Un polinucleótido aislado que comprende un polinucleótido elegido de:

(a) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos el 70% de identidad con un segundo polipéptido que comprende una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8;

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos el 95% de identidad con un segundo polipéptido que comprende una secuencia elegida de: SEC ID Nº: 7 y 8;

(c) un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende una secuencia elegida de: SEC ID Nº: 7 y 8;

(d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que puede producir anticuerpos que tienen especificidad de unión por un polipéptido que tiene una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8;

(e) un polinucleótido que codifica un epítope que lleva la porción de un polipéptido que tiene una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8; y

(f) un polinucleótido complementario a un polinucleótido en (a), (b), (c), (d) o (e) .

Antígenos BVH-A2 y BVH-A3 de Streptococcus del grupo B

Campo de la invención La presente invención está relacionada con polipéptidos de Streptococcus del grupo B (GBS) (S. agalactiae) y 5 fragmentos de ADN correspondientes que pueden ser útiles para prevenir, diagnosticar y/o tratar infecciones por GBS en individuos tales como seres humanos.

Antecedentes de la invención

Los Streptococcus son bacterias Gram (+) que se diferencian por antígenos de hidratos de carbono específicos para grupos A a O encontrados sobre su superficie celular. Los grupos de Streptococcus se distinguen adicionalmente por antígenos de polisacáridos capsulares específicos para tipo. Se han identificado varios serotipos para GBS: Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII y VIII. Los GBS también contienen proteínas antigénicas conocidas como "proteínas C" (alfa, beta, gamma y delta) , algunas de las cuales se han clonado.

Aunque GBS es un componente común de la flora vaginal y colónica humana normal, este patógeno se reconoce desde hace tiempo como una causa principal de infecciones en neonatos, futuras madres, algunas adultas no embarazadas, además de mastitis en rebaños lecheros. Futuras madres expuestas a GBS están en riesgo de infección postparto y pueden transferir la infección a su bebé cuando el niño pasa por la vía del parto.

Las infecciones por GBS en lactantes están limitadas a una infancia muy temprana. Aproximadamente el 80% de las infecciones en lactantes se producen en los primeros días de vida, la llamada enfermedad de aparición temprana. Las infecciones de aparición tardía se producen en lactantes entre 1 semana y 2 a 3 meses de edad. Los síndromes clínicos de enfermedad por GBS en recién nacidos incluyen septicemia, meningitis, neumonía, celulitis, osteomielitis, artritis séptica, endocarditis, epiglotis. Además de enfermedad aguda debida a GBS, que es por sí misma costosa, las infecciones por GBS en recién nacidos pueden producir muerte, discapacidad y, en casos raros, la reaparición de infección. Aunque el organismo es sensible a antibióticos, la alta tasa de ataque y la rápida aparición de septicemia en neonatos y meningitis en lactantes produce alta morbilidad y mortalidad.

Entre mujeres embarazadas, GBS produce enfermedad clínica que varía de infección del tracto urinario leve a septicemia y meningitis potencialmente mortales, que también incluyen osteomielitis, endocarditis, amnionitis, endometritis, infecciones por heridas (postcesárea y postepisiotomía) , celulitis, fascitis.

Entre adultas no embarazadas, las presentaciones clínicas de enfermedad por GBS invasiva casi siempre toman la forma de bacteremia primaria, pero también piel de infección de tejido blando, neumonía, urosepticemia, endocarditis, peritonitis, meningitis, empiema. La piel de infecciones de tejido blando incluye celulitis, úlceras periféricas infectadas, osteomielitis, artritis séptica e infecciones por decúbito o por heridas. Entre personas en riesgo, hay huéspedes debilitados tales como personas con una enfermedad crónica tal como diabetes mellitus y cáncer, o personas ancianas.

Las infecciones por GBS también pueden producirse en animales y producen mastitis en rebaños lecheros.

Para encontrar una vacuna que protegerá a los huéspedes de infección por GBS, los investigadores han vuelto a los antígenos específicos para tipo. Desafortunadamente, estos polisacáridos han demostrado ser escasamente inmunogénicos en huéspedes y están limitados al serotipo particular del que se origina el polisacárido. Además, los polisacáridos capsulares provocan una respuesta independiente de linfocitos T, es decir, sin producción de IgG. Consecuentemente, los antígenos de polisacáridos capsulares son inadecuados como componente de vacuna para la protección contra infección por GBS.

Otros se han centrado en el antígeno beta de la proteína C que demostró propiedades inmunogénicas en modelos de ratón y modelos de conejo. Se encontró que esta proteína era inadecuada como vacuna humana debido a su propiedad no deseable de interaccionar con alta afinidad y en un modo no inmunogénico con la región Fc de IgA humana. Los antígenos alfa de la proteína C son raros en serotipos de tipo III de GBS, que es el serotipo 45 responsable de la mayoría de las afecciones mediadas por GBS y, por tanto, son de poco uso como componente de vacuna.

Por tanto, permanece la necesidad sin satisfacer de polipéptidos de GBS que pueden ser útiles para prevenir, diagnosticar y/o tratar infecciones por GBS en individuos tales como seres humanos.

El documento WO 99/42588 desvela antígenos de Streptococcus del grupo B que son antigénicos y útiles para 50 componentes de vacuna para la profilaxis o terapia de infección por Streptococcus en animales. También se desvelan procedimientos de producción de antígenos de proteína, además de ensayos de diagnóstico para detectar infección bacteriana por Streptococcus.

Resumen de la invención

Según un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene al menos el 70% de identidad con un segundo polipéptido que comprende una secuencia elegida de SEC ID Nº: 3, 4, 7 y 8 o fragmentos o análogos del mismo.

Según un aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEC ID Nº: 3, 4, 7 y 8 o fragmentos o análogos de los mismos.

En otros aspectos se proporcionan polipéptidos codificados por polinucleótidos de la invención, composiciones farmacéuticas, vectores que comprenden polinucleótidos de la invención operativamente ligados a una región de control de la expresión, además de células huésped transfectadas con dichos vectores y procedimientos de producción de polipéptidos que comprenden cultivar dichas células huésped en condiciones adecuadas para la expresión.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 representa la secuencia de ADN del gen BVH-A2 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III; SEC ID Nº: 1.

La Figura 2 representa la secuencia de ADN del gen BVH-A2 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III sin la región que codifica su péptido conductor; SEC ID Nº: 2.

La Figura 3 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido de BVH-A2 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III; SEC ID Nº: 3.

La Figura 4 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido de BVH-A2 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III sin el péptido conductor de 37 residuos de aminoácidos; SEC ID Nº:

4.

La Figura 5 representa la secuencia de ADN del gen BVH-A3 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III; SEC ID Nº: 5.

La Figura 6 representa la secuencia de ADN del gen BVH-A3 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III sin la región que codifica el péptido conductor; SEC ID Nº: 6.

La Figura 7 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido de BVH-A3 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III; SEC ID Nº: 7.

La Figura 8 representa la secuencia de aminoácidos del polipéptido de BVH-A3 de la cepa NCS954 de Streptococcus del grupo B de serotipo III sin el péptido conductor de 28 residuos de aminoácidos; SEC ID Nº:

8.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona polinucleótidos purificados y aislados que codifican polipéptidos de Streptococcus del grupo B que pueden usarse para prevenir, tratar y/o diagnosticar infección estreptocócica. La presente invención proporciona cuatro polinucleótidos preferidos separados, cada uno definido individualmente y por separado por una de SEC ID Nº 1, 2, 5 y 6. En la presente invención se proporcionan adicionalmente cuatro polipéptidos separados, cada uno definido individualmente y por separado por una de SEC ID Nº: 3, 4, 7 y 8. Aquellos expertos en la materia apreciarán que la invención incluye polinucleótidos que codifican análogos tales como mutantes, variantes, homólogos y derivados de tales polipéptidos, como se describen en este documento en la presente solicitud de patente. La invención también incluye moléculas de ARN correspondientes a las moléculas de ADN de la invención. Además de las moléculas de ADN y ARN, la invención incluye los polipéptidos y anticuerpos... [Seguir leyendo]

1. Un polinucleótido aislado que comprende un polinucleótido elegido de:

(a) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos el 70% de identidad con un segundo polipéptido que comprende una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8;

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos el 95% de identidad con un segundo polipéptido que comprende una secuencia elegida de: SEC ID Nº: 7 y 8;

(c) un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende una secuencia elegida de: SEC ID Nº: 7 y 8;

(d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que puede producir anticuerpos que tienen especificidad de unión por un polipéptido que tiene una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8;

(e) un polinucleótido que codifica un epítope que lleva la porción de un polipéptido que tiene una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8; y

(f) un polinucleótido complementario a un polinucleótido en (a) , (b) , (c) , (d) o (e) .

2. El polinucleótido aislado según la reivindicación 1 seleccionado de

(a) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos idéntica al menos el 80% a la secuencia de nucleótidos expuesta en SEC ID Nº: 5 ó 6;

(b) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos idéntica al menos el 90% a la secuencia de nucleótidos expuesta en SEC ID Nº: 5 ó 6;

(c) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos idéntica al menos el 95% a la secuencia de nucleótidos expuesta en SEC ID Nº: 5 ó 6; y

(d) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos expuesta en SEC ID Nº: 5 ó 6.

3. El polinucleótido aislado de tanto la reivindicación 1 como la reivindicación 2, en el que dicho polinucleótido es ADN.

4. El polinucleótido aislado de tanto la reivindicación 1 como la reivindicación 2, en el que dicho polinucleótido es ARN.

5. El polinucleótido aislado de la reivindicación 1 que se hibrida bajo condiciones rigurosas con tanto

(a) un polinucleótido que codifica un polipéptido como

(b) el complemento de un polinucleótido que codifica el polipéptido;

en el que dicho polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en tanto SEC ID Nº: 7 como SEC ID Nº: 8.

6. El polinucleótido aislado de la reivindicación 1, parte (e) , que se hibrida bajo condiciones rigurosas con tanto

(a) un polinucleótido que codifica un polipéptido como

(b) el complemento de un polinucleótido que codifica el polipéptido;

en el que dicho polipéptido comprende al menos 10 residuos de aminoácidos contiguos de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID Nº: 7 o SEC ID Nº: 8.

7. Un vector que comprende el polinucleótido aislado de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que dicho polinucleótido aislado está operativamente ligado a una región de control de la expresión.

8. Una célula huésped transfectada con el vector de la reivindicación 7.

9. Un procedimiento para producir un polipéptido codificado por el polinucleótido aislado según tanto la reivindicación 1 como la reivindicación 2, comprendiendo dicho procedimiento cultivar la célula huésped según la reivindicación 8 en condiciones adecuadas para la expresión de dicho polipéptido.

10. Un polipéptido aislado elegido de:

(a) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica al menos el 70% a la secuencia de aminoácidos expuesta en tanto SEC ID Nº: 7 como SEC ID Nº: 8;

(b) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica al menos el 90% a la secuencia de aminoácidos expuesta en tanto SEC ID Nº: 7 como SEC ID Nº: 8

(c) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica al menos el 95% a la secuencia de aminoácidos expuesta en tanto SEC ID Nº: 7 como SEC ID Nº: 8;

(d) un polipéptido que comprende una secuencia elegida de: SEC ID Nº: 7 y 8;

(e) un polipéptido que puede producir anticuerpos que tienen especificidad de unión por un polipéptido que tiene una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8;

(f) un polipéptido que comprende un epítope que lleva la porción de un polipéptido que tiene una secuencia elegida de SEC ID Nº: 7 y 8;

(g) el polipéptido de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) o (f) en el que el residuo Met del extremo N está delecionado; y

(h) el polipéptido de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) o (f) en el que la secuencia de aminoácidos secretora está delecionada.

11. Un polipéptido quimérico que comprende el polipéptido aislado de SEC ID Nº: 7 u 8.

12. Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido aislado según la reivindicación 10 o el polipéptido quimérico según la reivindicación 11 y un vehículo, diluyente o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

13. Uso del polipéptido aislado según la reivindicación 10 o el polipéptido quimérico según la reivindicación 11 para la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico o profiláctico de infección bacteriana por Streptococcus del grupo B (GBS) en un individuo.

14. Uso según la reivindicación 13, en el que el individuo es un neonato o un lactante.

15. Uso según la reivindicación 13 ó 14, en el que dicha infección es septicemia, meningitis, neumonía, celulitis, osteomielitis, artritis séptica, endocarditis o epiglotis.

16. Uso según la reivindicación 13, en el que el individuo es una mujer embarazada.

17. Uso según la reivindicación 13 o la reivindicación 16, en el que dicha infección es una infección urinaria, septicemia, meningitis, osteomielitis, endocarditis, amnionitis, endometritis, infección por heridas poscesárea, infección por heridas postepisiotomía, celulitis o fascitis.

18. Uso según la reivindicación 13, en el que el individuo es un adulto no embarazado.

19. Uso según la reivindicación 18, en el que dicha infección es bacteremia primaria, piel de una infección de tejido blando, neumonía, urosepticemia, endocarditis, peritonitis, meningitis o empiema.

20. Uso según la reivindicación 13, en el que el individuo es una vaca.

21. Uso según la reivindicación 20, en el que dicha infección es mastitis.

22. Un procedimiento para diagnosticar una infección bacteriana por Streptococcus del grupo B (GBS) en un individuo susceptible a infección por GBS que comprende

a) incubar un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, con una muestra biológica del individuo para formar una mezcla, en el que el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, tiene especificidad de unión por un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID Nº: 7 u 8; y b) detectar anticuerpo específicamente unido, o fragmento de unión a antígeno del mismo, en la mezcla que indica la presencia de GBS.

23. Kit que comprende el polipéptido aislado según la reivindicación 10 o el polipéptido quimérico según la reivindicación 11 para la detección o diagnóstico de infección por GBS.

Figura 1 (SEC ID Nº: 1)

Figura 2 (SEC ID Nº: 2)

Figura 3 (SEC ID Nº: 3)

Figura 4 (SEC ID Nº: 4) Figura 5 (SEC ID Nº: 5) Figura 6 (SEC ID Nº: 6) Figura 7 (SEC ID Nº: 7)

Figura 8 (SEC ID Nº: 8)