composición de la reivindicación 36, en el que el IFN-ºélula

se produce por cultivo de una c huesped transformada con un vector de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido IFN-ºº en la que la célula hospedadora es eucariota.

39. La composición de la reivindicación 38, en la que la célula huesped es una célula de levadura.

40. La composición de la reivindicación 38, en la que la célula huesped es una célula de insecto.

41. La composición de la reivindicación 38, en la que la célula huesped es una célula de mamífero.

42. La composición de cualquier reivindicación anterior, en el que el IFN-º está presente en una fuerza de aproximadamente 0, 01 mg/ml a aproximadamente 20, 0 mg/ml.

43. La composición de la reivindicación 42, en el que el IFN-º está presente en una fuerza de aproximadamente 0, 015 mg/ml a aproximadamente 12, 5 mg/ml.

44. La composición de la reivindicación 42, en el que el IFN-º está presente en una fuerza de aproximadamente 0, 025 mg/ml a aproximadamente 10, 0 mg/ml.

45. La composición de la reivindicación 42, en el que el IFN-º está presente en una fuerza de aproximadamente 0, 05 mg/ml a aproximadamente 8, 0 mg/ml.

46. La composición de la reivindicación 42, en el que el IFN-º está presente en una fuerza de aproximadamente 0, 075 mg/ml a aproximadamente 6, 0 mg/ml.

47. La composición de la reivindicación 42, en el que el IFN-º está presente en una fuerza de aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 4, 0 mg/ml.

48. La composición de cualquier reivindicación anterior, en la que la composición incluye EDTA o una de sus sales.

49. La composición de la reivindicación 48, en la que la composición incluye EDTA disódico.

50. La composición de cualquier reivindicación anterior, en la que la composición incluye un agente tensioactivo no iónico.

51. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es un éster de polioxietilensorbitol.

52. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es polisorbato 80.

53. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es polisorbato 20.

54. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es un éster polioxipropilenopolioxietileno.

55. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es Pluronic F68.

56. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es Pluronic F127.

57. La composición de la reivindicación 50, en el que el agente tensioactivo no iónico es un polioxietilen-alcohol.

58. La composición de cualquier reivindicación anterior, en la que la composición se almacena en una jeringuilla prellenada, lista para ser utilizada.

59. La composición de cualquier reivindicación anterior, en la que la composición tiene una vida útil de al menos 6 meses cuando se almacena a 2-8 º C.

60. La composición de la reivindicación 59, en la que la composición tiene una vida útil de al menos 12 meses cuando se almacena a 2-8 º C.

61. La composición de la reivindicación 59, en la que la composición tiene una vida útil de al menos 18 meses cuando se almacena a 2-8 º C.

62. La composición de la reivindicación 59, en la que la composición tiene una vida útil de al menos 20 meses cuando se almacena a 2-8 º C.

63. La composición de la reivindicación 59, en la que la composición tiene una vida útil de al menos 22 meses cuando se almacena a 2-8 º C.

64. La composición de la reivindicación 59, en la que la composición tiene una vida útil de al menos 24 meses cuando se almacena a 2-8 º C.

65. La composición de cualquier reivindicación anterior, para uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple.

66. La composición de las reivindicaciones 1-64, en la que la composición se administra por inyección.

67. La composición de la reivindicación 66, en la que la composición se administra por inyección subcutánea.

68. Un procedimiento para aumentar la solubilidad de interferón-beta (IFN-º) o una variante biológicamente activa de este en una composición farmacéutica en ausencia de seroalbúmina humana, comprendiendo dicho método preparar dicha composición con una formulación de baja fuerza iónica que tiene una fuerza iónica que no es mayor de aproximadamente 20 mM, en el que dicha formulación de fuerza iónica baja es una solución que comprende un tampón a una fuerza de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM para mantener el pH de dicha composición dentro de más o menos 0, 5 unidades de un pH especificado, y donde la composición tiene un pH de 3, 0 a 4, 5; , e incorporar dicho IFN-º o variante biológicamente activa de este en dicha composición.

69. El método de la reivindicación 68, en la que la composición es una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 64, 66 y 67.

70. Un método para preparar una composición farmacéutica exenta de HSA que comprende interferón-beta (IFN-º) sustancialmente monómero, comprendiendo dicho método preparar dicha composición con una formulación de baja fuerza iónica que tiene una fuerza iónica que no es mayor de aproximadamente 20 mM, en el que dicha formulación de fuerza iónica baja es una solución que comprende un tampón a una fuerza de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM para mantener el pH de dicha composición dentro de más o menos 0, 5 unidades de un pH especificado, y donde la composición tiene un pH de 3, 0 a 4, 5;, e incorporar dicho IFN-º en dicma coºposición.

71. El método de la reivindicación 70, en el cual la composición es una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 64, 66 y 67.

72. Una composición farmacéutica producida de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 70.