Anticuerpos humanos anti-HTNFSF13B antagonistas.

Un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b que comprende:

a. Nº ID SEC:

4 localizada en CDR1 de la región variable de cadena ligera (LCVR);

b. Nº ID SEC: 6 localizada en CDR2 de la LCVR;

c. Nº 5 ID SEC: 8 localizada en CDR3 de la LCVR;

d. Nº ID SEC: 12 localizada en CDR1 de la región variable de cadena pesada (HCVR);

e. Nº ID SEC: 14 localizada en CDR2 de la HCVR; y

f. Nº ID SEC: 16 localizada en CDR3 de la HCVR

Anticuerpos humanos anti-HTNFSF13B antagonistas.

Los ligandos de la familia de los TNF son conocidos por estar entre las citoquinas más pleiotrópicas, incluyendo un gran número de respuestas celulares, incluyendo proliferación, citotoxicidad, actividad anti-viral, actividades 5 inmunoregulatorias, y la regulación transcripcional de diversos genes. La familia de TNF de citoquinas y receptores ha sufrido una gran expansión en los últimos años con el advenimiento de secuenciación de EST masiva. El TNFSF13b es el nombre oficial adoptado por el Congreso de TNF para BLyS, TALL-1, BAFF, THANK, neutroquinaa, y zTNF (para revisión véase Locksley y col. Cell 2001 104:487) . TNFSF13b humano (hTNFSF13b) es una proteína unida a membrana de tipo II de 285 aminoácidos que posee un sitio de escisión de terminal N que permite

la existencia de ambas proteínas de unión soluble y de membrana. Funcionalmente, TNFSF13b parece regular las respuestas inmunes a células B y a algunas células T.

Estudios de síndrome de choque séptico y otros trastornos que surgen de la sobreproducción de citoquinas inflamatorias han mostrado que un huésped afectado contará frecuentemente con altos niveles de citoquina liberando receptores de citoquina solubles o sintetizando anticuerpos anti-citoquina de alta afinidad. Se consideran 15 procedimientos de tratamiento que mimetizan tales respuestas naturales como enfoques terapéuticos viables para el alivio de la enfermedad mediada por citoquina. Por tanto hay una necesidad bien reconocida de anticuerpos humanos que se unen a citoquinas, tales como TNFSF13b, que están implicados en la regulación de procesos inmunes celulares con gran afinidad y que tienen la capacidad de antagonizar la actividad de la citoquina diana in vitro e in vivo. Si bien la solicitud de patente internacional WO 00/50597 describe de forma no detallada anticuerpos

dirigidos a TNFSF13b, tal solicitud no describe de forma específica las características estructurales o funcionales de tales anticuerpos.

El documento WO 98/18921 se refiere a una neutroquina, una proteína que es un miembro de la familia de proteínas TNF. Schneider y col. (J. Exp. Med., vol. 189, nº 11, 7 de Junio de 1999, páginas 1747-1756) describe el mismo miembro de la familia de proteína de TNF que se denomina BAFF.

La presente invención proporciona anticuerpos humanos anti–hTNFSF13b, o porciones de unión al antígeno de los mismos. Los anticuerpos de la invención se caracterizan por gran afinidad de unión a polipéptidos de TNFSF13b, cinéticas de disociación lenta y la capacidad de antagonizar al menos una actividad in vivo y/o in vitro asociada con polipéptidos de TNFSF13b.

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención se proporciona un anticuerpo humano anti-hTNFSF13-b 30 que comprende:

a. Nº ID SEC: 4 localizada en CDR 1 de la región variable de cadena ligera (LCVR) ;

b. Nº ID SEC: 6 localizada en CDR 2 de la LCVR;

c. Nº ID SEC: 8 localizada en CDR 3 de la LCVR;

d. Nº ID SEC: 12 localizada en CDR 1 de la región variable de cadena pesada (HCVR) ;

e. Nº ID SEC: 14 localizada en CDR 2 de la HCVR; y

f. Nº ID SEC: 16 localizada en CDR 3 de la HCVR

Preferiblemente el anticuerpo humano anti-hTNFSF13b de acuerdo con la presente invención comprende un polipéptido de región variable de cadena ligera (LCVR) como se muestra en Nº ID SEC: 2 y un polipéptido de región variable de cadena pesada (HCVR) como se muestra en Nº ID SEC: 10.

El anticuerpo de la presente invención se disocia preferiblemente de un polipéptido de TNFSF13b con una KD de 1 x 10-8 M o inferior.

Preferiblemente el anticuerpo de la presente invención tiene una constante de velocidad Koff de 5 x 10-4 s-1 o inferior, según se determina por resonancia de plasmones de superficie.

El anticuerpo de la presente invención inhibe preferiblemente la proliferación inducida por TNFSF13b en un ensayo

45 de neutralización in vitro con una CI50 de 1 x 10-8 M o inferior, preferiblemente con un CI50 de 1 x 10-9 M o inferior, más preferiblemente una CI50 de 1 x 10-10 M o inferior e incluso más preferiblemente una CI50 de 1 x 10-11 M o inferior.

De acuerdo con otra realización preferida de la presente invención el anticuerpo comprende una región constante de cadena pesada seleccionada de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM e IgD. Preferiblemente la región constante de cadena pesada es IgG1 o IgG4 y es más preferiblemente IgG4. Preferiblemente el IgG4 presenta una prolina sustituida por serina en la posición 231. 5 Se prefiere que el anticuerpo de la presente invención comprenda una región constante de cadena ligera kappa o

lambda. De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención se proporciona un anticuerpo humano antihTNFSF13b que se puede obtener del hibridoma registrado como ATCC PTA-3674.

Un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b preferido de acuerdo con la presente invención, o fragmento del mismo, 10 comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada:

y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera

Incluso más preferido es un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b, o fragmento del mismo, que comprende la 15 secuencia de aminoácidos de cadena pesada:

y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera:

En una realización preferida la presente invención proporciona un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b aislado que

se une a un polipéptido de hTNFSF13b y se disocia del polipéptido de hTNFSF13b con una constante Koff de 1 x 10-4 s-1 o inferior, determinado por resonancia de plasmones de superficie, que inhibe la proliferación inducida por TNFSF13b en un ensayo de neutralización in vitro con una CI50 de 1 x 10-8 o inferior.

En una realización preferida la invención proporciona un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b aislado que presenta las siguientes características:

a) inhibe la proliferación inducida por TNFSF13b en un ensayo de neutralización in vitro con una CI50 de 1 x 10-8 Mo inferior;

b) presenta una CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de Nº ID SEC: 16; y

c) presenta una CDR3 de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de Nº ID SEC: 8.

La invención también proporciona procedimientos de tratamiento o prevención de enfermedades o afecciones

agudas o crónicas asociadas con actividad de células B y algunas células T incluyendo, pero sin limitarse a estas, enfermedades autoinmunes, tales como lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide y/o neoplasia que comprende la administración de un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b de la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona secuencias que codifican los nuevos anticuerpos humanos anti-hTNFSF13b, vectores que comprenden las secuencias de polinucleótidos que codifican anticuerpos humanos

anti-hTNFSF13b, células huésped transformadas con vectores que incorporan polinucleótidos que codifican los anticuerpos humanos anti-hTNFSF13b, formulaciones que comprenden anticuerpos humanos anti-hTNFSF13b y procedimientos de preparación y uso de los mismos.

En otra realización, la presente invención proporciona el epítopo del antígeno al que se une los nuevos anticuerpos humanos anti-hTNFSF13b. Por tanto la invención también proporciona un uso de un anticuerpo que une el epítopo de la presente invención neutralizando la actividad de TNFSF13b para el tratamiento o prevención de enfermedades

o afecciones agudas o crónicas asociadas con actividad de células B y algunas células T incluyendo, pero sin limitarse a estas, trastornos autoinmunes, tales como lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide y/o neoplasia.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo de la presente invención para uso como un medicamento.

La invención también comprende un artículo de fabricación que comprende un material de envase y un anticuerpo contenido dentro de dicho material de embalaje, en el que el anticuerpo neutraliza la actividad de TNFSF13b para el tratamiento o prevención de un sujeto humano que sufre de un... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b que comprende:

a. Nº ID SEC: 4 localizada en CDR1 de la región variable de cadena ligera (LCVR) ;

b. Nº ID SEC: 6 localizada en CDR2 de la LCVR; 5 c. Nº ID SEC: 8 localizada en CDR3 de la LCVR;

d. Nº ID SEC: 12 localizada en CDR1 de la región variable de cadena pesada (HCVR) ;

e. Nº ID SEC: 14 localizada en CDR2 de la HCVR; y

f. Nº ID SEC: 16 localizada en CDR3 de la HCVR

2. El anticuerpo humano anti-hTNFSF13b de acuerdo con la invención 1 que comprende un polipéptido de región

variable de cadena ligera (LCVR) como se muestra en Nº ID SEC: 2 y un polipéptido de la región variable de cadena pesada (HCVR) como se muestra en Nº ID SEC: 10.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1 o reivindicación 2 en la que el anticuerpo se disocia de un polipéptido TNFSFI3b con KD de 1 x 10-8 M o inferior.

4. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la que el anticuerpo presenta una constante de 15 velocidad Koff de 5 X 10-4 s-1 o inferior según se determina por resonancia de plasmones de superficie.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la que el anticuerpo inhibe la proliferación inducida por TNFSF13b en un ensayo de neutralización in vitro con una CI50 de 1 x 10-8 M o inferior.

6. El anticuerpo de la reivindicación 5 en el que el anticuerpo presenta una CI50 de 1 x 10-9 M o inferior.

7. El anticuerpo de la reivindicación 6 en el que el anticuerpo presenta una CI50 de 1 x 10-10 M o inferior.

8. El anticuerpo de la reivindicación 7 en el que el anticuerpo presenta una CI50 de 1 x 10-11 M o inferior.

9. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 que comprende una región constante de cadena pesada seleccionada de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM y IgD.

10. El anticuerpo de la reivindicación 9 en la que la región constante de cadena pesada es IgG1 o IgG4.

11. El anticuerpo de la reivindicación 10 en la que la región constante de cadena pesada es IgG4. 25 12. El anticuerpo de la reivindicación 11 en la que el IgG4 presenta una prolina sustituido por serina en la posición

231.

13. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 que comprende una región constante de cadena ligera kappa o lambda.

14. Un anticuerpo humano anti-hTNFSF13b que se puede obtener de hibridoma depositado como ATCC PTA-3674.

15. El anticuerpo humano anti-hTNFSF13b de acuerdo con la invención 1, o fragmento del mismo, que comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada:

y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera:

16. El anticuerpo humano anti-hTNFSF13b de acuerdo con la invención 1, o fragmento del mismo, que comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada:

y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera:

17. Un ácido nucleico aislado que codifica la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los anticuerpos de las reivindicaciones 1 a 16.

18. Un vector de expresión recombinante que codifica un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 16.

19. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

20. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 que comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.

21. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su uso como un medicamento. 15 22. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su uso en el tratamiento de cáncer.

23. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su uso en el tratamiento de trastornos autoinmunes.

24. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su uso en el tratamiento de artritis reumatoide.

25. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su uso en el tratamiento de lupus eritematoso sistémico.

Figura 1

% de inhibición de proliferación de huTNFSF13b y IL-1 con 4A5-3.1.1-B4 CI50 = 76 ng/ml Figura 2

Neutralización de huTNFSF13b inducido con 4A5-3.1.1-B4 en células B primarias