Un anticuerpo aislado que específicamente se une al EphA2 y produce la fosforilación del EphA2,

donde:

a. el anticuerpo compite por unirse al EphA2 con el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la American Type Culture Collection (ATCC) con nº de registro PTA-4380;

b. el anticuerpo compite por unirse al EphA2 con el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4381;

c. el anticuerpo se produce por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4380;

d. el anticuerpo se produce por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4381;

e. el anticuerpo se compone de una cadena VH que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5 y de una cadena VL que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1;

f. el anticuerpo se compone de una VL CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, de una VL CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, de una VL CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, de una VH CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6, de una VH CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:7, y de una VH CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:8; o

g. el anticuerpo se compone de una VL CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, de una VL CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, de una VL CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, de una VH CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6, de una VH CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:7, y de una VH CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:8, donde una o más de las CDRs tiene una, dos o tres mutaciones.

1. CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención hace referencia a los métodos y composiciones diseñados para el tratamiento, gestión o prevención del cáncer. Los métodos de invención incluyen la administración de una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos específicos EphA2, preferiblemente anticuerpos monoclonales, que son agonistas de EphA2 y que preferentemente se unen a los epítopos de EphA2 que se exponen o crecen selectivamente en las células cancerosas en comparación con las células no cancerosas. La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que se componen de uno o más de los anticuerpos monoclonales de la invención, bien solos o en combinación con uno o más de los otros agentes útiles/beneficiosos para la terapia de cáncer. Se proporcionan asimismo los métodos de diagnóstico y los métodos de cribado para los anticuerpos anti-EphA2 terapéuticamente útiles/beneficiosos.

2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Cáncer

Un neoplasma, o un tumor, es una masa neoplásica producida por el crecimiento anormal e incontrolado de las células, la cual puede ser benigna o maligna. Los tumores benignos generalmente permanecen localizados. Los tumores malignos se denominan colectivamente cánceres. El término "maligno" generalmente significa que el tumor puede invadir y destruir las estructuras corporales vecinas y dispersarse a sitios distantes hasta causar la muerte (para revisión, véase Robbins y Angell, 1976, Basic Pathology, 2d Ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, pp. 68-122) . El cáncer puede aparecer en muchas partes de cuerpo y comportarse de manera distinta dependiendo de su origen. Las células cancerosas destruyen la parte del cuerpo en el que se originan y después se extienden a otra (s) parte (s) del cuerpo donde comienzan a crecer de nuevo y causan más destrucción.

Más de un 1, 2 millones de americanos desarrollan un cáncer cada año. El cáncer es la seguna causa de muerte en los Estados Unidos y, si la tendencia actual continúa, se espera que el cáncer se convierta en la primera causa de muerte en 2010. El cáncer de pulmón y el de próstata son los que causan un mayor número de muertes entre los hombres en los Estados Unidos. El cáncer de pulmón y el de mama son los que causan un mayor número de muertes entre las mujeres en los Estados Unidos. A uno de cada dos hombres en los Estados Unidos se le diagnosticará cáncer en algún momento de su vida. A una de cada tres mujeres en los Estados Unidos se le diagnosticará cáncer en algún momento de su vida.

Todavía no se ha encontrado ninguna cura para el cáncer. Las opciones de tratamiento que existen actualmente, tales como la cirugía, la quimioterapia y la radioterapia, son en la mayoría de los casos ineficaces o presentan graves efectos secundarios.

Metástasis

Las formas de cáncer que ponen en mayor riesgo la vida a menudo aparecen cuando una población de células tumorales adquiere la capacidad de colonizar partes del cuerpo distantes y extrañas. Dichas células metastásicas sobreviven anulando las restricciones que normalmente limitan la colonización de las células en tejidos diferentes. Por ejemplo, las células epiteliales mamarias características generalmente no crecerán ni sobrevivirán si se transplantan al pulmón, pero las metástasis pulmonares siguen siendo una de las principales causas de mortalidad y morbilidad en el cáncer de mama. Datos recientes demuestran que se puede producir la diseminación de células metastásicas en el organismo de forma prolongada/durante mucho tiempo antes de la presentación clínica del tumor primario. Estas células micrometastásicas pueden permanecer inactivas durante muchos meses o incluso años tras la detección y extirpación del tumor primario. Por lo tanto, es muy importante lograr un mejor entendimiento de los mecanismos que permiten el crecimiento y supervivencia de las células metastásicas en un microentorno extraño para el perfeccionamiento de los terapéuticos diseñados para combatir el cáncer metastásico y el perfeccionamiento de los diagnósticos para una pronta detección y localización de la metástasis.

Señalización de células cancerosas

45 [0006] El cáncer es una enfermedad de transducción de señales anormales. La señalización de células anormales anula las limitaciones dependientes de sujeción en el crecimiento y supervivencia de las células (Rhim, et al., Critical Reviews in Oncogenesis 8:305, 1997; Patarca, Critical Reviews in Oncogenesis 7:343, 1996; Malik, et al., Biochimica et Biophysica Acta 1287:73, 1996; Cance, et al., Breast Cancer Res Treat 35:105, 1995) . La actividad de la tirosina quinasa es inducida por la sujeción ECM; además, la expresión o función de la tirosina quinasa es normalmente mayor en las células malignas (Rhim, et al., Critical Reviews in Oncogenesis 8:305, 1997; Cance, et al., Breast Cancer Res Treat 35:105, 1995; Hunter, Cell 88:333, 1997) . Basándose en los datos que muestran que la actividad de la tirosina quinasa es necesaria para el crecimiento de las células malignas, se ha empleado la tirosina quinasa con nuevos terapéuticos (Levitzki, et al., Science 267:1782, 1995; Kondapaka, et al., Molecular & Cellular Endocrinology 117:53, 1996; Fr y , et al., Current Opinion in BioTechnology 6: 662, 1995) . Desafortunadamente, obstáculos asociados con blancos específicos 55 para las células tumorales a menudo limitan la aplicación de estos fármacos. En particular, la actividad de la tirosina quinasa es a menudo esencial para el funcionamiento y la supervivencia de los tejidos benignos (Levitzki, et al., Science

267:1782, 1995) . A fin de de minimizar la toxicidad colateral, es fundamental identificar y focalizar la tirosina quinasa que esté selectivamente sobreexpuesta en las células tumorales.

EphA2

El EphA2 es un receptor 130 kDa de la tirosina quinasa que se manifiesta en epitelios adultos, donde se encuentra a niveles bajos y se enriquece en los lugares de adhesión de célula-célula (Zantek, et al, Cell Growth & Differentiation 10:629, 1999; Lindberg, et al., Molecular & Cellular Biology 10: 6316, 1990) . Esta localización subcelular es importante porque el EphA2 se une a los ligandos (conocidos como Efrinas de la A1 a A5) que están sujetos a la membrana celular (Eph Nomenclature Committee, 1997, Cell 90:403; Gale, et al., 1997, Cell & Tissue Research 290: 227) . La principal consecuencia de la unión de los ligandos es la autofosforilación del EphA2 (Lindberg, et al., 1990, supra) . Sin embargo, a diferencia de otros receptores de tirosinas quinasas, el EphA2 retiene la actividad enzimática a falta de la unión de los ligandos o del contenido de fosfotirosina (Zantek, et al., 1999, supra) . El EphA2 se ve aumentado en un gran número de células agresivas de carcinoma.

Terapias oncológicas [0008] Una barrera al desarrollo de los agentes antimetastásicos han sido los sistemas de ensayo que se usan para diseñar y evaluar estos fármacos. La mayoría de las terapias oncológicas convencionales alcanzan rápidamente las células en crecimiento. Sin embargo, las células cancerosas no crecen necesariamente de manera más rápida sino que sobreviven y crecen en condiciones que son no permisivas para las células normales (Lawrence and Steeg, 1996, World J. Urol. 14:124-130) . Estas diferencias fundamentales entre los comportamientos de las células normales y de las células malignas ofrecen/brindan oportunidades para el blanco terapéutico. El paradigma de que los tumores micrometastásicos ya se han diseminado por todo el cuerpo resalta la necesidad de evaluar/valorar los fármacos quimioterapéuticos potenciales en el contexto de un microentorno extraño y tridimensional. Muchos ensayos de fármacos estándares contra el cáncer miden el crecimiento o la supervivencia de las células tumorales bajo condiciones de cultivo de células características (es decir, un crecimiento monocapa) . Sin embargo, el comportamiento de las células en ensayos bidimensionales a menudo no predicen de manera fidedigna el comportamiento de las células tumorales in vivo.

Comúnmente, la terapia oncológica puede implicar cirugía, quimioterapia, terapia hormonal y/o radioterapia a fin de extirpar las células neoplásicas en un paciente (véase, por ejemplo, Stockdale, 1998, "Principles of Cancer Patient Management, " in Scientific American: Medicine, vol. 3, Rubenstein and Federman, eds., Chapter 12, Section IV) . Últimamente, la terapia oncológica puede implicar también terapia biológica o inmunoterapia. Todas estas propuestas pueden plantear inconvenientes significativos para el paciente.... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado que específicamente se une al EphA2 y produce la fosforilación del EphA2, donde:

a. el anticuerpo compite por unirse al EphA2 con el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la American Type Culture Collection (ATCC) con nº de registro PTA-4380;

b. el anticuerpo compite por unirse al EphA2 con el anticuerpo producido por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4381;

c. el anticuerpo se produce por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4380;

d. el anticuerpo se produce por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4381;

e. el anticuerpo se compone de una cadena VH que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5 y de una cadena VL que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1;

f. el anticuerpo se compone de una VL CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, de una VL CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, de una VL CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, de una VH CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6, de una VH CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:7, y de una VH CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:8; o

g. el anticuerpo se compone de una VL CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, de una VL CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, de una VL CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, de una VH CDR1 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6, de una VH CDR2 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:7, y de una VH CDR3 que tiene una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:8, donde una o más de las CDRs tiene una, dos o tres mutaciones.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se produce por el hibridoma depositado en la ATCC con el nº de registro PTA-4380.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se produce por el hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4381.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se compone de una cadena VH que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5.

5. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se compone de una cadena VL que contiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1.

6. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se compone de una cadena VH que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5 y de una cadena VL que consta de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1.

7. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se compone de una VL CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, de una VL CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3, de una VL CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, de una VH CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6, de una VH CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:7, y de una VH CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:8.

8. El anticuerpo de la reivindicación 4, 5 o 6, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, una cadena única Fv (scFv) , un anticuerpo de cadena único, un fragmento Fab (Fab) , o un F (ab') 2.

9. El anticuerpo de la reivindicación 7, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, una cadena única Fv (scFv) , un anticuerpo de cadena única, un fragmento Fab (Fab) , o un F (ab') 2.

10. Un conjugado de anticuerpo que consta del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones precedentes conjugado o fusionado con un polipéptido heterólogo.

11. Un conjugado de anticuerpo que consta del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 conjugado o fusionado con un agente de diagnóstico o detectable.

12. Un conjugado de anticuerpo que consta del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 conjugado o fusionado con un agente terapéutico.

13. El conjugado de anticuerpo de la reivindicación 12, donde el agente terapéutico es una citotoxina.

14. El conjugado de anticuerpo de la reivindicación 13, donde la citotoxina es paclitaxel, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracenodiona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1 dihidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaina, propanolol, puromicina, epirrubicina, o ciclofosfamida.

15. El conjugado de anticuerpo de la reivindicación 12, donde el agente terapéutico es abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, toxina del cólera, toxina de la difteria, factor alfa de necrosis tumoral, factor beta de necrosis tumoral, interferón alfa, interferón beta, o plaqueta derivada del factor de crecimiento.

16. El conjugado de anticuerpo de la reivindicación 12, donde el agente terapéutico es un material radioactivo o quelador macrocíclico.

17. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia nucleótida que codifica el anticuerpo de la reivindicación 2, 3 o 6.

18. Un vector que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 17.

19. El vector de la reivindicación 18 que comprende además una secuencia nucleótida que regula la expresión de la secuencia nucleótida.

20. Una célula huésped transgénica que contiene o expresa el ácido nucleico de la reivindicación 17.

21. Una célula huésped transgénica que contiene el vector de la reivindicación 18 o 19.

22. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 y un portador aceptable desde un punto de vista farmacéutico.

23. El empleo de la composición farmacéutica de la reivindicación 22 en la fabricación de un fármaco para el tratamiento oncológicor, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

24. La composición farmacéutica de la reivindicación 22, para su uso en el tratamiento oncológico, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

25. Una composición farmacéutica que comprende el conjugado de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 16 y un portador aceptable desde un punto de vista farmacéutico.

26. El empleo de la composición farmacéutica de la reivindicación 24 en la fabricación de un fármaco para el tratamiento oncológico, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 24, para su uso en el tratamiento oncológico, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

28. El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

29. El empleo del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 en la preparación de un fármaco para el tratamiento del cáncer en un paciente, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

30. El conjugado de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 16 para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

31. El empleo del conjugado de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 16 en la preparación de un fármaco para el tratamiento del cáncer en un paciente, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

32. El empleo de la reivindicación 29 o 31, donde el fármaco comprende además una terapia adicional.

33. Un método para diagnosticar el cáncer en un paciente, que comprende:

a. células de contacto de dicho paciente con el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 según las condiciones adecuadas para el anticuerpo de unión EphA2; y

b. la medición del anticuerpo EphA2 unido a dichas células, donde un anticuerpo de unión mayor que un control indica que el paciente padece cáncer.

34. El empleo del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 en la preparación de un fármaco para el diagnóstico, pronóstico y seguimiento de la eficacia de la terapia de cáncer en un paciente, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

35. El empleo del conjugado de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 16 en la preparación de un fármaco para el diagnóstico, pronóstico o seguimiento de la eficacia de la terapia de cáncer en un paciente, donde el cáncer está asociado con la sobreexpresión del EphA2.

36. El empleo de la reivindicación 23, 29 o 34 o de la composición de la reivindicación 24, donde el cáncer es de origen epitelial.

37. El empleo de la reivindicación 26, 31 o 35 o de la composición de la reivindicación 27, donde el cáncer es de origen epitelial.

38. El empleo de la reivindicación 23, 29 o 34 o de la composición de la reivindicación 24, donde el cáncer es un carcinoma de célula renal, un melanoma, un cáncer metastásico, o un cáncer de piel, de pulmón, de colon, de mama, de próstata, de vejiga, de riñón o de páncreas.

39. El empleo de la reivindicación 26, 31 o 35 o de la composición de la reivindicación 27, donde el cáncer es un carcinoma de célula renal, un melanoma, un cáncer metastásico, o un cáncer de piel, de pulmón, de colon, de mama, de próstata, de vejiga, de riñón o de páncreas.

40. El empleo de las reivindicaciones 23, 26, 29, 31, 34 o 35, donde el paciente es humano.

41. La composición de las reivindicaciones 24 y 27, donde el paciente es humano.

42. El empleo de la reivindicación 40, donde el humano se muestra resistente a la terapia anterior.

43. La composición de la reivindicación 41, donde el humano se muestra resistente a una terapia anterior.

44. El método de la reivindicación 33, donde el cáncer es de origen epitelial.

45. El método de la reivindicación 33, donde el cáncer es un carcinoma de célula renal, un melanoma, un cáncer metastásico, o un cáncer de piel, de pulmón, de colon, de mama, de próstata, de vejiga, de riñón o de páncreas.

46. El método de la reivindicación 33, donde las células provienen de la sangre total, del esputo, de la orina, del suero o de aspirados con aguja fina de tejido de células tumorales.

47. El método de la reivindicación 33, donde el paciente es humano.

48. Un hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4380.

49. Un hibridoma depositado en la ATCC con nº de registro PTA-4381.

50. Un método para producir un anticuerpo, que comprende el cultivo de la célula huésped de cualquiera de las reivindicaciones 20 o 21 según las condiciones en las que el ácido nucleico viene expresado.

51. Un kit que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9, en un envase, y las instrucciones de uso.

52. Un kit que comprende el conjugado de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 16, en un envase, y las instrucciones de uso.

53. El anticuerpo de la reivindicación 7, donde el anticuerpo es un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico.

Dibujos

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

La lista de referencias citadas por el solicitante se incluye únicamente para la comodidad del lector, no formando parte del documento de la patente europea. A pesar del sumo cuidado durante la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones, declinando la OEP toda responsabilidad a este respecto.

Documentos de patentes citados en la descripción:

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**************************************************************************************Doña Yasmina Almela Burgos, Intérprete Jurado de Inglés, certifica que la que antecede es traducción fiel y completa al español de un documento redactado en inglés.

Elche, a 23 de enero de 2012

La Traductora Jurado