Un anticuerpo o un fragmento activo específico para BAFF soluble para uso en el tratamiento de cáncer.

Un anticuerpo específico para BAFF soluble para uso en el tratamiento de cáncer

Campo de la invención

La invención se refiere a un anticuerpo específico para BAFF soluble o un fragmento activo de ese anticuerpo para uso en el tratamiento de cáncer. Se describe el uso de un ligando BAFF, un factor de activación de célula B perteneciente a la familia de necrosis tumoral y sus agentes de bloqueo para estimular o inhibir la expresión de células B e inmunoglobulinas. Esta proteína y su receptor pueden tener aplicaciones anticáncer y/o inmunorreguladoras así como usos para el tratamiento de trastornos inmunosupresores como HIV. Específicamente, el ligando y sus agentes de bloqueo pueden desempeñar un papel en el desarrollo de hipertensión y sus trastornos relacionados. Además, las células transfeccionadas con los genes para este ligando pueden usarse en la terapia génica para tratar tumores, enfermedades autoinmunes o trastornos genéticos heredados que implican células B. Agentes de bloqueo, como variantes recombinantes o anticuerpos específicos para el ligando o su receptor, pueden tener aplicaciones inmunorreguladoras asimismo. Se considera el uso de BAFF como estimulador de células B para enfermedades inmuno suprimidas incluyendo, por ejemplo, usos para pacientes que sufren trasplante de órganos (por ejemplo, trasplante de médula ósea) así como la recuperación de tratamientos de cáncer para estimular la producción de células B. También se considera el uso de BAFF como adyuvante y/o coestimulador para elevar y/o restaurar los niveles de células B para aproximarlos a niveles normales.

Fundamento de la invención

Las citoquinas relacionadas con el factor de necrosis tumoral (TNF) son mediadores de defensa del hospedador y de inmunorregulación. Los miembros de esta familia existen en formas ancladas en membrana, que actúan localmente a través del contacto célula a célula, o como proteínas secretadas capaces de difundirse a los objetivos más distantes. Una familia paralela de receptores señala la presencia de estas moléculas que conducen a la iniciación de la muerte de la célula o proliferación celular y a la diferenciación en el tejido objetivo. Al presente, la familia TNF de ligandos y receptores tiene al menos 11 pares ligando-receptor reconocidos, incluyendo: TNF:TNF-R; LT-α:TNF-R; LT-α/β:LT-β-R; FasL:Fas; CD40L:CD40; CD30L:CD30; CD27L:CD27; OX40L:OX40 y 4-1BBL:4-1BB. Las secuencias de DNA que codifican estos ligandos tienen solamente aproximadamente del 25% a aproximadamente el 30% de identidad incluso en los casos más relacionados, aunque la relación de aminoácidos es aproximadamente el 50%.

La característica definitoria de esta familia de receptores de citoquina se encuentra en el dominio extracelular rico en cisteína inicialmente revelado por la clonación de dos receptores de TNF distintos. Esta familia de genes codifica glicoproteínas características de proteínas de transmembrana de Tipo I con un dominio de unión de ligando extracelular, una región que abarca una membrana única y una región citoplásmica implicada en la activación de funciones celulares. La región de unión de ligando rica en cisteína muestra un dominio central estrechamente unido a disulfuro, que, dependiendo del miembro de la familia particular, se repite múltiples veces. La mayoría de los receptores tienen cuatro dominios, aunque puede haber tan pocos como tres, o tantos como seis.

Las proteínas en la familia TNF de ligandos se caracterizan por un corto tramo N-terminal de aminoácidos hidrófilos normalmente cortos, que a menudo contienen varios residuos de arginina o lisina pensados para servir como secuencias de transferencia stop. Inmediatamente sigue una región transmembrana y una región extracelular de longitud variable, que separa el dominio de unión a receptor C-terminal de la membrana. Esta región se denomina a veces "tallo". La región de unión C-terminal comprende la mayor parte de la proteína, y a menudo, pero no siempre, contiene sitios de glicosilación. Estos genes carecen de las secuencias de señal clásicas características de proteínas de membrana Tipo I, proteínas de membrana Tipo II con el terminus C descansando fuera de la célula, y un dominio N-terminal corto que reside en el citoplasma. En algunos casos, por ejemplo, la ruptura TNF y LT-α en la región tallo puede ocurrir pronto durante el procesamiento de la proteína y el ligando se encuentra entonces principalmente en forma secretada. La mayoría de los ligandos, sin embargo, existen en forma de una membrana, mediando localización señalizada.

La estructura de estos ligandos ha sido bien definida por análisis cristalográficos de TNF, LT-α, y CD-40. TNF y la linfotoxina-PPP (LT-α) están estructuradas en un sándwich de dos hojas plegadas-β antiparalelas con la topología "jelly roll" o de llave griega. La desviación rms entre los residuos Cα y β es 0, 61 C, sugiriendo un alto grado de similitud en su topografía molecular. Una característica estructural que emerge de estudios moleculares de CD40L, TNF y LT-α es la propensión a reunirse en complejos oligoméricos. Intrínseca a la estructura oligomérica es la formación del punto de unión del receptor en la unión entre las subunidades próximas creando un enlace multivalente. Se ha observado que las estructuras cuaternarias de TNF, CD40L y LT-α existen como trímeros por el análisis de sus estructuras cristalinas. Muchos de los aminoácidos conservados entre los diferentes ligandos están en tramos del andamiaje de la hoja β. Es probable que la estructura sándwich básica se conserve en todas estas moléculas, ya que porciones de estas secuencias de andamiaje se conservan a través de los distintos miembros de las familias. La estructura cuaternaria puede también mantenerse ya que la conformación de la subunidad probablemente se conserva similar.

Los miembros de la familia TNF pueden describirse lo mejor como conmutadores master en el sistema inmune que controlan la supervivencia y la diferenciación celular. Solamente TNF y LTα se reconocen actualmente como citoquinas secretadas que contrastan con los otros miembros predominantemente anclados en la membrana de la familia TNF. Aunque una forma de membrana de TNF se ha caracterizado bien y es probable que tenga roles biológicos únicos, la TNF secretada funciona como una alarma general que señala a células más distantes del sitio del evento desencadenante. Así la secreción de TNF puede amplificar un evento que conduce a cambios bien descritos en el revestimiento de la vasculatura y en el estado inflamatorio de las células. En contraste, los miembros de la familia unidos a la membrana envían señales aunque los receptores tipo TFN sólo a células en contacto directo. Por ejemplo, las células T proporcionan "ayuda" mediada por CD40 solamente a las células B traídas a contacto directo por medio de interacciones de TCR cognadas. Limitaciones de contacto célula-célula similares sobre la posibilidad de inducir la muerte celular se aplican al bien estudiado sistema Fas.

Parece que se pueden segregar los ligandos TNF en tres grupos basados en su capacidad para inducir la muerte celular. En primer lugar, TNF, el ligando Fas y TRAIL pueden inducir eficazmente la muerte celular en muchas líneas y lo más probable es que sus receptores tengan buenos dominios de muerte canónicos. Presumiblemente el ligando a DR-3 (TRAMP/WSL-1) estaría también en esta categoría. A continuación están aquellos ligandos que desencadenan una señal de muerte más débil limitada a algunos tipos de células y TWEAK, ligando CD30 y LTalb2 son ejemplos de esta clase. Cómo este grupo puede desencadenar la muerte celular en ausencia de un dominio de muerte canónica es una cuestión interesante y sugiere que existe un mecanismo de señalización de muerte más débil separado. Finalmente, hay aquellos miembros que no pueden suministrar una señal de muerte eficazmente. Probablemente todos los grupos pueden tener efectos antiproliferativos sobre algunos tipos de células consecuentes a inducir diferenciación celular, por ejemplo CD40. Funakoshi et al. (1994) .

La familia TNF ha crecido espectacularmente en años recientes para abarcar al menos 11 rutas de señalización diferentes que implican regulación del sistema inmune. Los modelos de expresión extendidos de TWEAK y TRAIL indican que hay una variedad aún más funcional a descubrir en esta familia. Este aspecto ha sido especialmente destacado recientemente en el descubrimiento de dos receptores que afectan la capacidad de los virus del sarcoma de rous... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o un fragmento activo específico para BAFF soluble para uso en el tratamiento de cáncer.

5 2. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

3. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en el que el fragmento activo del anticuerpo se selecciona entre un fragmento Fab' y un fragmento F (ab') 2.

10 4. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico.

5. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humanizado. 15

6. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en el tratamiento de cáncer, donde el cáncer es linfoma de Burkitt.