Formulación de anticuerpos anti-a-beta.

Una formulación estable que comprende:

(a) un anticuerpo monoclonal anti-Aß humanizado a una concentración de 17 mg/ml a 23 mg/ml,

comprendiendo el anticuerpo humanizado una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidosde la SEC ID Nº 1 y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de los restos 1-448de la SEC ID Nº 2;

(b) histidina a una concentración de 5 mM a15 mM;

(c) manitol en una cantidad de 2 % en p/v a 6% en p/v;

(b) metionina a una concentración de 5 mM a15 mM; y

(e) polisorbato en una cantidad de 0,001 % en p/v a 0,1 % en p/v;

teniendo la formulación un pH de 5,5 a 6,5.

Formulación de anticuerpos anti-A-beta

Antecedentes de la invención

La enfermedad de Alzheimer (“EA”) es un trastorno neurodegenerativo caracterizado por la aparición de placas de amiloide, marañas neurofibrilares y una significativa pérdida de neuronas. La proteína º-amiloide (también denominado el péptido Aº) , el principal componente de las placas seniles, se ha implicado en la patogenia de la enfermedad de Alzheimer (Selkoe (1989) Cell 58: 611-612; Hardy (1997) Trends Neurosci. 20:154-159) . Se ha demostrado que la proteína º-amiloide es directamente tóxica para las neuronas en cultivo (Lorenzo y Yankner (1996) Ann. NY Acad. Sci. 777:89-95) e indirectamente tóxica a través de varios mediadores (Koh y col. (1990) Brain Research 533:315-320; Mattson y col. (1992) J. Neurosciences 12:376-389) . Adicionalmente, los modelos in vivo, incluido el ratón PDAPP y un modelo de rata han vinculado la proteína º-amiloide con déficits en aprendizaje, alteración de la función cognitiva e inhibición de la potenciación en el hipocampo a largo plazo (Chen y col. (2000) Nature 408:975-985; Walsh y col. (2002) Nature 416:535-539) . Por tanto, gran parte del interés se ha centrado en terapias que alteran los niveles de º-amiloide para reducir potencialmente la gravedad, o incluso anular, la propia enfermedad.

Una estrategia de tratamiento para la EA recientemente aparecida en respuesta a estudios con éxito en modelos experimentales con ratones y ratas PDAPP es que la inmunización de individuos para proporcionar inmunoglobulinas, tales como anticuerpos (como en el caso de la inmunización pasiva, en la que las inmunoglobulinas terapéuticas se administran a un sujeto) o para generar inmunoglobulinas (inmunización activa, en la que el sistema inmunológico de un sujeto se activa para producir inmunoglobulinas frente a un antígeno administrado) específicas de la proteína º-amiloide. A su vez, estos anticuerpos reducirían la carga de las placas previniendo la agregación de º-amiloide (Solomon y col. (1997) Neurobiology 94:4109-4112) o estimulando las células de microglía hacia fagocitos y eliminar las placas (Bard y col. (2000) Nature Medicine 6: 916-919) . Además, a modo de ejemplo, un anticuerpo monoclonal IgG1 anti-péptido Aº humanizado (un anticuerpo 3D6 humanizado) puede tratar con eficacia la EA mediante unión selectiva del péptido Aº humano.

Para que una proteína y, en concreto, un anticuerpo, permanezca biológicamente activo, una formulación debe preservar intacta la integridad conformacional de al menos una secuencia central de los aminoácidos de la proteína al tiempo que protege de la degradación a múltiples grupos funcionales de la proteína. Las vías de degradación para proteínas pueden implicar inestabilidad química (es decir, cualquier procedimiento que implica la modificación de la proteína mediante formación de enlaces o escisión que tiene como resultado una nueva entidad química) o inestabilidad física (es decir, cambios en la estructura de mayor orden de la proteína) . La inestabilidad química puede ser el resultado de desamidación, racemización, hidrólisis, oxidación, beta, eliminación o intercambio de disulfuro. La inestabilidad física puede ser el resultado de, por ejemplo, desnaturalización, agregación, precipitación

o adsorción. Para una revisión general de la estabilidad de las sustancias farmacéuticas proteicas véase, por ejemplo, Manning, y col. (1989) Pharmaceutical Research 6:903-918. Además, es deseable mantener la estabilidad cuando los polipéptidos vehículo no están incluidos en la formulación.

Aunque la posible aparición de inestabilidades proteicas es ampliamente apreciado, es imposible predecir problemas concretos de inestabilidad para una proteína concreta. Cualquiera de estas inestabilidades puede tener como resultado, potencialmente, la formación de un subproducto o derivado que tiene una actividad menor, mayor toxicidad y/o mayor inmunogenicidad. De hecho, la precipitación de polipéptido puede conducir a trombosis, ausencia de homogeneidad de la forma farmacéutica y reacciones inmunitarias. Por tanto, la seguridad y la eficacia de cualquier formulación farmacéutica de un polipéptido están directamente relacionadas con su estabilidad.

De acuerdo con esto, sigue existiendo la necesidad de formulaciones que no solo mantengan la estabilidad y la actividad biológica de polipéptidos biológicos, por ejemplo de polipéptidos que se unen a Aº, tras almacenamiento y liberación, pero también son adecuados para varias vías de administración terapéutica.

El alcance de la presente invención viene definida por las reivindicaciones y cualquier información que no entre dentro de las reivindicaciones se proporciona únicamente a efectos informativos.

Sumario de la invención

La presente divulgación proporciona formulaciones diseñadas para proporcionar estabilidad y para mantener la actividad biológica de una proteína incorporada biológicamente activa, en concreto proteínas o polipéptidos de unión a Aº, tales como, por ejemplo, anticuerpos frente a Aº, o fragmentos o porciones de los mismos. La divulgación además proporciona formulaciones polipeptídicas, tales como, por ejemplo, formulaciones polipeptídicas líquidas estabilizadas que son resistentes a la formación de subproductos polipeptídicos no deseados.

La integridad de los polipéptidos de unión a antígeno para uso terapéutico es especialmente importante porque si el polipéptido forma subproductos, por ejemplo agregados o fragmentos de degradación durante el almacenamiento, se puede perder bioactividad, de modo que pone en peligro la actividad terapéutica de la molécula por unidad de dosis. Además, existe un deseo agudo de estabilizar los polipéptidos terapéuticos destinados a funciones

especializadas para liberación y uso de ciertas indicaciones biológicas, por ejemplo tratamiento de afecciones neurodegenerativas, en las que un polipéptido debe atravesar la barrera hematoencefálica (BHE) y unirse a un antígeno diana.

En un aspecto, la presente divulgación proporciona una formulación estabilizada que incluye al menos un polipéptido de unión a A , están presentes al menos un agente de tonicidad en una cantidad suficiente para hacer que la formulación sea adecuada para administración y al menos un agente tampón en una cantidad suficiente para mantener un pH fisiológicamente adecuado. La formulación puede ser una formulación liofilizada o líquida. Algunas formulaciones incluyen al menos un antioxidante tal como, por ejemplo, un antioxidante de aminoácido, tal como, por ejemplo, metionina. En algunas formulaciones, el agente de tonicidad es manitol o NaCl. En algunas formulaciones, al menos un agente tampón es succinato, fosfato sódico o un aminoácido tal como histidina. Formulaciones preferidas también incluyen al menos un estabilizante, tal como, por ejemplo, polisorbato 80. En algunas formulaciones, el estabilizante es polisorbato 80, el antioxidante es metionina, el agente de tonicidad es manitol, sorbitol o NaCl y el agente tampón es histidina. En algunas formulaciones se selecciona al menos un polipéptido de unión a A del grupo constituido por un anticuerpo anti-A , un fragmento Fv del anticuerpo anti-A , un fragmento Fab del anticuerpo anti-A , un fragmento Fab’ (2) del anticuerpo anti-A , un fragmento Fd del anticuerpo anti-A , un anticuerpo anti-A monocatenario (scFv) , un fragmento del anticuerpo anti-A de dominio único (dav) , un polipéptido en lámina beta que incluye al menos una región determinante de la complementariedad (CDR) del anticuerpo de un anticuerpo anti-A y un polipéptido no globular que incluye al menos una CDR del anticuerpo de un anticuerpo anti-

A . En algunas formulaciones, al menos un polipéptido de unión a A es un anticuerpo anti-A , por ejemplo, que se une específicamente al epítopo en los restos 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21, 19-22, 33-40, 33-42 de A o un fragmento Fab, Fab’ (2) o Fv del mismo. Ejemplos de anticuerpos anti-A se unen específicamente a un epítopo en los restos 1-10 de A , tal como, por ejemplo, en los restos 1-7, 1-5, 3-7 o 3-6 de A . Otros ejemplos de anticuerpos anti-A se unen específicamente a un epítopo en los restos 13-28 de A , tal como, por ejemplo, en los restos 16-21 o 19-22 de A . Otros ejemplos más de anticuerpos anti-A se unen específicamente a un epítopo en C terminal de A , tal como, por ejemplo, 33-40 o 33-42 de A . Los anticuerpos anti A preferidos incluyen un anticuerpo anti A humanizado, por... [Seguir leyendo]

1. Una formulación estable que comprende:

(a) un anticuerpo monoclonal anti-A humanizado a una concentración de 17 mg/ml a 23 mg/ml, comprendiendo el anticuerpo humanizado una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 1 y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de los restos 1-448 de la SEC ID Nº 2;

(b) histidina a una concentración de 5 mM a15 mM;

(c) manitol en una cantidad de 2 % en p/v a 6% en p/v;

(b) metionina a una concentración de 5 mM a15 mM; y

(e) polisorbato en una cantidad de 0, 001 % en p/v a 0, 1 % en p/v; teniendo la formulación un pH de 5, 5 a 6, 5.

2. La formulación de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo está presente en una concentración de 20 mg/ml.

3. La formulación de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la histidina está presente en una concentración de 10 mM.

4. La formulación de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el manitol está presente en una cantidad del 4 % en p/v.

5. La formulación de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la metionina está presente a una concentración de 10 mM.

6. La formulación de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el polisorbato está presente en una cantidad del 0, 005% en p/v.

7. La formulación de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el pH es 6, 0.

8. La formulación de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la histidina es L-histidina, el manitol es D-manitol, la metionina es L-metionina y el polisorbato es polisorbato 80.

9. Una forma farmacéutica unitaria que comprende una formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende de 10 mg a 250 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

10. La forma farmacéutica unitaria de la reivindicación 9, que comprende de 40 mg a 200 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

11. La forma farmacéutica unitaria de la reivindicación 10, que comprende de 60 mg a 160 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

12. La forma farmacéutica unitaria de la reivindicación 11, que comprende de 80 mg a 120 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

13. La forma farmacéutica unitaria de la reivindicación 12, que comprende 100 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

14. Un producto terapéutico, que comprende:

(i) un vial de vidrio que contiene una formulación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende de 10 mg a 250 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

(ii) etiquetado para el uso que incluye instrucciones de uso del volumen adecuado de la formulación para alcanzar una dosis de 0, 0001 mg/kg a 100 mg/kg en un paciente.

15. El producto terapéutico de la reivindicación 14, que comprende de 40 mg a 200 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

16. El producto terapéutico de la reivindicación 15, que comprende de 60 mg a 160 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

17. El producto terapéutico de la reivindicación 16, que comprende de 80 mg a 120 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

18. El producto terapéutico de la reivindicación 17, que comprende 100 mg del anticuerpo monoclonal anti-A humanizado.

19. El producto terapéutico de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, en el que la dosis es de 0, 01 mg/kg a 5 mg/kg.

20. El producto terapéutico de la reivindicación 19, en el que la dosis es de 1 mg/kg a 2 mg/kg.

21. El producto terapéutico de la reivindicación 14, en el que la dosis es de 5 mg/kg.

22. El producto terapéutico de la reivindicación 14, en el que la dosis es de 10 mg/kg.

23. El producto terapéutico de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 22, en el que el uso es una administración 5 subcutánea.

24. El producto terapéutico de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 22, en el que el uso es una administración intravenosa.

25. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, la forma farmacéutica unitaria de una cualquiera

de las reivindicaciones 9 a 13 o el producto terapéutico de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 24 para usar 10 en el tratamiento o profilaxis de una enfermedad caracterizada por depósitos de A .

26. La formulación, forma farmacéutica unitaria o producto terapéutico de la reivindicación 25, en los que la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer.

27. Uso de una formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento o profilaxis de una enfermedad que se caracteriza por depósitos de A .

28. El uso de acuerdo con la reivindicación 27, en el que la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer.