Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1, en el que el anticuerpo comprendeuna cadena pesada (HC) que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) quecomprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13.

ANTICUERPOS E INMUNOCONJUGADOS Y USOS PARA LOS MISMOS

5 CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a anticuerpos anti-STEAP-1 e inmunoconjugados de los mismos. La invención se refiere además a procedimientos de uso de anticuerpos anti-STEAP-1 e inmunoconjugados de los mismos.

ANTECEDENTES

En seres humanos, el cáncer de próstata es uno de los tumores malignos más comúnmente diagnosticados en hombres y es la segunda causa principal de muerte relacionada con cáncer en el hombre. La 15 Sociedad americana del cáncer estima que para el año 2000 se diagnosticarán 180.400 casos nuevos de cáncer de próstata con 31.900 muertes de la enfermedad. En estados avanzados, el cáncer de próstata metastatiza al hueso. Aunque se han conseguido avances en el diagnóstico temprano y el tratamiento de tumores localmente confinados, el cáncer de próstata es incurable una vez ha metastatizado. Los pacientes con cáncer de próstata metastásico en terapia hormonal desarrollarán eventualmente un estado resistente a andrógenos (independiente de andrógenos)

que conducirá a una progresión de la enfermedad y a la muerte. Actualmente, el antígeno prostático específico (PSA) es el marcador tumoral más ampliamente usado para el cribado, diagnóstico y monitorización de cáncer de próstata. Sin embargo, el uso generalizado de PSA como herramienta de cribado es controvertido ya que el PSA fracasa en discriminar con exactitud entre enfermedad de próstata benigna y maligna.

[0003] Dependiendo del estado del cáncer, el tratamiento del cáncer de próstata y de vejiga implica una o una combinación de las siguientes terapias: cirugía para extirpar el tejido cancerígeno, radioterapia, quimioterapia, privación de andrógenos (por ejemplo, terapia hormonal) en el caso de cáncer de próstata. Mientras que la terapia quirúrgica o radioterapia mejora significativamente la supervivencia en pacientes con fases tempranas de la enfermedad, las opciones terapéuticas están muy limitadas para casos avanzados, particularmente para

reapariciones de tumor tras la ablación hormonal. La mayoría de los pacientes que se someten a terapia hormonal progresan para desarrollar enfermedad independiente de andrógenos. Actualmente, no hay tratamiento eficaz para el 20-40 % de los pacientes con cáncer de próstata que desarrollan enfermedad recurrente después de cirugía o radioterapia, o para aquellos en los que el cáncer ha metastatizado en el momento del diagnóstico. La quimioterapia tiene sus efectos secundarios tóxicos, especialmente en pacientes ancianos. El desarrollo de nuevas formas de

terapia, especialmente para enfermedad resistente a la privación de andrógenos, es una necesidad urgente en el control del carcinoma prostático.

Se ha descrito la identificación de un antígeno de superficie celular novedoso, STEAP-1 (véase la patente de EE.UU. Nº 6.329.503) . STEAP-1 es un miembro de los antígenos transmembrana de serpentina de 40 superficie celular. Se expresa predominantemente en el cáncer de próstata y, por tanto, los miembros de esta familia se han llamado “STEAP” (seis antígenos epiteliales de transmembrana de la próstata, de Six Transmembrane Epithelial Antigens of the Prostate) . Las proteínas STEAP humanas presentan un alto grado de conservación estructural dentro de la familia, pero no muestran homología estructural significativa con ninguna proteína humana conocida. Parece que STEAP-1 es una proteína membrana tipo IIIa expresada predominantemente en células de la 45 próstata en tejidos humanos normales. Estructuralmente, STEAP-1 es una proteína de 339 aminoácidos caracterizada por una topología molecular de seis dominios transmembrana y extremos N y C intracelulares, sugiriendo que se pliega en una forma de “serpentina” en tres bucles extracelulares y dos intracelulares. La expresión de proteínas STEAP-1 se mantiene a altos niveles a través de diversos estados de cáncer de próstata. STEAP-1 se expresa altamente en exceso en otros cánceres humanos tales como de pulmón y colon. Se han

50 producido anticuerpos murinos para fragmentos de STEAP-1 humana y se mostró que los anticuerpos se unían a STEAP-1 sobre la superficie celular (véase la publicación de solicitud de patente de EE.UU. Nº 20040253232A1) . El documento WO 2005/113601 A desvela anticuerpos anti-STEAP-1 monoclonales. El documento WO 2006/034488A desvela anticuerpos manipulados con cisteína.

55 [0005] La terapia basada en anticuerpos ha demostrado ser muy eficaz en el tratamiento de diversos cánceres. Por ejemplo, HERCEPTIN® y RITUXAN® (ambos de Genentech, S. San Francisco) se han usado satisfactoriamente para tratar cáncer de mama y linfoma no Hodgkin, respectivamente. HERCEPTIN® es un anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN recombinante que se une selectivamente al dominio extracelular del proto-oncogén del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) . La expresión en exceso de proteínas HER2 se observa en el 25-30 % de los cánceres de mama primarios. RITUXAN® es un anticuerpo monoclonal murino/humano quimérico genéticamente manipulado dirigido contra el antígeno CD20 encontrado sobre la superficie de linfocitos B normales y malignos. Ambos de estos anticuerpos se producen en células CHO.

El uso de conjugados de anticuerpo-fármaco para la administración local de agente citotóxicos o citostáticos, es decir, fármacos para destruir o inhibir células tumorales en el tratamiento de cáncer (Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19: 605-614; Niculescu-Duvaz y Springer (1997) Adv. Drg Del. Rev. 26: 151172; patente de EE.UU. 4975278) permite la administración elegida como diana del resto de fármaco a tumores, y la

acumulación intracelular en los mismos, en los que la administración sistémica de estos agentes de fármaco sin conjugar puede producir niveles inaceptables de toxicidad para células normales, además de las células tumorales que se busca eliminar (Baldwin y col., (1986) Lancet pp. (15 de marzo de 1986) : 603-05; Thorpe, (1985) “Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review” en Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, A. Pinchera y col. (ed.s) , pág. 475-506) . Así se busca la máxima eficacia con la mínima toxicidad. Se

ha informado de tanto anticuerpos policlonales como de anticuerpos monoclonales útiles en estas estrategias (Rowland y col., (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21: 183-87) . Los fármacos usados en estos procedimientos incluyen daunomicina, doxorubicina, metrotrexato y vindesina (Rowland y col., Cancer Immunol. Immunother. 21: 183-87 (1986) ) . Las toxinas usadas en conjugados de anticuerpo-toxina incluyen toxinas bacterianas tales como toxina diftérica, toxinas de plantas tales como ricina, toxinas de moléculas pequeñas tales como geldanamicina (Kerr

y col. (1997) Bioconjugate Chem. 8 (6) : 781-784; Mandler y col. (2000) Journal of the Nat. Cancer Inst. 92 (19) : 15731581; Mandler y col. (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10: 1025-1028; Mandler y col. (2002) Bioconjugate Chem. 13: 786-791) , maitansinoides (documento EP 1391213; Liu y col., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 8618-8623) y caliqueamicina (Lode y col. (1998) Cancer Res. 58: 2928; Hinman y col. (1993) Cancer Res. 53: 33363342) . Las toxinas pueden efectuar sus efectos citotóxicos y citostáticos por mecanismos que incluyen unión a

tubulina, unión a ADN o inhibición de topoisomerasa (Meyer, D.L. y Senter, P.D. “Recent Advances in Antibody Drug Conjugates for Cancer Therapy” en Annual Reports in Medicinal Chemistr y , vol. 38 (2003) Capítulo 23, 229-237) . Algunos fármacos citotóxicos tienden a ser inactivos o menos activos cuando se conjugan con anticuerpos o ligandos de receptores de proteínas grandes.

[0007] ZEVALIN® (ibritumomab tiuxetan, Biogen/Idec) es un conjugado de anticuerpo-radioisótopo compuesto por un anticuerpo monoclonal IgG1 kappa murino dirigido contra el antígeno CD20 encontrado sobre la superficie de linfocitos B normales y malignos y radioisótopo 111In o 90Y unido por un quelante de ligador de tiourea (Wiseman y col. (2000) Eur. Jour. Nucl. Med. 27 (7) : 766-77; Wiseman y col. (2002) Blood 99 (12) : 4336-42; Witzig y col. (2002) J. Clin. Oncol. 20 (10) : 2453-63; Witzig y col. (2002) J. Clin. Oncol. 20 (15) : 3262-69) . Aunque ZEVALIN tiene actividad

contra linfoma no Hodgkin (LNH) de linfocitos B, la administración produce citopenias graves... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a STEAP-1, en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada (HC) que comprende:

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15;

(3) una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; y

(4) una HC-FR1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; y una cadena ligera (LC) que comprende:

(1) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11;

(2) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; y

(3) una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende además al menos una, dos, o tres regiones estructurales (FR) de HC seleccionadas de:

(1) una HC-FR2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22

(2) una HC-FR3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; y

(3) una HC-FR4 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende una cadena ligera (LC) de SEQ ID NO: 6.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1 o la reivindicación 3, en el que la HC comprende SEQ ID NO: 10.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado de un fragmento Fab, Fab'-SH, Fv, scFv y (Fab') 2.

6. Un procedimiento de detección de la presencia de STEAP-1 en un muestra de tejido, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la muestra de tejido con un anticuerpo de la reivindicación 1 en condiciones permisivas para la unión del anticuerpo a STEAP-1 y detectar si se forma un complejo entre el anticuerpo y STEAP1, en el que opcionalmente la muestra de tejido es de un paciente del que se sospecha que tiene un trastorno proliferativo de células de la próstata, pulmón, colon, vejiga, ovario o células de sarcoma de Ewing.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la muestra de tejido es de un paciente del que se sospecha que tiene un trastorno proliferativo de células de la próstata.

8. Un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo de la reivindicación 1 covalentemente unido a un agente citotóxico, en el que el agente citotóxico se selecciona opcionalmente de una toxina, un agente quimioterapéutico, un resto de fármaco, un antibiótico, un isótopo radiactivo y una enzima nucleolítica.

9. El inmunoconjugado de la reivindicación 8, en el que el agente citotóxico es una toxina.

10. El inmunoconjugado de la reivindicación 8, en el que el inmunoconjugado tiene la fórmula Ab- (L-D) p y en la que:

(a) Ab es el anticuerpo de la reivindicación 1;

(b) L es un ligador;

(c) D es un resto de fármaco; y

(d) p oscila de aproximadamente 1 a 20.

11. El inmunoconjugado de la reivindicación 10, en el que L se selecciona de 6-maleimidocaproílo (MC) , maleimidopropanoílo (MP) , valina-citrulina (val-cit) , alanina-fenilalanina (ala-phe) , p-aminobenciloxicarbonilo (PAB) , 4- (2-piridiltio) pentanoato de N-succinimidilo (SPP) , 4- (N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato de N-succinimidilo (SMCC) , (4-yodo-acetil) aminobenzoato de N-succinimidilo (SIAB) y 6-maleimidocaproil-valina-citrulina-p

aminobeniloxicarbonilo (MC-vc-PAB) .

12. El inmunoconjugado de la reivindicación 11, en el que D se selecciona de una auristatina y dolostatina.

13. El inmunoconjugado de la reivindicación 12, en el que D es un resto de fármaco de fórmula DE o DF: 10

y en las que R2 y R6 son cada uno metilo, R3 y R4 son cada uno isopropilo, R5 es -H, R7 es sec-butilo, cada R8 se 15 selecciona independientemente de CH3, O-CH3, OH y H; R9 es H; R10 es arilo; Z es -O- o -NH-; R11 es H, alquilo C1-C8 o - (CH2) 2-O- (CH2) 2-O- (CH2) 2-O-CH3; y R18 es -C (R8) 2-C (R8) 2-arilo; y p oscila de aproximadamente 1 a 8.

14. El inmunoconjugado de la reivindicación 10 que tiene actividad destructora de células in vitro o in vivo.

15. El inmunoconjugado de la reivindicación 10, en el que el inmunoconjugado tiene la fórmula Ab- (L-MMAE) p en la que L es un ligador y p oscila de 2 a 5, en la que opcionalmente L comprende val-cit, o L comprende MC, o L comprende PAB, o L comprende MC-vc-PAB.

16. El inmunoconjugado de la reivindicación 15, en el que L comprende MC-vc-PAB. 25

17. Una composición farmacéutica que comprende el inmunoconjugado de la reivindicación 10 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

18. La composición farmacéutica de la reivindicación 17 para su uso en un procedimiento para tratar

cáncer de próstata, pulmón o colon, comprendiendo el procedimiento administrar a un individuo una cantidad eficaz de la composición farmacéutica.

19. La composición farmacéutica de la reivindicación 18 para su uso en un procedimiento para tratar

cáncer de próstata. 35

20. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que LC comprende:

(1) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 90; 40 (2) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 92;

(3) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 93;

(4) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 94; 45

(5) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 95;

(6) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 96;

(7) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 97; 5 (8) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 98;

(9) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 99;

(10) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 100; o

(11) una región de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 101.