Uso de un receptor acoplado con proteína G para identificar secretagogos de GIP en un procedimiento in vitro que comprende las etapas de:

(a) poner en contacto un compuesto de ensayo con una célula hospedadora o con la membrana de una célula hospedadora que comprende dicho receptor acoplado con proteína G, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo constituido por: (i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2; (ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2; (iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que es amplificable por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO: 3 y la SEQ ID NO: 4; (iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1; (v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2; (vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y (vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3- isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-pirimidin-4-il}-amina; y (b) determinar la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la funcionalidad del receptor; en el que la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la funcionalidad del receptor es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a procedimientos de uso del receptor GPR119 para identificar secretagogos de GIP que pueden ser útiles para aumentar la masa ósea en un individuo. Los agonistas del receptor GPR119 son útiles como 5 agentes terapéuticos para tratar o prevenir una afección caracterizada por una baja masa ósea, tal como osteoporosis, y para aumentar la masa ósea en un individuo. Los agonistas del receptor GPR119 promueven la formación ósea en un individuo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Se pretende que la siguiente discusión facilite la comprensión de la 10 invención, pero no se pretende ni admite que sea técnica anterior a la invención.

A. Osteoporosis

La osteoporosis es una enfermedad incapacitante caracterizada por la pérdida de masa ósea y el deterioro microarquitectónico de la estructura esquelética, que conduce a una resistencia ósea comprometida, que predispone al paciente a un 15 riesgo aumentado de fracturas por fragilidad. La osteoporosis afecta a más de 75 millones de persones en Europa, Japón y los Estados Unidos, y causa más de 2,3 millones de fracturas solo en Europa y los Estados Unidos. En los Estados Unidos, la osteoporosis afecta al menos a un 25% de las mujeres blancas postmenopáusicas, y la proporción aumenta a un 70% en mujeres mayores de 80 años. Una de cada tres 20 mujeres mayores de 50 años tendrá una fractura osteoporótica que causa una carga social y financiera considerable a la sociedad. La enfermedad no está limitada a mujeres; los hombres ancianos pueden estar también afectados. Para 2050, se proyecta que la incidencia mundial de fractura de cadera en hombres aumentará un 310% y un 240% en mujeres. El riesgo de por vida combinado de presentación clínica de fracturas 25 de cadera, antebrazo y vertebral es aproximadamente de un 40%, equivalente al riesgo de enfermedad cardiovascular. Por lo tanto, las fracturas osteoporóticas causan una mortalidad, morbilidad y coste económico sustanciales. Con una población que envejece, el número de fracturas osteoporóticas y sus costes se duplicarán al menos en los próximos 50 años a menos que se desarrollen estrategias preventivas eficaces 30 (véanse, por ejemplo, Atik y col, Clin. Orthop. Relat. Res. (2006) 443: 19-24; Raisz, J. Clin. Invest. (2005) 115: 3318-3325 y la Serie de informes técnicos 921 de la Organización Mundial de la Salud (2003), “Prevención y gestión de la osteoporosis”).

B. Polipéptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP)

El polipéptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP, también conocido como polipéptido inhibidor gástrico) es una hormona incretina peptídica de 42 aminoácidos que se libera de células K endocrinas duodenales después de la ingestión de comida. La cantidad de GIP liberada depende en gran medida de la cantidad de glucosa consumida. Se ha mostrado que el GIP estimula la secreción de 5 insulina dependiente de glucosa en células beta pancreáticas. El GIP media sus acciones a través de un receptor acoplado con proteína G específico, a saber GIPR.

Ya que el GIP contiene una alanina en posición 2, es un excelente sustrato para la dipeptidilpeptidasa 4 (DPP-IV), una enzima que regula la degradación de GIP. Convierte rápidamente GIP(1-42) completo en GIP(3-42) bioinactivo al cabo de 10 minutos desde la secreción de células K intestinales. Se ha mostrado que la inhibición de DPP-IV aumenta la bioactividad de GIP (véanse, por ejemplo, Drucker, Cell. Metab. (2006) 3: 153-165; McIntosh y col., Regul. Pept. (2005) 128: 159-165; Deacon, Regul. Pept. (2005) 128:117-124 y Ahren y col., Endocrinology (2005) 146: 2055-2059.) El análisis de GIP bioactivo completo, por ejemplo en sangre, puede llevarse a 15 cabo usando ensayos específicos N-terminales (véase, por ejemplo, Deacon y col., J. Clin. Endocrinol. Metab. (2000)

85: 3575-3581).

Recientemente, se ha mostrado que el GIP promueve la formación ósea. Se ha mostrado que el GIP activa receptores osteoblásticos, dando como resultado 20 aumentos de la síntesis de colágeno de tipo I y de la actividad fosfatasa alcalina, ambas asociadas con la formación ósea. Se ha mostrado que el GIP inhibe la actividad osteoclástica y la diferenciación in vitro. Se ha mostrado que la administración de GIP previene la pérdida ósea debida a ovariectomía. Los ratones con inactivación génica del receptor de GIP (GIPR) evidencian un tamaño óseo reducido, menor masa ósea, 25 microarquitectura ósea y propiedades bioquímicas alteradas y parámetros alterados de recambio óseo, especialmente en la formación ósea (véanse, por ejemplo, Zhong y col., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. (2007) 292: E543-E548; Bollag y col., Endocrinology (2000) 141: 1228-1235; Bollag y col., Mol. Cell. Endocrinol. (2001) 177: 35-41; Xie y col., Bone (2005) 37: 759-769 y Tsukiyama y col., Mol. Endocrinol. 30 (2006) 20: 1644-165 I.)

Se ha reconocido la utilidad del GIP para mantener o aumentar la densidad o formación ósea por la Oficina de Patentes y Marcas de los Estados Unidos mediante la expedición de la patente de EE.UU. nº 6.410.508 para el tratamiento de la

mineralización ósea reducida mediante la administración del péptido GIP. Sin embargo, los agonistas del péptido GIP actuales padecen de falta de biodisponibilidad oral, lo que afecta negativamente al cumplimento del paciente. Es un enfoque alternativo atractivo desarrollar una composición activa por vía oral para aumentar el nivel endógeno de actividad de GIP. 5

C. GPR119

El GPR119 es un receptor acoplado con proteína G (GPR119; por ejemplo, GPR119 humano, nº de acceso a GenBank® AAP72125 y alelos del mismo, por ejemplo, GPR119 de ratón, nº de acceso a GenBank® AY288423 y alelos del mismo). La activación de GPR119 como por un agonista conduce a la elevación del nivel de 10 AMPc intracelular, coherentemente con que el GPR119 esté acoplado con Gs. En la bibliografía de patentes, el GPR119 se ha designado como RUP3 (por ejemplo, documento WO 00/31258); el GPR119 se ha designado también como receptor insulinotrópico dependiente de glucosa (GDIR).

D. Receptores acoplados con proteína G 15

Aunque existen una serie de clases de receptores en seres humanos, la más abundante y terapéuticamente relevante de lejos es la representada por la clase de receptor acoplado con proteína G (GPCR). Se estima que hay unos 30.000-40.000 genes en el genoma humano, y de estos, aproximadamente un 2% se estima que codifican GPCR. 20

Los GPCR representan un área importante para el desarrollo de productos farmacéuticos. Los fármacos activos en GPCR tienen beneficios terapéuticos dentro de un amplio espectro de enfermedades humanas tan diversas como dolor, disfunción cognitiva, hipertensión, úlceras pépticas, rinitis y asma. De los aproximadamente 500 fármacos comercializados clínicamente, más de un 30% son moduladores de la función 25 de GPCR. Estos fármacos ejercen su función en aproximadamente 30 GPCR bien caracterizados (véase, por ejemplo, Wise y col., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. (2004) 44: 43-66).

Los GPCR comparten un motivo estructural común, al tener siete secuencias de entre 22 y 24 aminoácidos hidrófobos que forman siete hélices alfa, cada 30 una de las cuales se extiende por la membrana (cada extensión se identifica por un número, concretamente, transmembrana 1 (TM-1), transmembrana 2 (TM-2), etc.). Las hélices transmembrana se unen por cadenas de aminoácidos entre transmembrana 2 y transmembrana 3, transmembrana 4 y transmembrana 5 y transmembrana 6 y

transmembrana 7 en el exterior, o lado “extracelular” de la membrana celular (estas se designan como regiones “extracelulares” 1, 2 y 3 (EC-1, EC-2 y EC-3), respectivamente). Las hélices transmembrana se unen también por cadenas de aminoácidos entre transmembrana 1 y transmembrana 2, transmembrana 3 y transmembrana 4 y transmembrana 5 y transmembrana 6 en el interior, o lado 5 “intracelular” de la membrana celular (estas se designan como regiones “intracelulares” 1, 2 y 3 (IC-1, IC-2 e IC-3), respectivamente). El extremo carboxilo (“C”) del receptor se encuentra en el espacio intracelular en la célula, y el extremo amino (“N”) del receptor se encuentra en el espacio extracelular fuera de la célula.

Por lo general, cuando un ligado...

1. Uso de un receptor acoplado con proteína G para identificar secretagogos de GIP en un procedimiento in vitro que comprende las etapas de:

(a) poner en contacto un compuesto de ensayo con una célula hospedadora o 5 con la membrana de una célula hospedadora que comprende dicho receptor acoplado con proteína G, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo constituido por:

(i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2;

(ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2; 10

(iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que es amplificable por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO: 3 y la SEQ ID NO: 4;

(iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G 15 codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1;

(v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2;

(vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un 20 receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y

(vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-pirimidin-4-il}-amina; y

(b) determinar la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la 25 funcionalidad del receptor;

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la funcionalidad del receptor es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP.

2. Uso según la reivindicación 1, que comprende adicionalmente:

(c) poner en contacto un compuesto que estimula la funcionalidad del receptor 30 en la etapa (b) in vitro con una célula enteroendocrina de vertebrado o una célula capaz de secretar GIP; y

(d) determinar si el compuesto estimula la secreción de GIP de la célula enteroendocrina de vertebrado o la célula capaz de secretar GIP;

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la secreción de GIP de la célula enteroendocrina o célula capaz de secretar GIP es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP.

3. Uso según la reivindicación 1, que comprende adicionalmente:

(c) determinar si el compuesto aumenta el nivel de GIP en un vertebrado 5 midiendo el nivel de GIP en una muestra obtenida de un vertebrado al que se ha administrado anteriormente un compuesto que estimula la funcionalidad del receptor en la etapa (b);

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de aumentar el nivel de GIP en el vertebrado es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP. 10

4. Uso según la reivindicación 3, en el que el vertebrado es un vertebrado no humano.

5. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el receptor es recombinante.

6. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la célula 15 hospedadora comprende un vector de expresión, comprendiendo dicho vector de expresión un polinucleótido que codifica el receptor acoplado con proteína G.

7. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha determinación es mediante la medida del nivel de un segundo mensajero.

8. Uso según la reivindicación 7, en el que el segundo mensajero se 20 selecciona del grupo constituido por AMP cíclico (AMPc), GMP cíclico (GMPc), 1,4,5-trifosfato de inositol (IP3), diacilglicerol (DAG), actividad MAP cinasa, actividad MAPK/ERK cinasa cinasa 1 (MEKK1) y Ca2+.

9. Uso según la reivindicación 8, en el que el nivel de AMPc aumenta.

10. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha 25 determinación es mediante el uso de un ensayo de melanóforo, mediante la medida de la unión de GTPγS a una membrana que comprende dicho GPCR o mediante un ensayo indicador.

11. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que la célula hospedadora es una célula hospedadora de mamífero. 30

12. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que la célula hospedadora es una célula hospedadora de levadura.

13. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que la célula hospedadora es una célula hospedadora melanofórica.

14. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que el compuesto de ensayo es una molécula pequeña que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 5.000 g/mol.

15. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G 5 que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2.

16. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de la SEQ ID NO: 2.

17. Un procedimiento para identificar secretagogos de GIP, que comprende las etapas de: 10

(a) poner en contacto un agonista de GPR119 in vitro con una célula enteroendocrina de vertebrado o una célula capaz de secretar GIP; y

(b) determinar si el agonista de GPR119 estimula la secreción de GIP de la célula enteroendocrina de vertebrado o de la célula capaz de secretar GIP;

en el que la capacidad del agonista de GPR119 de estimular la secreción de GIP 15 de la célula enteroendocrina de vertebrado o de la célula capaz de secretar GIP es indicativa de que el agonista es un secretagogo de GIP.

18. Un procedimiento para identificar secretagogos de GIP, que comprende la etapa de:

(a) determinar si un agonista de GPR119 aumenta el nivel de GIP en un 20 vertebrado midiendo el nivel de GIP en una muestra obtenida de un vertebrado al que se ha administrado anteriormente el agonista de GPR119;

en el que la capacidad del agonista de GPR119 de aumentar el nivel de GIP en el vertebrado es indicativa de que el agonista de GPR119 es un secretagogo de GIP.

19. Un procedimiento según la reivindicación 18, en el que el vertebrado es un 25 ser humano.

20. Un procedimiento según la reivindicación 18, en el que el vertebrado es un vertebrado no humano.

21. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20, en el que el agonista de GPR119 es una molécula pequeña que tiene un peso molecular de 30 menos de aproximadamente 5.000 g/mol.

22. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21, en el que el agonista de FPR119 es un agonista de GPR119 humano.

23. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 22, en el que el agonista de GPR119 es un agonista selectivo de GPR119.

24. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, en el que el agonista de GPR119 tiene una CE50 de menos de 10 µM.

25. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, en 5 el que el agonista de GPR119 tiene una CE50 de menos de 1 µM.

26. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, en el que el agonista de GPR119 tiene una CE50 de menos de 100 nM.

27. Un procedimiento según la reivindicación 17, que comprende antes de la etapa (a) las etapas in vitro adicionales de: 10

(x) poner en contacto un compuesto de ensayo con una célula hospedadora o con membrana de una célula hospedadora que comprende un receptor acoplado con proteína G, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo constituido por:

(i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2; 15

(ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2;

(iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que es amplificable por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO:3 y de la SEQ ID NO:4; 20

(iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1;

(v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2; 25

(vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y

(vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-pirimidin-4-il}-amina; y 30

(y) determinar la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la funcionalidad del receptor;

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la funcionalidad del receptor es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP, y

en el que el agonista de GPR119 de la etapa (a) es un compuesto de ensayo identificado por estimular la funcionalidad del receptor en la etapa (y).

28. Un procedimiento según la reivindicación 18, que comprende antes de la etapa (a) las etapas in vitro adicionales de:

(x) poner en contacto un compuesto de ensayo con una célula hospedadora o 5 con membrana de una célula hospedadora que comprende un receptor acoplado con proteína G, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una secuencia aminoacídica seleccionada del grupo constituido por:

(i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2;

(ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2; 10

(iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificada por un polinucleótido que es amplificable por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO:3 y de la SEQ ID NO:4;

(iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G 15 codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1;

(v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2;

(vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un 20 receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y

(vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-pirimidin-4-il}-amina; y

(y) determinar la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la 25 funcionalidad del receptor;

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la funcionalidad del receptor es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP, y en el que el agonista de GPR119 de la etapa (a) es un compuesto de ensayo identificado por estimular la funcionalidad del receptor en la etapa (y). 30

29. El procedimiento de la reivindicación 28, en el que el vertebrado es un ser humano.

30. El procedimiento de la reivindicación 28, en el que el vertebrado es un vertebrado no humano.

31. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 30, en el que el receptor es recombinante.

32. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 31, en el que la célula hospedadora comprende un vector de expresión, comprendiendo dicho vector de expresión un polinucleótido que codifica el receptor acoplado con proteína 5 G.

33. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 32, en el que dicha determinación es mediante la medida del nivel de un segundo mensajero.

34. El procedimiento de la reivindicación 33, en el que el segundo mensajero 10 se selecciona del grupo constituido por AMP cíclico (AMPc), GMP cíclico (GMPc), 1,4,5-trifosfato de inositol (IP3), diacilglicerol (DAG), actividad MAP cinasa, actividad MAPK/ERK cinasa cinasa 1 (MEKK1) y Ca2+.

35. El procedimiento de la reivindicación 34, en el que el nivel de AMPc aumenta. 15

36. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 32, en el que dicha determinación es mediante el uso de un ensayo de melanóforo, mediante la medida de la unión de GTPγS a una membrana que comprende dicho GPCR o mediante un ensayo indicador.

37. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 36, en 20 el que la célula hospedadora es una célula hospedadora de mamífero.

38. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 36, en el que la célula hospedadora es una célula hospedadora de levadura.

39. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 36, en el que la célula hospedadora es una célula hospedadora melanofórica. 25

40. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 39, en el que el compuesto de ensayo es una molécula pequeña que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 5.000 g/mol.

41. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 40, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con 30 proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2.

42. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 41, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de la SEQ ID NO: 2.

43. Uso de un receptor acoplado con proteína G para identificar secretagogos de GIP en un procedimiento in vitro que comprende las etapas de:

(a) poner en contacto un receptor acoplado con proteína G con un ligando conocido opcionalmente marcado del receptor en presencia o ausencia del compuesto de ensayo, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una secuencia 5 aminoacídica seleccionada del grupo constituido por:

(i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2;

(ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2;

(iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que es amplificable por reacción en cadena de la 10 polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO:3 y de la SEQ ID NO:4;

(iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1; 15

(v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2;

(vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y

(vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento 20 biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-pirimidin-4-il}-amina; y

(b) detectar el complejo entre dicho ligando conocido y dicho receptor; y

(c) determinar si se forma menos de dicho complejo en presencia del compuesto de ensayo que en ausencia del compuesto de ensayo; 25

en el que dicha determinación es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP.

44. Uso según la reivindicación 43, en el que dicho procedimiento comprende adicionalmente

(d) poner en contacto un compuesto en presencia del cual se forma menos de 30 dicho complejo en la etapa (c) in vitro con una célula enteroendocrina de vertebrado o una célula capaz de secretar GIP; y

(e) determinar si el compuesto estimula la secreción de GIP de la célula enteroendocrina de vertebrado o de la célula capaz de secretar GIP;

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de estimular la secreción de GIP de la célula enteroendocrina de vertebrado o de la célula capaz de secretar GIP es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP.

45. Uso según la reivindicación 43, en el que dicho procedimiento comprende adicionalmente 5

(d) determinar si el compuesto aumenta el nivel de GIP en un vertebrado midiendo el nivel de GIP en una muestra obtenida de un vertebrado al que se ha administrado anteriormente un compuesto en presencia del cual se forma menos de dicho complejo en la etapa (c);

en el que la capacidad del compuesto de ensayo de aumentar el nivel de GIP en 10 el vertebrado es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP.

46. Uso según la reivindicación 45, en el que el vertebrado es un vertebrado no humano.

47. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 43 a 46, en el que el receptor es recombinante. 15

48. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 43 a 47, en el que la célula hospedadora comprende un vector de expresión, comprendiendo dicho vector de expresión un polinucleótido que codifica el receptor acoplado con proteína G.

49. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 43 a 48, en el que el ligando conocido es un agonista de GPR119. 20

50. Uso según la reivindicación 49, en el que el agonista de GPR119 es un agonista de GPR119 humano.

51. Uso según la reivindicación 49 o la reivindicación 50, en el que dicho agonista de GPR119 es un agonista selectivo de GPR119. 25

52. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 49 a 51, en el que el agonista de GPR119 tiene una CE50 menor que un valor seleccionado del grupo constituido por 10 µM, 1 µM y 100 nM.

53. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 49 a 52, en el que el agonista de GPR119 es una molécula pequeña que tiene un peso molecular menor de 30 aproximadamente 5.000 g/mol.

54. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 43 a 53, en el que el compuesto de ensayo es una molécula pequeña que tiene un peso molecular menor de aproximadamente 5.000 g/mol.

55. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 43 a 54, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2.

56. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 43 a 55, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de la SEQ ID NO: 2. 5

57. Un procedimiento según la reivindicación 17, que comprende antes de la etapa (a) las etapas in vitro adicionales de:

(x) poner en contacto un receptor acoplado con proteína G con un ligando conocido opcionalmente marcado del receptor en presencia o ausencia de un compuesto de ensayo, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una 10 secuencia aminoacídica seleccionada del grupo constituido por:

(i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2;

(ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2;

(iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que es amplificable por la reacción en cadena de la 15 polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO:3 y de la SEQ ID NO:4;

(iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1; 20

(v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2;

(vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y

(vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento 25 biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-primidin-4-il}-amina;

(y) detectar el complejo entre dicho ligando conocido y dicho receptor; y

(z) determinar si se forma menos de dicho complejo en presencia del compuesto de ensayo que en ausencia del compuesto de ensayo; 30

en el que dicha determinación es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP, y en el que el agonista de GPR119 de la etapa (a) es un compuesto de ensayo que se ha determinado en la etapa (z) que es un compuesto en presencia del cual se forma menos de dicho complejo.

58. Un procedimiento según la reivindicación 18, que comprende antes de la etapa (a) las etapas in vitro adicionales de:

(x) poner en contacto un receptor acoplado con proteína G con un ligando conocido opcionalmente marcado del receptor en presencia o ausencia de un compuesto de ensayo, en el que el receptor acoplado con proteína G comprende una 5 secuencia aminoacídica seleccionada del grupo constituido por:

(i) los aminoácidos 1-335 de la SEQ ID NO: 2;

(ii) los aminoácidos 2-335 de la SEQ ID NO: 2;

(iii) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que es amplificable por la reacción en cadena de la 10 polimerasa (PCR) en una muestra de ADN humano usando los cebadores específicos de la SEQ ID NO:3 y de la SEQ ID NO:4;

(iv) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G codificado por un polinucleótido que hibrida en condiciones de alto rigor con el complemento de la SEQ ID NO: 1; 15

(v) la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2;

(vi) la secuencia aminoacídica de una versión constitutivamente activa de un receptor acoplado con proteína G que tiene la SEQ ID NO: 2; y

(vii) un fragmento biológicamente activo de (i) o (ii), en el que dicho fragmento 20 biológicamente activo es capaz de unirse a (2-fluoro-4-metanosulfonil-fenil)-{6-[4-(3-isopropil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-piperidin-1-il]-5-nitro-primidin-4-il}-amina;

(y) detectar el complejo entre dicho ligando conocido y dicho receptor; y

(z) determinar si se forma menos de dicho complejo en presencia del compuesto de ensayo que en ausencia del compuesto de ensayo; 25

en el que dicha determinación es indicativa de que el compuesto de ensayo es un secretagogo de GIP, y en el que el agonista de GPR119 de la etapa (a) es un compuesto de ensayo que se ha determinado en la etapa (z) que es un compuesto en presencia del cual se forma menos de dicho complejo.

59. Un procedimiento según la reivindicación 58, en el que el vertebrado es un 30 vertebrado no humano.

60. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 59, en el que el receptor es recombinante.

61. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 60, en el que la célula hospedadora comprende un vector de expresión, comprendiendo dicho vector de expresión un polinucleótido que codifica el receptor acoplado con proteína G.

62. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 61, en el 5 que el ligando conocido es un agonista de GPR119.

63. El procedimiento de la reivindicación 62, en el que el agonista de GPR119 es un agonista de GPR119 humano.

64. El procedimiento de la reivindicación 62 o la reivindicación 63, en el que dicho agonista de GPR119 es un agonista selectivo. 10

65. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 62 a 64, en el que el agonista de GPR119 tiene una CE50 menor que un valor seleccionado del grupo constituido por 10 µM, 1 µM y 100 nM.

66. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 62 a 65, en el que el agonista de GPR119 es una molécula pequeña que tiene un peso molecular de 15 menos de aproximadamente 5.000 g/mol.

67. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 66, en el que el compuesto de ensayo es una molécula pequeña que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 5.000 g/mol.

68. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 67, en el 20 que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de un receptor acoplado con proteína G que tiene al menos aproximadamente un 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2.

69. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 57 a 68, en el que el receptor comprende la secuencia aminoacídica de la SEQ ID NO: 2. 25