POLIPEPTIDOS DE STREPTOCOCCUS PYOGENES Y FRAGMENTOS DE ADN CORRESPONDIENTE.
Un polipéptido aislado que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID NO:
2, en el que se ha suprimido el péptido líder terminal de 21 restos de aminoácidos de la SEC ID NO: 2, y siendo el polipéptido aislado capaz de producir un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID NO:
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CA02/00207.
Solicitante: ID BIOMEDICAL CORPORATION.
Nacionalidad solicitante: Canadá.
Dirección: 525 CARTIER BOULEVARD WEST,LAVAL, QC H7V 3S8.
Inventor/es: BRODEUR,BERNARD,R, HAMEL,JOSEE, MARTIN,DENIS, RIOUX,STEPHANE, RHEAULT,PATRICK.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 27 de Enero de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/315 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Streptococcus (G), p. ej. Enterococci.
Clasificación PCT:
- A61K39/09 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Streptococcus.
- A61P17/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES. › Medicamentos para el tratamiento de problemas dermatológicos.
- A61P31/00 A61P […] › Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos.
- C07K14/315 C07K 14/00 […] › de Streptococcus (G), p. ej. Enterococci.
- C07K19/00 C07K […] › Péptidos híbridos (Inmoglobulinas híbridas compuestas solamente de inmoglobulinas C07K 16/46).
- C12N15/31 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas microbianas, p. ej. enterotoxinas.
- C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
- G01N33/569 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
Clasificación antigua:
- A61K39/09 A61K 39/00 […] › Streptococcus.
- A61P17/00 A61P […] › Medicamentos para el tratamiento de problemas dermatológicos.
- A61P31/00 A61P […] › Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos.
- C07K14/315 C07K 14/00 […] › de Streptococcus (G), p. ej. Enterococci.
- C07K19/00 C07K […] › Péptidos híbridos (Inmoglobulinas híbridas compuestas solamente de inmoglobulinas C07K 16/46).
- C12N15/31 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas microbianas, p. ej. enterotoxinas.
- C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
- G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
Fragmento de la descripción:
Polipéptidos de Streptococcus pyogenes y fragmentos de ADN correspondientes.
Campo tecnológico
La presente invención se refiere a polipéptidos de Streptococcus pyogenes (estreptococos del grupo 4) que se pueden usar para prevenir, diagnosticar y/o tratar una infección estreptocócica.
Antecedentes de la invención
Los estreptococos son bacterias Gram (+) que se diferencian por los antígenos carbohidratos específicos de grupos A a O que se encuentran en la superficie celular. Los aislados de S. pyogenes se distinguen además por los antígenos de proteína M de tipo específico. Las proteínas M son factores de virulencia importantes que son muy variables tanto en pesos moleculares como en secuencias. Realmente, se han identificado más de 80 tipos de proteína M basándose en las diferencias antigénicas.
S. pyogenes es responsable de muchos tipos de infecciones, incluyendo faringitis, erisipela e impétigo, escarlatina, y enfermedades invasivas tales como bacteriemia y fascitis necrotizante. En los últimos años se ha documentado en muchos países un resurgimiento de la enfermedad invasiva, incluyendo en los de América del Norte y Europa. Aunque el organismo es sensible a antibióticos, la alta tasa de ataques y la rápida aparición de septicemias dan como resultado una alta morbosidad y mortalidad.
Para desarrollar una vacuna que proteja a los huéspedes frente a la infección por S. pyogenes, los esfuerzos se han centrado en factores de virulencia tales como las proteínas M de tipo específico. Sin embargo, se ha encontrado que la parte amino terminal de las proteínas M induce anticuerpos de reactividad cruzada que reaccionan con miocardio, tropomiosina, miosina y vimentina humanos, lo cual puede estar implicado en enfermedades autoinmunes. Otros han usado técnicas recombinantes para producir proteínas híbridas complejas que contienen péptidos amino terminales de las proteínas M de diferentes serotipos. Sin embargo, sería muy complejo producir y estandarizar una vacuna segura que contenga serotipos de S. pyogenes.
Además de los antígenos específicos de serotipo, otras proteínas de S. pyogenes han generado interés como potenciales candidatos para vacunas. Se ha mostrado que la peptidasa C5a, que es expresada por al menos 40 serotipos de S. pyogenes es inmunógena en ratones, pero su capacidad para reducir el nivel de colonización nasofaríngea estaba limitada. Otros investigadores también se han centrado en las exotoxinas pirógenas estreptocócicas que parece que tienen una función importante en la patogénesis de la infección. La inmunización con estas proteínas prevenía los síntomas letales del choque tóxico, pero no prevenía la colonización.
La Universidad de Oklahoma ha preparado un proyecto de secuenciación genómica de la cepa de S. pyogenes GAS M1 (http://dnal.chem.ou.edu/strep.html).
Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad no satisfecha de antígenos de S. pyogenes que se puedan usar como componentes de vacuna para la profilaxis y/o terapia de la infección por S. pyogenes.
Sumario de la invención
De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene una identidad de al menos 70% con un segundo polipéptido que comprende la SEC ID No: 2, o fragmentos o análogos del mismo.
De acuerdo con un aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos SEC ID No: 2, o fragmentos o análogos del mismo.
En otros aspectos, se proporcionan polipéptidos codificados por nucleótidos de la invención, composiciones farmacéuticas, vectores que comprenden polinucleótidos de la invención operativamente unidos a una región de control de la expresión, así como células huésped transfectadas con dichos vectores, y procedimientos para producir polipéptidos que comprenden cultivar dichas células huésped en condiciones adecuadas para la expresión.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 representa la secuencia de ADN del gen BVH-P7 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID NO: 1. La parte subrayada de la secuencia representa la región que codifica el péptido líder;
la Figura 2 representa la secuencia de aminoácidos de la proteína BVH-P7 del serotipo M1 de la cepa de S. pyogenes ATCC700294; SEC ID NO: 2. La secuencia subrayada representa los 21 restos de aminoácidos del péptido líder;
la Figura 3 representa la comparación de las secuencias de aminoácidos previstas de los marcos de lectura abiertos de BVH-P7 de las cepas de S. pyogenes Spy74 (SEC ID NO: 3), Spy70 (SEC ID NO: 4), Spy69 (SEC ID NO: 5), Spy68 (SEC ID NO: 6), Spy 60 (SEC ID NO: 7), ATCC12357 (SEC ID NO: 8), ATCC700294 (SEC ID NO: 2), usando el programa de software de análisis de secuencias Clustal W de MacVector (versión 6.5).
Bajo el alineamiento hay una línea de consenso en la que * y los caracteres indican los restos de aminoácidos idénticos y similares, respectivamente.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona polinucleótidos aislados y purificados que codifican polipéptidos estreptocócicos que se pueden usar para diagnosticar, prevenir y/o tratar la infección estreptocócica.
De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene una identidad de al menos 70% con un segundo polipéptido que comprende la SEC ID NO:2 o fragmentos o análogos de la misma.
De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene una identidad de al menos 80% con un segundo polipéptido que comprende la SEC ID NO:2 o fragmentos o análogos de la misma.
De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un polipéptido aislado que comprende un polipéptido elegido de: (a) un polipéptido que comprende la SEC ID NO: 2; (b) un polipéptido que comprende un fragmento antigénico o inmunogénico que tiene al menos 10 restos de aminoácidos contiguos del polipéptido de (a); (c) un polipéptido que comprende un análogo antigénico o inmunogénico que tiene una identidad de al menos 70% con el polipéptido de (a) o (b); (d) un polipéptido que comprende un análogo antigénico o inmunogénico que tiene una identidad de al menos 95% con el polipéptido de (a) o (b); (e) un polipéptido capaz de generar anticuerpos que tienen especificidad de unión por el polipéptido de uno cualquiera de (a), (b), (c) y (d); (f) una parte que lleva epítopo del polipéptido de uno cualquiera de (a), (b), (c) y (d); (g) el polipéptido de uno cualquiera de (a), (b), (c), (d) y (f) en el que se ha suprimido el resto Met N-terminal; y (h) el polipéptido de uno cualquiera de (a), (b), (c), (d), (e), (f) y (g), en el que se ha suprimido la secuencia de aminoácidos secretora.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un polipéptido aislado que comprende un polipéptido elegido de: (a) un polipéptido que comprende la SEC ID NO: 2; (b) un polipéptido que tiene una identidad de al menos 70% con el polipéptido de (a); (c) un polipéptido que tiene una identidad de al menos 95% con el polipéptido de (a); (d) un polipéptido capaz de generar anticuerpos que tienen especificidad de unión por el polipéptido de (a); (e) una parte que lleva epítopo del polipéptido de (a); (f) el polipéptido de uno cualquiera de (a), (b), (c), (d) y (e), en el que se ha suprimido el resto Met N-terminal; y (g) el polipéptido de uno cualquiera de (a), (b), (c), (d), (e) y (f) en el que se ha suprimido la secuencia de aminoácidos secretora.
De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene una identidad de al menos 90% con un segundo polipéptido que comprende la SEC ID NO: 2 o fragmentos o análogos de la misma.
De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene una identidad de al menos 95% con un segundo polipéptido que comprende la SEC ID NO: 2 o fragmentos o análogos de la misma.
De acuerdo con un aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos caracterizados por la secuencia de aminoácidos que comprende la SEC ID NO: 2 o fragmentos o análogos de la misma.
De acuerdo con un aspecto, la presente...
Reivindicaciones:
1. Un polipéptido aislado que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID NO: 2, en el que se ha suprimido el péptido líder terminal de 21 restos de aminoácidos de la SEC ID NO: 2, y siendo el polipéptido aislado capaz de producir un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID NO: 2.
2. Un polinucleótido aislado que consiste en (a) una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de la reivindicación 1, o (b) una secuencia de nucleótidos que es complementaria del polinucleótido aislado que codifica el polipéptido de la reivindicación 1.
3. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo, diluyente o adyuvante farmacéuticamente aceptable y un polipéptido aislado, en la que el polipéptido aislado se elige de:
4. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo, diluyente o adyuvante farmacéuticamente aceptable y un polipéptido aislado, en la que el polipéptido aislado se elige de:
en la que el polipéptido aislado es capaz de producir un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID NO: 2.
5. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3 o reivindicación 4, en la que el polipéptido aislado induce una respuesta inmune contra Streptococcus pyogenes.
6. La composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-5, en la que el polipéptido aislado se produce por un procedimiento que comprende cultivar una célula huésped en condiciones adecuadas para la expresión de dicho polipéptido, en el que la célula huésped es transfectada con un vector que comprende un polinucleótido que codifica el polipéptido, y en el que el polinucleótido está operativamente unido a una región de control de la expresión.
7. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 3-6, siendo la composición farmacéutica una vacuna.
8. Uso del polipéptido de la reivindicación 1 o la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 3-7 en la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de la faringitis, erisipela, impétigo, escarlatina, bacteriemia, fascitis necrotizante o choque tóxico.
9. Uso del polipéptido de la reivindicación 1 o de la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 3-7 en la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección estreptocócica en un huésped.
10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9 en el que la infección estreptocócica es una infección por Streptococcus pyogenes.
11. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 o reivindicación 10 en el que el huésped es un mamífero.
12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11 en el que el mamífero es un ser humano.
13. Un procedimiento in vitro para detectar estreptococos en una muestra biológica, que comprende:
14. Un procedimiento in vitro para detectar un anticuerpo específico para estreptococos en una muestra biológica, que comprende:
15. El procedimiento de la reivindicación 13 o reivindicación 14, en el que el estreptococo es Streptococcus pyogenes.
16. Kit que comprende un polipéptido aislado elegido de
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