Antígeno de streptococcus del grupo B.

Un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que consiste en una secuencia de aminoácidos idéntica al menos el 85 % a la largo de la longitud completa de la secuencia de aminoácidos elegida de:

SEC ID Nº: 4, 6, 8 y 12, en el que el polipéptido codificado conserva la capacidad de producir anticuerpos que tienen especificidad de unión para Streptococcus del grupo B.

Antigeno de Streptococcus del grupo B

Campo de la invención La presente invencion esta relacionada con polipeptidos, epitopes y anticuerpos dirigidos a estos epitopes, mas 5 particularmente al polipeptido de Sip de Streptococcus del grupo B (GBS) , tambien llamado Streptococcus agalactiae, que pueden usarse para prevenir, diagnosticar y/o tratar infeccion estreptococica.

Antecedentes de la invención Los Streptococcus son bacterias Gram (+) que se diferencian por antigenos de hidratos de carbono especificos para grupos A a O encontrados sobre su superficie celular. Los grupos de Streptococcus se distinguen adicionalmente por antigenos de polisacaridos capsulares especificos para tipo. Se han identificado varios serotipos para el Streptococcus del grupo B (GBS) : Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII y VIII. Los GBS tambien contienen proteinas antigenicas conocidas como "proteinas C" (alfa, beta, gamma y delta) , algunas de las cuales se han clonado.

Aunque GBS es un componente comun de la flora vaginal y colonica humana normal, este patogeno se reconoce desde hace tiempo como una causa principal de septicemia neonatal y meningitis, meningitis de aparicion tardia en lactantes, endometritis postparto, ademas de mastitis en rebanos de ganado lechero. Futuras madres expuestas a GBS estan en riesgo de infeccion postparto y pueden transferir la infeccion a su bebe cuando el nino pasa por la via del parto. Aunque el organismo es sensible a antibioticos, la alta tasa de ataque y la rapida aparicion de septicemia en neonatos y meningitis en lactantes produce alta morbilidad y mortalidad.

Las infecciones por GBS en lactantes estan limitadas a una infancia muy temprana. Aproximadamente el 80 % de las infecciones en lactantes se producen en los primeros dias de vida, la llamada enfermedad de aparicion temprana. Las infecciones de aparicion tardia se producen en lactantes entre 1 semana y 2 a 3 meses de edad. Los sindromes clinicos de enfermedad por GBS en recien nacidos incluyen septicemia, meningitis, neumonia, celulitis, osteomielitis, artritis septica, endocarditis, epiglotis. Ademas de enfermedad aguda debida a GBS, que es por si misma costosa, las infecciones por GBS en recien nacidos pueden producir muerte, discapacidad y, en casos raros, la reaparicion de infeccion. Aunque el organismo es sensible a antibioticos, la alta tasa de ataque y la rapida aparicion de septicemia en neonatos y meningitis en lactantes produce alta morbilidad y mortalidad.

Entre mujeres embarazadas, GBS produce enfermedad clinica que varia de infeccion urinaria leve a septicemia y meningitis potencialmente mortales, que tambien incluyen osteomielitis, endocarditis, amnionitis, endometritis, infecciones por heridas (postcesarea y postepisiotomia) , celulitis, fascitis.

Entre personas adultas no embarazadas, las presentaciones clinicas de enfermedad por GBS invasiva casi siempre toman la forma de bacteremia primaria, pero tambien piel de infeccion de tejido blando, neumonia, urosepticemia, endocarditis, peritonitis, meningitis, empiema. La piel de infecciones de tejido blando incluye celulitis, ulceras perifericas infectadas, osteomielitis, artritis septica e infecciones por decubito o por heridas. Entre personas en riesgo, hay huespedes debilitados tales como personas con una enfermedad cronica tal como diabetes mellitus y cancer, o personas ancianas.

Las infecciones por GBS tambien pueden producirse en animales y producen mastitis en rebanos de ganado lechero.

Para encontrar una vacuna que protegera a los individuos de infeccion por GBS, los investigadores han vuelto a los antigenos especificos para tipo. Oesafortunadamente, estos polisacaridos han demostrado ser escasamente inmunogenicos en seres humanos y estan limitados al serotipo particular del que se origina el polisacarido. Ademas, los antigenos de polisacaridos capsulares son inadecuados como componente de vacuna para la proteccion contra infeccion por GBS.

Otros se han centrado en el antigeno beta de la proteina C que demostro propiedades inmunogenicas en ratones y modelos de conejo. Se encontro que esta proteina era inadecuada como vacuna humana debido a su propiedad no 45 deseable de interaccionar con alta afinidad y en un modo no inmunogenico con la region Fc de IgA humana. Los antigenos alfa de la proteina C son raros en serotipos de tipo III de GBS, que es el serotipo responsable de la mayoria de las afecciones mediadas por GBS y, por tanto, son de poco uso como componente de vacuna.

El documento PCT WO 99/42588 se publico el 17 de febrero de 1999, titulado 'Antigenos de Streptococcus del grupo B', que describe el polipeptido IO-42, que se reivindica que es antigenico. Este polipeptido se conoce ahora 50 con el nombre Sip, de Surface Immunogenic Protein (proteina inmunogenica superficial) (Brodeur y col., 2000, Infect. Immun. 68:5610) .

Se encontro que este polipeptido estaba altamente conservado y se produjo por cada GBS examinado hasta la fecha, que incluyo cepas aisladas representativas de todos los serotipos (Brodeur y col., 2000, Infect. Immun. 68:5610) . Este polipeptido de 53 kOa es reconocido por el sistema inmunitario humano. Y, lo que es mas importante, se mostro que la inmunizacion de ratones adultos con el polipeptido de Sip inducia una fuerte respuesta especifica de anticuerpo y conferia proteccion contra infeccion experimental con cepas de GBS que representaban los serotipos Ia/c, Ib, II/R, III, V y VI (Brodeur y col.) . Tambien se demostro que los anticuerpos especificos para Sip reconocieron sus epitopes en las superficies celulares de diferentes cepas de GBS, que incluyen representantes de los nueve serotipos (Rioux y col., 2001, Infect. Immun. 69:5162) . Ademas, recientemente se informo que la administracion pasiva de anti-suero de Sip de conejo a ratones prenados o la inmunizacion de ratones hembra antes del embarazo con Sip recombinante purificada confirio inmunidad protectora a sus crias contra infeccion por GBS (Martin y col. Abstr. 101th Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 2001) .

Por tanto, queda una necesidad sin satisfacer de polipeptidos de Streptococcus del grupo B que puedan usarse para prevenir, diagnosticar y/o tratar infeccion por Streptococcus del grupo B. Se presentan datos que describen la localizacion de regiones accesibles a la superficie sobre el polipeptido de Sip de Streptococcus del grupo B. Tambien se presentan ejemplos que presentan la utilizacion de estas regiones accesibles a la superficie para el desarrollo de vacunas.

Resumen de la invención Segun un aspecto, la presente invencion proporciona un polinucleotido aislado que codifica un polipeptido que consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 85 % a la largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de: SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12, en el que el polipeptido codificado conserva la capacidad de producir anticuerpos que tienen especificidad de union por Streptococcus del grupo B. En el presente documento tambien se desvela un polinucleotido aislado que codifica un polipeptido que tiene al menos el 70 % de identidad con un segundo polipeptido que comprende una secuencia elegida de SEC IO N°: 1 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 o fragmentos o analogos del mismo.

En otros aspectos se proporcionan polipeptidos codificados por polinucleotidos de la invencion en la medida en que esten englobados por las reivindicaciones adjuntas, vectores que comprenden polinucleotidos de la invencion operativamente ligados a una region de control de la expresion, ademas de celulas huesped transfectadas con dichos vectores y procedimientos para producir polipeptidos que comprenden cultivar dichas celulas huesped en condiciones adecuadas para la expresion.

En otro aspecto la presente invencion proporciona un procedimiento para la deteccion de un anticuerpo especifico para antigeno de Streptococcus del grupo B en una muestra biologica previamente obtenida de un huesped, que comprende:

(a) incubar uno o mas de los polipeptidos segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16 con la muestra biologica para formar una mezcla; y

(b) detectar polipeptido especificamente unido en la mezcla que indica la presencia de un anticuerpo especifico para el antigeno de Streptococcus del grupo B en la muestra.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona un kit que comprende el polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 para la deteccion o el diagnostico de infeccion por Streptococcus del grupo B.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 representa la secuencia de AON del gen Lsip-1 de la cepa C388/90 de Streptococcus del grupo... [Seguir leyendo]

1. Un polinucleotido aislado que codifica un polipeptido que consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 85 % a la largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de: SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12, en el que el polipeptido codificado conserva la capacidad de producir anticuerpos que tienen especificidad de union para Streptococcus del grupo B.

2. El polinucleotido aislado de la reivindicacion 1, en el que el polipeptido codificado consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 90 % a lo largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

3. El polinucleotido aislado de la reivindicacion 1, en el que el polipeptido codificado consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 95 % a lo largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

4. El polinucleotido aislado de la reivindicacion 1, en el que el polipeptido codificado consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 99 % a lo largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

5. El polinucleotido aislado de la reivindicacion 1, en el que el polipeptido codificado consiste en la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

6. El polinucleotido aislado de la reivindicacion 1 que consiste en una secuencia de nucleotidos elegida de: SEC IO N°: 3, 5, 7 y 11.

7. Un polinucleotido aislado que es complementario al polinucleotido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Un vector que comprende el polinucleotido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho polinucleotido esta operativamente ligado a una region de control de la expresion.

9. Una celula huesped transfectada con el vector de la reivindicacion 8.

10. Un procedimiento para producir un polipeptido que comprende cultivar la celula huesped segun la reivindicacion 9 en condiciones adecuadas para la expresion de dicho polipeptido.

11. Un polipeptido aislado que consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 85 % a la largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de: SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12, en el que el polipeptido conserva la capacidad de producir anticuerpos que tienen especificidad de union para Streptococcus del grupo B.

12. El polipeptido de la reivindicacion 11 que consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 90 % a lo largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

13. El polipeptido de la reivindicacion 11 que consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 95 % a lo largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

14. El polipeptido aislado de la reivindicacion 11 que consiste en una secuencia de aminoacidos identica al menos el 99 % a lo largo de la longitud completa de la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

15. El polipeptido aislado de la reivindicacion 11 que consiste en la secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°: 4, 6, 8 y 12.

16. Un polipeptido de fusion que comprende el polipeptido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 11-15.

17. Un polipeptido quimerico que comprende dos o mas polipeptidos, en el que cada uno de los dos o mas polipeptidos consiste en una secuencia de aminoacidos elegida de SEC IO N°:4, 6, 8 y 12, siempre que los dos o mas polipeptidos esten ligados de manera que formen un polipeptido quimerico.

18. Una vacuna que comprende el polipeptido de una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 y un vehiculo, diluyente o adyuvante farmaceuticamente aceptables.

19. Una vacuna que comprende el polipeptido de fusion segun la reivindicacion 16 o el polipeptido quimerico de la reivindicacion 17 y un vehiculo, diluyente o adyuvante farmaceuticamente aceptables.

20. Un procedimiento para la deteccion de un anticuerpo especifico para antigeno de Streptococcus del grupo B en una muestra biologica previamente obtenida de un huesped, que comprende:

(a) incubar uno o mas de los polipeptidos segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16 con la muestra biologica para formar una mezcla; y

(b) detectar un polipeptido especificamente unido en la mezcla que indica la presencia de un anticuerpo especifico para el antigeno de Streptococcus del grupo B en la muestra.

21. La vacuna segun cualquiera de las reivindicaciones 18 a 19 para el tratamiento profilactico o terapeutico de infeccion por Streptococcus del grupo B en un huesped susceptible a infeccion por Streptococcus del grupo B.

22. La vacuna segun cualquiera de las reivindicaciones 18 a 19 para el tratamiento profilactico o terapeutico de septicemia, meningitis, neumonia, celulitis, osteomielitis, artritis septica, endocarditis o epiglotitis en un huesped.

23. El polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 para el tratamiento profilactico o terapeutico de infeccion por Streptococcus del grupo B en un huesped susceptible a infeccion por Streptococcus del grupo B.

24. El polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 para el tratamiento profilactico o terapeutico 10 de septicemia, meningitis, neumonia, celulitis, osteomielitis, artritis septica, endocarditis o epiglotitis en un huesped.

25. La vacuna de la reivindicacion 21 o la reivindicacion 22 o el polipeptido de la reivindicacion 23 o la reivindicacion 24 en la que el huesped es un animal.

26. La vacuna de la reivindicacion 21 o la reivindicacion 22 o el polipeptido de la reivindicacion 23 o la reivindicacion 24 en la que el huesped se elige de un rebano de ganado lechero.

27. La vacuna de la reivindicacion 21 o la reivindicacion 22 o el polipeptido de la reivindicacion 23 o la reivindicacion 24 en la que el huesped es un ser humano.

28. Uso del polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 en la preparacion de un medicamento para el tratamiento profilactico o terapeutico de septicemia, meningitis, neumonia, celulitis, osteomielitis, artritis septica, endocarditis o epiglotitis.

29. Uso del polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 en la preparacion de un medicamento para el tratamiento profilactico o terapeutico de infeccion por Streptococcus del grupo B en un huesped susceptible a infeccion por Streptococcus del grupo B.

30. Un kit que comprende el polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 para la deteccion o el diagnostico de infeccion por Streptococcus del grupo B.

Figura 1 (SEC IO N°: 1)

Figura 2 (SEC IO N°: 2)

Figura 3 (SEC IO N°: 3)

Figura 4 (SEC IO N°: 4) Figura 5 (SEC IO N°: 5)

Figura 6 (SEC IO N°: 6)

Figura 7 (SEC IO N°: 7)

Figura 8 (SEC IO N°: 8) Figura 9 (SEC IO N°: 9) Figura 18 (SEC IO N°: 18)

Figura 14 (SEC IO N°: 14)

Figura 16 (SEC IO N°: 16)

Figura 20 (SEC IO N°: 20)