Una composición que, después de su administración a un sujeto,

puede inducir una respuesta de anticuerpos en dicho sujeto, en la que la respuesta de anticuerpos es bactericida contra dos o más linajes hipervirulentos A4, ET-5 y linaje 3 de N. meningitidis del serogrupo B, que comprende: (i) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 2; (ii) una proteína híbrida representada por la fórmula NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, en la que n= 2; A es la secuencia de aminoácidos Met-Ala; X1 es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 6; L1 es la secuencia de aminoácidos SEC ID 9; X2 es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 5; L2 está ausente; y B está ausente; e (iii) una proteína híbrida representada por la fórmula NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, en la que n= 2; A es el aminoácido Met; X1 es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 4; L1 es la secuencia de aminoácidos SEC ID 9; X2 es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 3; L2 está ausente; y B está ausente

Vacunas polipeptídicas que ofrecen amplia protección contra linajes de meningococos hipervirulentos.

Campo técnico

La presente invención está en los campos de inmunología y vacunología. En particular, se refiere a antígenos de Neisseria meningitidis (meningococo) y su uso en inmunización.

Técnica anterior

N. meningitidis es un patógeno humano gramnegativo y no móvil que coloniza la faringe y produce meningitis (y, en ocasiones, septicemia en ausencia de meningitis). Produce enfermedad tanto endémica como epidémica. Tras la introducción de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae, N. meningitidis es la principal causa de meningitis bacteriana en EE.UU.

Basándose en el polisacárido capsular del organismo se han identificado varios serogrupos de N. meningitidis. El serogrupo A es el patógeno implicado con mayor frecuencia en la enfermedad epidémica en el África subsahariana. Los serogrupos B y C son responsables de la gran mayoría de los casos en EE.UU. y en la mayoría de los países desarrollados. Los serogrupos W135 e Y son responsables del resto de los casos en EE.UU. y en los países desarrollados. Después del serogrupo, la clasificación incluye el serotipo, el serosubtipo y, después, el inmunotipo, y la nomenclatura estándar enumera serogrupo, serotipo, serosubtipo e inmunotipo, cada uno separado por dos puntos, por ejemplo B:4:P1.15:L3,7,9. Dentro del serogrupo B, algunos linajes producen enfermedad a menudo (hiperinvasiva), algunos linajes producen formas más graves de la enfermedad que otros (hipervirulentos) y otros rara vez producen enfermedad. Se reconocen siete linajes hipervirulentos, a saber los subgrupos I, III y IV-1, el complejo ET-5, el complejo ET-37, el clúster A4 y el linaje 3. Éstos se han definido mediante electroforesis enzimática de multilocus (MLEE), pero también se ha usado el tipado de secuencias en multilocus (MLST) para clasificar los meningococos [ref. 1].

Durante muchos años se ha conocido una vacuna polisacárida contra los serogrupos A, C, W135 e Y [2, 3], pero no se ha podido preparar una vacuna contra el serogrupo B. Se han probado vacunas basadas en vesículas de membrana externa [p. ej., véase la ref. 4], pero la protección conferida por estas vacunas normalmente está restringida a la cepa usada para fabricar la vacuna. Por tanto, sigue existiendo la necesidad de una vacuna contra el serogrupo B ampliamente eficaz.

Se han notificado las secuencias genómicas de los serogrupos de meningococos A [5] y B [6, 7] y se ha estudiado la secuencia del serogrupo B para identificar los antígenos vacunales [p. ej., ref. 8 a 13]. Los antígenos candidatos se han manipulado para mejorar la expresión heteróloga [ref. 14 a 16].

La referencia 16 divulga una secuencia proteica híbrida 736-AG741 (SEC ID Nº 15 en la presente memoria descriptiva) para la expresión simultánea de dos o más proteínas de Neisseria. Esta secuencia se reivindica a partir de la reivindicación 2 parte (iii).

Es un objeto de la invención proporcionar más y mejores composiciones para conferir inmunidad contra la enfermedad y/o infección meningocócicas, y, en particular, para conferir amplia inmunidad contra el meningococo de serogrupo B.

Divulgación de la invención

Las vacunas contra patógenos tales como el virus de la hepatitis B, difteria y tétanos normalmente contienen un único antígeno proteico (p. ej., el antígeno de superficie del VHB o el toxoide del tétanos). En contraste con esto, las vacunas a celulares contra la tos ferina contienen al menos tres proteínas de B. pertussis y la vacuna neumocócica Prevenar^TM contiene siete antígenos sacáridos conjugados distintos. Otras vacunas tales como las vacunas celulares contra pertussis, la vacuna contra el sarampión, la vacuna de la polio con virus inactivados (IPV) y las vacunas OMV meningocócicas son, por su propia naturaleza, mezclas complejas de un gran número de antígenos.

Por tanto, si la protección puede ser provocada por un único antígeno, un número pequeño de antígenos definidos o una mezcla compleja de antígenos indefinidos depende del patógeno en cuestión. La invención se basa en el descubrimiento de que un número pequeño de antígenos definidos es capaz de conferir amplia protección contra la infección por meningococos y la invención proporciona una composición que, después de su administración a un sujeto, es capaz de inducir una respuestas de anticuerpos en dicho sujeto, en el que la respuesta de anticuerpos es bactericida contra dos o más (p. ej., 2 ó 3) linajes hipervirulentos A4, ET-5 y linaje 3 del serogrupo B de N. meningitidis.

En lugar de consistir en un único antígeno, se prefiere que la composición comprenda una mezcla de 10 o menos (p. ej., 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2) antígenos purificados y, particularmente, se prefiere que la composición no incluya mezclas complejas o indefinidas de antígenos, por ejemplo se prefiere que no incluya vesículas de la membrana externa en la composición.

Para el meningococo del serogrupo B, se ha encontrado que una mezcla de cinco antígenos proteicos definidos provoca una buena respuesta inmunitaria protectora. Por tanto, la invención proporciona una composición que comprende los siguientes cinco antígenos proteicos meningocócicos; (1) una proteína "NadA"; (2) una proteína "741"); (3) una proteína "936"; (4) una proteína "953" y (5) una proteína "287" tal como se define en las reivindicaciones. Estos antígenos se denominan en la presente memoria descriptiva los "cinco antígenos básicos".

Proteína NadA

La proteína "NadA" (adhesina A de Neisseria) del serogrupo B de N. meningitidis se divulga como proteína "961" en la referencia 10 (SEC ID 2943 y 2944) y como "NMB1994" en la referencia 6 (véase también los números de acceso en GenBank: 11352904 &7227256). Una descripción detallada de la proteína se puede encontrar en la referencia 17. No existe la proteína correspondiente en el serogrupo A [5, 17].

Cuando se usa, la NadA puede tomar varias formas. Formas preferidas de NadA son variantes truncadas o con deleciones, tales como las divulgadas en las referencias 14 a 16. En particular, se prefiere la NadA sin su anclaje a la membrana por el extremo C (p. ej., deleción de los residuos 351-405 para la cepa 2966 [SEC ID 1]) que, en ocasiones, se distingue en la presente memoria descriptiva mediante el uso de una "C" en superíndice, por ejemplo NadA^(C). La expresión de NadA sin su dominio de anclaje a la membrana (p. ej., SEC ID 1) en E. coli tiene como resultado la secreción de la proteína en el sobrenadante del cultivo con la eliminación concomitante de su péptido líder 23mer (p. ej., para dejar un 327mer para la cepa 2996 [SEC ID 2]). En la presente memoria descriptiva en ocasiones los polipéptidos sin sus péptidos líder se distinguen mediante el uso de un "NL" en superíndice, p. ej., NadA^(NL) o NadA^(C)(NL).

Las secuencias de NadA preferidas tienen una identidad del 50% o mayor (p. ej., 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o más) con la SEC ID 2. Esto incluye variantes de NadA (p. ej., variantes alélicas, homólogos, ortólogos, mutantes etc.). Formas alélicas de NadA se muestran en la Figura 9 de la referencia 18.

Otras secuencias de NadA preferidas comprenden al menos n aminoácidos consecutivos de la SEC ID 1, en la que n es 7 o más (p. ej., 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o más). Fragmentos preferidos comprenden un epítopo de NadA. Otros fragmentos preferidos carecen de uno o más aminoácidos (p. ej., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15,20,25 o más) del extremo C y/o del extremo N de la SE ID 1 (p. ej., NadA^(C), NadA^(NL), NadA^(C)(NL)). Cuando se delecionan los residuos del N terminal, se prefiere que la deleción no elimine la capacidad de la NadA para adherirse a células epiteliales humanas. Un fragmento preferido de la SEC ID es la SEC ID 2.

La NadA secretada puede prepararse de forma conveniente en forma altamente pura a partir del sobrenadante del cultivo mediante un procedimiento que comprende las etapas de: Concentración y diafiltración contra un tampón mediante ultrafiltración; cromatografía en columna aniónica; cromatografía en columna hidrofóbica; cromatografía en columna cerámica de hidroxilapatita; diafiltración contra un tampón; y esterilización con filtro.... [Seguir leyendo]

1. Una composición que, después de su administración a un sujeto, puede inducir una respuesta de anticuerpos en dicho sujeto, en la que la respuesta de anticuerpos es bactericida contra dos o más linajes hipervirulentos A4, ET-5 y linaje 3 de N. meningitidis del serogrupo B, que comprende: (i) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 2; (ii) una proteína híbrida representada por la fórmula NH₂-A-[-X-L-]_n-B-COOH, en la que n= 2; A es la secuencia de aminoácidos Met-Ala; X₁ es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 6; L₁ es la secuencia de aminoácidos SEC ID 9; X₂ es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 5; L₂ está ausente; y B está ausente; e (iii) una proteína híbrida representada por la fórmula NH₂-A-[-X-L-]_n-B-COOH, en la que n= 2; A es el aminoácido Met; X₁ es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 4; L₁ es la secuencia de aminoácidos SEC ID 9; X₂ es una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 95% con la SEC ID 3; L₂ está ausente; y B está ausente.

2. Una composición que, después de su administración a un sujeto, puede inducir una respuesta de anticuerpos en dicho sujeto, en la que la respuesta de anticuerpos es bactericida contra dos o más linajes hipervirulentos A4, ET-5 y linaje 3 de N. meningitidis del serogrupo B, que comprende: (i) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 99% con la SEC ID 2; (ii) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 99% con la SEC ID 7 y (iii) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de más del 99% con la SEC ID 8, a condición de que dicha secuencia no sea la SE ID Nº 15.

3. La composición de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprende: (i) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 1; (ii) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 7; y (iii) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 8.

4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que además comprende antígenos sacáridos de los serogrupos meningocócicos Y, W135, C y (opcionalmente) A.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que además comprende un antígeno sacárido de Haemophilus influenzae de tipo B.

6. La composición de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en la que el antígeno sacárido está conjugado con una proteína transportadora.

7. La composición de la reivindicación 6, en la que el antígeno sacárido está conjugado con un transportador seleccionado de: toxoide de difteria, toxoide del tétanos, CRM₁₉₇ o proteína D de H. influenzae.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que además comprende un antígeno de Streptococcus pneumoniae.

9. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso como medicamento.

10. La composición de cualquier reivindicación precedente para su uso en la prevención y/o tratamiento de una enfermedad provocada por una Neisseria

11. El uso de una composición de cualquier reivindicación precedente en la fabricación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad provocada por una Neisseria.