Una proteína de fusión purificada que comprende a proteína de transferrina (Tf) que muestra glicosilación reducida fusionada a al menos una proteína o péptido terapéutico,

en la que la semivida en suero o estabilidad en suero de la proteína o péptido terapéutico se incrementa respecto de la semivida en suero o estabilidad en suero de la proteína o péptido terapéutico en un estado no fusionado y en el que dicha proteína de Tf comprende al menos una mutación que reduces o evita la glicosilación

Proteína de fusión de transferrina modificadas.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a proteínas o péptidos terapéuticos con estabilidad en suero o semivida en suero ampliada, en particular a proteínas o péptidos terapéuticos fusionados o insertados en una molécula de transferrina modificada para reducir o inhibir la glicosilación, unión a hierro y/o unión al receptor de transferrina.

Antecedentes de la invención

Proteínas o péptidos terapéuticos en su estado nativo o cuando se producen de manera recombinante son típicamente moléculas lábiles que muestran períodos cortos de estabilidad en suero o semivida en suero. Además, estas moléculas son a menudo extremadamente lábiles cuando se formulan, en particular cuando se formulan en soluciones acuosas para propósito diagnóstico o terapéutico.

Existen pocas soluciones prácticas para ampliar o promover la estabilidad in vivo o in vitro de moléculas terapéuticas proteináceas. Polietilen glicol (PEG) es una sustancia que puede unirse a una proteína, que da como resultado actividad de actuación más prolongada, sostenida de la proteína. Si la actividad de una proteína se prolonga mediante la unión a PEG, disminuye la frecuencia con la que la proteína se debe administrar. Sin embargo, la unión a PEG, a menudo disminuye o destruye la actividad terapéutica de la proteína.

Proteínas o péptidos terapéuticos también se han estabilizado mediante fusión a una proteína heteróloga capaz de ampliar la semivida en suero de la proteína terapéutica. Por ejemplo, proteínas terapéuticas fusionadas a albúmina y fragmentos de anticuerpos pueden mostrar semivida en suero ampliada cuando se compara con la proteína terapéutica en estado no fusionado. Véanse las Patentes de Estados Unidos 5.876.969 y 5.766.88.

Otra proteína de suero, transferrina (Tf) humana glicosilada también se ha usado para hacer fusiones con proteínas terapéuticas para dirigir la administración intracelular o para llevar agentes heterólogos a través de la barrera sangre-cerebro. Estas proteínas de fusión que comprenden Tf humana glicosilada se han usado para dirigir el factor de crecimiento nervioso (NGF) o factor neurotrófico ciliar (CNTF) a través de la barrera sangre-cerebro mediante la fusión de longitud completa Tf a cualquier agente. Véanse las Patentes de Estados Unidos 5.672.683 y 5.977.307. En estas proteínas de fusión, la parte de Tf de la molécula está glicosilada y se une a dos átomos de hierro, que se requiere para la unión de Tf a su receptor en una célula y, de acuerdo con los inventores de estas patentes, para dirigir la administración del NGF o resto de CNTF a través de la barrera sangre-cerebro. Proteínas de fusión de transferrina también se han producido mediante la inserción de una secuencia de proteasa de VIH-1 en bucles expuestos en la superficie de transferrina glicosilada para investigar la capacidad de producir otra forma de fusión de Tf para la administración dirigida al interior de una célula mediante el receptor de Tf (Ali et al. (1999) J. Biol. Chem. 274 (34): 24066-24073).

La transferrina de suero (Tf) es una glicoproteína monomérica con un peso molecular de 80.000 daltons que se une a hierro en la circulación y se transporta a los diversos tejidos mediante el receptor de transferrina (TfR) (Aisen et al. (1980) Ann. Rev. Biochem. 49: 357-393; MacGillivray et al. (1981) J. Biol. Chem. 258: 3543-3553, Patente de Estados Unidos 5.026.651). Tf es una de las moléculas de suero más comunes, que comprende hasta aproximadamente 5-10% de proteínas totales en suero. La transferrina deficiente en carbohidratos se produce a niveles elevados en la sangre de alcohólicos y muestra una mayor semivida (aproximadamente 14-17 días) que la de la transferrina glicosilada (aproximadamente 7-10 días). Véase van Eijk et al. (1983) Clin. Chim. Acta 132: 167-171, Stibler (1991) Clin. Chem. 37: 2029-2037 (1991), Amdt (2001) Clin. Chem. 47(1): 13-27 y Stibler et al. in "Carbohydrate-deficient consumption", Advances in the Biosciences, (Ed Nordmann et al.), Pergamon, 1988, Vol. 71, páginas 353-357).

La estructura de Tf se ha caracterizado bien y el mecanismo de unión al receptor, unión a hierro y se ha explicado la liberación de la unión al ion carbonato (Patentes de Estados Unidos 5.026.651, 5.986.067 y MacGillivray et al. (1983) J. Biol. Chem. 258(6): 3543-3546).

La transferrina y anticuerpos que se unen al receptor de transferrina también se han usado para distribuir o llevar agentes tóxicos a las células tumorales como terapia de cáncer (Baselga y Mendelsohn, 1994), y transferrina se ha usado como un vector de terapia génica no viral como vehículo para distribuir ADN a las células (Frank et al., 1994; Wagner et al, 1992). La capacidad de distribuir proteínas al sistema nervioso central (CNS) usando el receptor de transferrina como el punto de entrada se ha demostrado con varias proteínas y péptidos incluyendo CD4 (Walus et al., 1996), factor neurotrófico derivado del cerebro (Pardridge et al., 1994), factor neurotrófico derivado glial (Albeck et al.), un análogo de péptido vasointestinal (Bickel et al., 1993), un péptido betaamiloide (Saito et al., 1995), y un oligonucleótido no codificante (Pardridge et al., 1995).

Hoefkens et al ((1997) Glicoconj J. J. 14, 289-295) reseña la influencia del estado de glicosilación de transferrina sobre la unión al receptor y donación de hierro. Documento US-A-6027921 desvela la preparación de una proteína de fusión transferrina/LDLR expresada de manera recombinante. Newton et al ((1999) J. Inmunol. Meth. 231, 159-167) describe una proteína de fusión anticuerpo del receptor de antitransferrina-ARNasa expresado en la glándula mamaria de ratones transgénicos. Park et al. ((1998) J. Drug 55 Tar. 6, 53-64) describe una proteína de fusión que comprende transferrina y factor de crecimiento nervioso. Prince et al. ((1999) J. Biol. Chem. 274, 3602-3609) describe moléculas quiméricas que consisten en las regiones de cola amino-terminal y carboxilo-terminal de CFTR, cada una fusionada a los dominios transmembrana y extracelulares del receptor de transferrina. Shin et al. ((1995) Proc. Natl. Acad. Sci USA 92, 2820-2824) describe proteínas de fusión de anticuerpo de transferrina eficaces en la dirección del cerebro. El documento USA-5986067 describe la provisión de transferrina modificada genéticamente. El documento EP-0413622 describe proteínas de fusión que comprenden albúmina como vehículo y CD4 como la proteína terapéutica. EP0314317 describe proteínas conjugadas y quiméricas que comprenden CD4 y una proteína de plasma, tales como transferrina humana, albúmina y una lipoproteína.

Sin embargo proteínas de fusión de transferrina no se han modificado o modificado por ingeniería para ampliar la semivida en suero de una proteína terapéutica o péptido o para incrementar la biodisponibilidad mediante la reducción o inhibición de la glicosilación del resto de Tf o para reducir o prevenir la unión a hierro y/o receptor de Tf.

Sumario de la invención

Como se describe en más detalle más adelante, la presente invención incluye proteínas de fusión de Tf modificadas que comprenden al menos una entidad proteína, polipéptido o péptido terapéutico, en la que la parte Tf está modificada por ingeniería para ampliar la semivida o biodisponibilidad en suero de la molécula. La invención también incluye formulaciones y composiciones farmacéuticas que comprenden las proteínas de fusión, procedimientos de ampliación de la estabilidad en suero, semivida en suero y biodisponibilidad de una proteína terapéutica mediante la fusión a transferrina modificada, moléculas de ácido nucleico que codifican las proteínas de fusión de Tf modificadas, y similares. Otro aspecto de la presente invención se refiere a proteínas de fusión modificadas de Tf para uso en un procedimiento de tratamiento médico.

En una realización preferida, la presente invención proporciona una proteína de fusión purificada que comprende una proteína de transferrina (Tf) que muestra glicosilación reducida fusionada a al menos una proteína o péptido terapéutico, en la que la semivida o estabilidad en suero de la proteína o péptido terapéutico aumenta por encima de la semivida en suero o estabilidad en suero de la proteína o péptido terapéutico en un estado no fusionado y en la que dicha proteína Tf comprende al menos una mutación...

1. Una proteína de fusión purificada que comprende a proteína de transferrina (Tf) que muestra glicosilación reducida fusionada a al menos una proteína o péptido terapéutico, en la que la semivida en suero o estabilidad en suero de la proteína o péptido terapéutico se incrementa respecto de la semivida en suero o estabilidad en suero de la proteína o péptido terapéutico en un estado no fusionado y en el que dicha proteína de Tf comprende al menos una mutación que reduces o evita la glicosilación.

2. Una proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína de Tf contiene una o más sustituciones, inserciones o supresiones de aminoácido comparado con una secuencia de tipo salvaje que da como resultado una afinidad reducida para un receptor de Tf (TfR).

3. La proteína de fusión de la reivindicación 2, en la que la proteína de Tf no se une a un TfR.

4. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína de Tf tiene unión a hierro reducida.

5. La proteína de fusión de la reivindicación 4, en la que la proteína de Tf no se une a hierro.

6. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína de Tf es lacto transferrina (lactoferrina).

7. La proteína de fusión de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el sitio de glicosilación se selecciona entre el grupo que consiste en un resto de aminoácido que corresponde a aminoácidos N413, N611, o un aminoácido adyacente a o en un sitio de glicosilación N-X-S/T.

8. La proteína de fusión de la reivindicación 2 ó 3, en la que la Tf comprende al menos una sustitución, supresión o adición de aminoácido en un resto de aminoácido que corresponde a un aminoácido seleccionado entre el grupo que consiste en Asp 63, Gly 65, Tyr 95, Tyr 188, Lys 206, His 207, His 249, Asp 392, Tyr 426, Tyr 514, Tyr 517, His 585, Thr 120, Arg 124, Ala 126, Gly 127, Thr 452, Arg 456, Ala 458 y Gly 459.

9. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína o péptido terapéutico está fusionado al extremo C-terminal de Tf.

10. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína o péptido terapéutico está fusionado al extremo N-terminal de Tf.

11. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína o péptido terapéutico está insertado en al menos un bucle de la Tf.

12. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que dicha proteína de Tf comprende una parte del dominio N de una proteína de Tf, un puente de péptido y una parte del dominio C de una proteína de Tf.

13. La proteína de fusión de la reivindicación 12, en la que el puente de péptido une la proteína o péptido terapéutico a Tf.

14. La proteína de fusión de la reivindicación 12, en la que dicha proteína, péptido o polipéptido terapéutico se inserta entre un dominio N y C de proteína de Tf.

15. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína de Tf tiene una región de articulación y al menos una sustitución, supresión o adición de aminoácido en la región de articulación Tf.

16. La proteína de fusión de la reivindicación 15, en la que dicha región de articulación se selecciona entre el grupo que consiste en aproximadamente del resto 94 a aproximadamente del resto 96, aproximadamente del resto 245 a aproximadamente del resto 247, aproximadamente del resto 316 a aproximadamente del resto 318, aproximadamente el resto 425 a aproximadamente del resto 427, aproximadamente del resto 581 a aproximadamente del resto 582 y aproximadamente del resto 652 a aproximadamente del resto 658.

17. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que dicha proteína de Tf tiene al menos una sustitución, supresión o adición de aminoácido en una posición seleccionada entre el grupo que consiste en Asp 63, Gly 65, Tyr 95, Tyr 188, Lys 206, His 207, His 249, Asp 392, Tyr426, Tyr514, Tyr517, His 585, Thr 120, Arg 124, Ala 126, Gly 127, Thr452, Arg 456, Ala 458 y Gly459.

18. La proteína de fusión de la reivindicación 9, en la que la proteína o péptido terapéutico reemplaza al menos un bucle.

19. Un ácido nucleico molécula que codifica una proteína de fusión de la reivindicación 1.

20. Un vector que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 19.

21. Una célula huésped que comprende un vector de la reivindicación 20.

22. Una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 19.

23. Un procedimiento de expresión de una proteína Tf de fusión que comprende el cultivo de una célula huésped de la reivindicación 21 en condiciones que expresan la proteína de fusión codificada.

24. Un procedimiento de expresión de una proteína Tf de fusión que comprende el cultivo de una célula huésped de la reivindicación 22 en condiciones que expresan la proteína de fusión codificada.

25. El procedimiento de la reivindicación 23 o 24, en el que la proteína de Tf de fusión se expresa en la presencia de un agente que evita la glicosilación.

26. Una célula huésped de la reivindicación 21 o 22, en la que la célula es procariótica o eucariótica.

27. Una célula huésped de la reivindicación 26, en la que la célula es una célula de levadura.

28. Un animal transgénico no humano que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 19.

29. Un procedimiento de producción de una proteína Tf de fusión que comprende aislamiento de una proteína de fusión de un animal transgénico de la reivindicación 28.

30. Un procedimiento de la reivindicación 29, en la que la proteína de Tf de fusión comprende lactoferrina.

31. Un procedimiento de la reivindicación 30, en la que la proteína de fusión se aísla de un fluido biológico del animal transgénico.

32. Un procedimiento de la reivindicación 30, en la que el fluido es suero o leche.

33. Un procedimiento de incremento de la semivida en suero o estabilidad en suero de una proteína o péptido terapéutico, que comprende la expresión de dicha proteína o péptido terapéutico como una proteína de fusión con una proteína de transferrina (Tf), en la que:

dicha proteína de Tf comprende al menos una mutación que reduce o evita la glicosilación;

de manera que la proteína de transferrina (Tf) muestra glicosilación reducida.

34. Una proteína de fusión de una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en la que la proteína o péptido terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en hormonas, proteínas de matriz, inmunosupresores, broncodilatadores, agentes cardiovasculares, enzimas, agentes CNS, neurotransmisores, hormonas de crecimiento, factores de crecimiento, apéptidos antivirales, péptidos inhibidores fusogénicos, citoquinas, Iinfoquinas, monoquinas, interleuquinas, factores estimulantes de colonias, factores de diferenciación, factores angiogénicos, ligandos receptores, proteínas asociadas a cáncer, antineoplásicos, péptidos virales, péptidos antibióticos, proteínas de sangre, proteínas antagonistas, factores de transcripción, factores antiangiogénicos, proteínas o péptidos antagonistas, antagonistas receptores, anticuerpos, anticuerpos de una sola cadena, y moléculas de adhesión a células.

35. Una proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína terapéutica es un anticuerpo o su fragmento.

36. La proteína de fusión de la reivindicación 35, en la que el anticuerpo o su fragmento comprende al menos una CDR.

37. La proteína de fusión de la reivindicación 35, en la que el anticuerpo o su fragmento es un anticuerpo de una sola cadena.

38. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es una citoquina.

39. La proteína de fusión de la reivindicación 38, en la que la citoquina se selecciona entre el grupo que consiste en IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, factor estimulante de colonias de garnulocitos-macrófagos, factor estimulante de colonias de garnulocitos, factor activador de plaquetas, eritropoyetina, TNFα, llinfotoxlna-α, Ilinfotoxina-β, Ieucorregulina, factor inhibidor de la migración de macrófagos, neuroleuquina, leptina, IFNα, IFNβ, IFNy, IFNo, trombospondina 1, THB82, THB83, THB84 y quimioquina.

40. La proteína de fusión de la reivindicación 39, en la que la citoquina es IFNβ.

41. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es una hormona.

42. La proteína de fusión de la reivindicación 41, en la que la hormona se selecciona entre el grupo que consiste en proinsulina, insulina, hormona de crecimiento 1, hormona de crecimiento 2, factor de liberación de la hormona de crecimiento, factor de crecimiento I de tipo insulina, factor de crecimiento II de tipo insulina, proteína I de unión al factor de crecimiento de tipo insulina (IGFBP-1), IGFBP-2, IGFBP-3, IGFBP-4, IGFBP-5, IGFBP-6, IGFBP-7, cadena β de gonadotropina coriónica, cadena α de gonadotropina coriónica, hormona β luteinizante, hormona β estimuladora de folículos, hormona β estimuladora de tiroides, prolactina, pro-opiomelanocortina, corticotrofina (ACTH), β-lipotropina, hormona α estimuladora de melanocitos (α-MSH), γ-lipotropina, β-MSH, β-endorfina y péptido de lóbulo intermedio de tipo corticotrofina (CLIP).

43. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es un factor de crecimiento.

44. La proteína de fusión de la reivindicación 43, en la que el factor de crecimiento se selecciona entre el grupo que consiste en factor de crecimiento-α derivado de plaquetas (PDGF-α), PDGF-β, hormonas esteroides, factor de crecimiento epidérmico (EGF), factores de crecimiento de fibroblasto tales como factor I de crecimiento de fibroblasto (FGF1), FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6, FGF7, FGF8, FGF9, FGF10, FGF11, FGF12, FGF13, FGF14, FGF16, FGF17, FGF18, FGF19, FGF20, FGF21, FGF22, FGF23, angiogenina, factor neurotrófico derivado de cerebro, factor de crecimiento neurotrófico ciliar, factor de crecimiento-α de transformación (TGF-α), TGF-β, factor-α de crecimiento nervioso (NGF-α), NGF-β, inhibidor de tejido de metaloproteinasa 1 (TIMP1), TIMP2, TIMP3, TIMP4 y estimulador I de macrófagos.

45. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es una proteína de matriz.

46. La proteína de fusión de la reivindicación 45, en la que la proteína de matriz se selecciona entre el grupo que consiste en colágeno I, colágeno II, colágeno III, colágeno IV, colágeno V, colágeno VI, colágeno VII, colágeno VIII, colágeno IX, colágeno X, colágeno XI, y colágeno XII, LAMA2, LAMA3, LAMA4, LAMB1, LAMB3, LAMC1, nidógeno, α-tectorina, β-tectorina y fibronectina.

47. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es una proteína de sangre.

48. La proteína de fusión de la reivindicación 47, en la que la proteína de sangre se selecciona entre el grupo que consiste en una proteína de suero nativa, un factor de coagulación de sangre, antitrombina 3, antitripsina alfa-1, activador de plasminógeno de tipo uroquinasa, una inmunoglobulina, factor von Willebrand, fibronectina, fibrinógeno, trombina y hemoglobina.

49. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es una enzima.

50. La proteína de fusión de la reivindicación 49, en la que la enzima se selecciona entre el grupo que consiste en un factor de coagulación, una metaloproteínasa de matriz, adenosina desaminasa, una proteína quinasa activada por mitógeno, una quinasa y una fosfatasa.

51. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es un factor de transcripción.

52. La proteína de fusión de la reivindicación 51, en la que el factor de transcripción se selecciona entre el grupo que consiste en Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, NFYB, Hap2, GATA-1, GATA-2, GATA-3, GATA-4, GATA-5, GATA-6, FOG2, Eryf1, TRPS1, NF-E2, NFE3, NF-E4, TFCP2, Oct-1, HOXB2, HOX2H, homólogo sin pelo, MADH1, MADH2, MADH3, MADH4, MADH5, MADH6, MADH7, MADH9, STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5 y STAT6.

53. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es una proteína asociada a cáncer.

54. La proteína de fusión de la reivindicación 53, en la que la proteína asociada a cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en p16, p53, p63, p73, BRCA1, BRCA2, proteína de interactuación de CTBP, DMBT1, HRAS, NCYM, FGR, myb, raf1, erB2, VAV, c-fos, e-fes, c-jun, MAS1, pim-1, TIF1, c-frns, EGFR, erbA, c-src tirosina quinasa, c-abl, N-ras, K-ras, jun-B, c-myc, RB1, DCC, APC, NF1, NF2, y bcl-2.

55. La proteína de fusión de la reivindicación 34, en la que la proteína o péptido terapéutico es un péptido inhibidor fusógenico.

56. La proteína de fusión de la reivindicación 55, en la que el péptido inhibidor fusógenico se selecciona entre el grupo que consiste en VIH T-20, VIH T-1249, RSV T786, RSV T1584 y RSV T112.

57. La proteína de fusión de la reivindicación 56, que se expresa en la presencia de tunicamicina.

58. La proteína de fusión de reivindicaciones 1-18, en la que la proteína de Tf es lacto transferrina.

59. La proteína de fusión de la reivindicación 4 ó 5, en la que la Tf comprende al menos un aminoácido sustitución, supresión o adición en un resto de aminoácido que corresponde a un aminoácido seleccionado entre el grupo que consiste en Asp 63, Gly 65, Asp 392, Tyr 95, Tyr 426, Tyr 188, Tyr 514, Tyr 517, His 249, His 585, Lys 206, His 207 y Arg 632.

60. Una proteína de fusión de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 para su uso en un procedimiento de tratamiento médico.

61. La proteína de fusión de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que la mutación es un sitio de glicosilación ligado a N que comprende la secuencia N-X-SfT.

62. La proteína de fusión de la reivindicación 61, en la que la secuencia N-X-SfT secuencia comienza en un aminoácido que corresponde a N413 o N611 de la SEQ ID NO: 3.

63. La proteína de fusión de la reivindicación 61, en la que la proteína de Tf carece de glicosilación ligada a N.

64. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que la proteína Tf está sin glicosilar.

65. Una proteína de fusión purificada que comprende una proteína Tf que comprende mutación en un sitio de glicosilación N-X-SfT ligado a N fusionado a al menos una proteína o péptido terapéutico, en la que la proteína de transferrina muestra glicosilación reducida cuando se compara con una proteína de Tf glicosilada completamente y en la que la semivida en suero de la proteína o péptido terapéutico está aumentada por encima de la semivida en suero de la proteína o péptido terapéutico en un estado no fusionado.

66. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que dicha proteína Tf se modifica en S32 para reducir la O glicosilación.

67. La proteína de fusión de la reivindicación 1 ó 65, en la que la proteína de transferrina es una transferrina humana.

68. La proteína de fusión de la reivindicación 67, en la que la transferrina comprende la SEQ ID NO: 3.

69. La proteína de fusión de las reivindicaciones 1, 15 ó 65, en la que la proteína de transferrina es una variante de corte y empalme de transferrina.

70. La proteína de fusión de las reivindicaciones 1 ó 65, en la que dicha proteína de fusión incrementa la estabilidad in vitro de al menos una proteína o péptido terapéutico.

71. La proteína de fusión de reivindicaciones 1 ó 65, en la que dicha proteína de fusión incrementa la biodisponibilidad de al menos una proteína o péptido terapéutico.

72. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que dicha proteína de fusión se une a hierro.

73. La proteína de fusión de la reivindicación 1, en la que dicha proteína de fusión es capaz de cruzar una barrera sangre cerebro.

74. La proteína de fusión de la reivindicación 1 ó 65, en la que la proteína de Tf se conecta a al menos una proteína o péptido terapéutico por un engarce péptido.

75. La proteína de fusión de la reivindicación 74, en la que dicho engarce es menos de 50 restos de aminoácido.

76. La proteína de fusión de la reivindicación 74, en la que dicho engarce comprende un tramo de poliglicina.

77. La proteína de fusión de la reivindicación 1 o 65, en la que dicha proteína de Tf de fusión muestra unión de carbonato reducida.

78. La proteína de fusión de la reivindicación 1 ó 65, en la que dicha proteína de fusión contiene una o más sustituciones, inserciones o supresiones de aminoácido comparado con una secuencia de tipo salvaje y no es capaz de cruzar una barrera sangre cerebro.

79. Una composición que comprende una proteína de fusión de una cualquiera de las reivindicaciones 1-18 y 34-78.

80. Uso de una proteína de transferrina que muestra glicosilación reducida para incrementar la semivida en suero o estabilidad en suero de una proteína terapéutica, en la que dicha proteína de transferrina está condensada a dicha proteína terapéutica para formar una proteína de fusión de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 ó 34 a 78.