MARCADORES PARA ATEROSCLEROSIS.
Método para el diagnóstico, prognosis o identificación de una predisposición hacia aterosclerosis y la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular,
el método comprendiendo el análisis de una muestra para determinar la frecuencia en porcentaje de al menos dos subpoblaciones de linfocitos T y la comparación de los datos contra datos comparativos y/o de control, donde al menos una de dichas subpoblaciones de linfocitos T es una población de células T CD8 seleccionada de la lista que consiste en CD8+/CD11L+/CD45RA+, CD8+/CD11L+/CD45RO+, CD8+CD11 a+, CD8+CD62L+, CD8+CD11 altoRO+ y CD8+CD38+RO+, o una población de células CD4 T seleccionada de la lista que consiste en CD4+/62L+, CD4+CD49d+, CD4+CD25+, CD4+DRII+, CD4+CD44+ y CD4+CD3+RO+
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2005/002265.
Solicitante: IMMUNOCLIN LTD.
Nacionalidad solicitante: Reino Unido.
Dirección: ROWLANDSON HOUSE, 289-293 BALLARDS LANE LONDON N12 8NP REINO UNIDO.
Inventor/es: CLERICI,MARIO MILANO UNIVERSITY MEDICAL SCHOOL, BRAY,Dorothy,ImmunoClin Limited, TRABATTONI,Daria,Lucia.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 9 de Junio de 2005.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/569H2
- G01N33/68D
Clasificación PCT:
- G01N33/569 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
Clasificación antigua:
- G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania.
PDF original: ES-2361214_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Marcadores para aterosclerosis.
Esta invención se refiere a marcadores para aterosclerosis. Más particularmente la presente invención se refiere a la identificación de varios marcadores encontrados en la sangre y a su uso para ayudar al diagnóstico o prognosis de, o para identificar una predisposición hacia la aterosclerosis y especialmente la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular.
La aterosclerosis es una remodelación patológica de las arterías que es una causa principal de morbilidad y mortalidad en países desarrollados; esta patología es la base subyacente del infarto miocardial, accidente cerebrovascular y enfermedad arterial periférica. La aterosclerosis se puede considerar como una forma inusual de inflamación crónica que ocurre en la pared de la arteria. Varios datos apoyan el papel patogenético o patógeno de la inflamación en la etiología de aterosclerosis; la inflamación es un fenómeno inmunológico. Una de las pruebas de evidencia más convincentes de esta declaración proviene de la observación de que la estría grasa, las lesiones detectables más temprano en la aterosclerosis, contienen células espumosas derivadas de macrófagos que se derivan de monocitos circulatorios. Linfocitos T están también presentes en las placas ateroscleróticas y la mayor parte de estos son células T CD3+CD4+ alfa beta. Tales células representan aproximadamente 2/3 de todas las células T CD3+ en lesiones humanas avanzadas, y segregan IFN gamma, IL-2, TNF alfa y beta que causan la activación vascular de macrófagos, activación vascular e inflamación. IFN gamma se considera ser responsable de la desestabilización de placa reduciendo el tapón fibroso. Células T CD8+ están también presentes en lesiones pero su papel contribuidor en aterosclerosis es menos evidente.
El enrollamiento, adhesión, e infiltración de células inmunológicas (monocitos y linfocitos T CD4) que circulan en la sangre periférica en el endotelio se regula por dos familias más importantes de proteínas expresadas en la superficie de células inmunológicas, y en la superficie de células endoteliales: estas familias de proteínas son selectinas e integrinas. Quimiocinas o citoquinas quimioatrayentes son extremadamente importantes también en el control del tráfico de células y para el reclutamiento de células inmunológicas en sitios de inflamación. Algunas quimiocinas, aquellas que pueden funcionar como mediadores potentes de migración de monocitos y diferenciación de macrófagos, se expresan en lesiones ateroscleróticas humanas. En particular, se considera firmemente que la proteína 1 quimioatrayente de macrófagos (MCP-1) y su receptor específico CCR2 intervienen en los estadios iniciales de la aterogénesis.
Un soporte adicional para el papel patogenético o patógeno de la inflamación en el desarrollo de placas ateroscleróticas proviene de la observación hecha por los presentes inventores de que las citoquinas diferentes preferentemente desencadenan el desarrollo de placas ateroscleróticas (por ejemplo, citoquinas tipo TH1 son "malas citoquinas" dentro de este escenario biológico, es decir, desencadenan o se implican en la activación del desarrollo de placas ateroscleróticas). Esto se vuelve más claro cuando se considera que las citoquinas TH1 son citoquinas inflamatorias prototípicas. Las citoquinas y otras proteínas inmunológicas presentes en las lesiones ateroscleróticas no son sólo producidas por linfocitos T CD4; de hecho, factores de crecimiento de fibroblasto (FGFs) y factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF) son factores de crecimiento derivados de macrófagos que se ha descubierto que tienen efectos significantes en la patología de aterosclerosis y que son proteínas derivadas por macrófagos. Mientras sigue aumentando el conocimiento científico de la composición de la placa aterosclerótica y la aportación de células encontradas en lesiones, un diagnóstico fácil y fiable de aterosclerosis, particularmente en ausencia de síntomas clínicos sigue siendo un desafío como la medición y detección de cambios en poblaciones celulares en el sitio de lesión no es viable en la práctica clínica. Consecuentemente hay una necesidad de marcadores predictivos y fáciles de valorar que podrían ser detectados en muestras de sangre periféricas.
Los presentes inventores han encontrado que la inmunopatología de placas ateroscleróticas y alteraciones de los factores anteriormente descritos, y sus receptores específicos, suponen cambios de características de poblaciones celulares múltiples que se pueden medir en muestras de sangre y en biopsias vasculares de sangre periférica. Las medidas usadas pueden ser: (porcentajes) de concentraciones de células, expresión de marcadores de superficie celular, concentraciones intracelulares de citoquinas, quimiocinas o integrinas, los cuales solos o junto con otros parámetros son útiles para ayudar al diagnóstico o prognosis de, o para identificar una predisposición hacia aterosclerosis y especialmente la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular.
Es un objeto de la presente invención proporcionar un método para el diagnóstico, prognosis o identificación de una predisposición hacia aterosclerosis que elimina o reduce la necesidad de técnicas invasivas tal como la eliminación de una placa para identificación o para la necesidad de usar técnicas invasivas de representación por imágenes ópticas.
Por consiguiente, la presente invención proporciona un método para el diagnóstico, prognosis o identificación de una predisposición hacia aterosclerosis y la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular, el método comprendiendo el análisis de una muestra para determinar la frecuencia de porcentajes de múltiples subpoblaciones de linfocitos T y comparar los datos obtenidos con datos comparativos y/o de control, donde al menos una de dichas sub-poblaciones es una sub-población de linfocitos T CD8+ seleccionados de los (fenotipos) de subpoblaciones de CD8+/CD11L+/CD45RA+, CD8+/CD11L +/CD45RO+. CD8+CD11 a+, CD8+CD62L+ y CD8+CD38+RO+, o una sub-población de linfocitos T CD4+ seleccionados de los siguientes fenotipos: CD4+CD25+, CD4+DRII+, CD4+CD44+, CD4+CD62L+ y CD4+CD49d+.
Según se utiliza en este caso "múltiple" significa al menos dos.
Preferiblemente, los porcentajes o proporciones de poblaciones de célula específicas son determinados. Convenientemente, la muestra es una muestra de sangre o una biopsia.
En una forma de realización preferida, el método comprende analizar una muestra para determinar la frecuencia de porcentajes de una o más subpoblaciones de linfocitos T específicos y comparar los datos obtenidos contra datos comparativos y/o de control.
Preferiblemente el método comprende determinar la frecuencia de porcentaje de una o más subpoblaciones de linfocitos T seleccionados de los (fenotipos) de subpoblaciones catalogados en los experimentos 1 y 2 descritos aquí.
En particular, el método comprende la determinación de adhesión, activación, y enrollamiento de marcadores expresados en la superficie de linfocitos T CD8+. Como estas células son las células efectoras del brazo celular de inmunidad, y como se sabe que su activación puede tener un impacto negativo en el desarrollo de enfermedad por medio de la destrucción de células diana (p. ej. la destrucción de células hepáticas que se infectan por virus de hepatitis se media por células T CD8 y se une con el empeoramiento de la enfermedad) o por medio de la inducción de una condición inflamatoria crónica, los inventores creen que centrarse en estas células permite una determinación más precisa de la predisposición hacia aterosclerosis y la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular.
Adicionalmente, el método comprende determinar la frecuencia de porcentaje simultánea de subpoblaciones múltiples de linfocitos. Esta propuesta proviene del hecho de que la predisposición hacia aterosclerosis y la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular es multi-factorial y por tanto será imposible predecir con precisión tal predisposición con el análisis de un único marcador.
En una forma de realización preferida, el método comprende determinar la frecuencia de porcentaje de múltiples subpoblaciones de linfocitos T donde al menos una de dichas subpoblaciones es una sub-población de linfocitos T CD8+ y al menos otra de dichas subpoblaciones es una sub-población... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Método para el diagnóstico, prognosis o identificación de una predisposición hacia aterosclerosis y la susceptibilidad al desarrollo de placas ateroscleróticas y/o obstrucción vascular, el método comprendiendo el análisis de una muestra para determinar la frecuencia en porcentaje de al menos dos subpoblaciones de linfocitos T y la comparación de los datos contra datos comparativos y/o de control, donde al menos una de dichas subpoblaciones de linfocitos T es una población de células T CD8 seleccionada de la lista que consiste en CD8+/CD11L+/CD45RA+, CD8+/CD11L+/CD45RO+, CD8+CD11 a+, CD8+CD62L+, CD8+CD11 altoRO+ y CD8+CD38+RO+, o una población de células CD4 T seleccionada de la lista que consiste en CD4+/62L+, CD4+CD49d+, CD4+CD25+, CD4+DRII+, CD4+CD44+ y CD4+CD3+RO+.
2. Método según la reivindicación 1, donde al menos una de dichas subpoblaciones de linfocitos T es una población de células T CD8 seleccionada de la lista que consiste en CD8+/CD11L+/CD45RA+, CD8+/CD11L+/CD45RO+, CD8+CD11 a+, CD8+CD62L+, CD8+CD11 altoRO+ y CD8+CD38+RO+ y al menos otra de dichas subpoblaciones de linfocitos T es una población de células T CD4 seleccionada de la lista que consiste en CD4+/62L+, CD4+CD49d, CD4+CD25+, CD4+DRII+, CD4+CD44+y CD4+CD3+RO+.
3. Método según la reivindicación 1 o reivindicación 2, donde la muestra es una muestra de sangre o una biopsia.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes que además comprende determinar la concentración de uno o más factores solubles intracelularmente, en plasma o en suero y comparar los datos obtenidos contra datos comparativos y de control.
5. Método según la reivindicación 4, donde dicho factor soluble es seleccionado del grupo que consiste en citoquinas y quimiocinas.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes que además comprende uno o más de los pasos adicionales (a) y (b):
y comparar los datos obtenidos contra datos comparativos y de control.
7. Método según la reivindicación 5 o 6, en el que la citoquina es una o más de interleuquina-1 (o), interleuquina-2, interleuquina-3, interleuquina-4, interleuquina-5, interleuquina-6, interleuquina-7, interleuquina-8, interleuquina-9; interleuquina-10; interleuquina-11; interleuquina-12; interleuquina-13; interleuquina-14; interleuquina-15; interleuquina-16; interleuquina-17, interferon-α, interferon-β, interferon-γ, factores de necrosis tumoral tal como TNF-α y TNF-β (factores de crecimiento de fibroblastos (FGF), factores de crecimiento derivados de plaquetas (PDGF), factores estimuladores de colonias tales como G-CSF, GM-CSF, M-LSF, factores de crecimiento transformantes tal como TGF-β.
8. Método según la reivindicación 7, en el que las citoquinas son TNF-α, IL-12, interferon-α, FGF, y PDGF.
9. Método según la reivindicación 5 o 6, en el que las quimiocinas incluyen quimiocinas CC y CXC.
10. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el método además comprende el paso adicional de determinación de la concentración de proteína 1 quimioatrayente de macrófagos (MCP-1) en una muestra del mismo paciente.
11. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el método además comprende el paso adicional de determinar los cambios estadísticos en parámetros inmunológicos.
12. Método según la reivindicación 11, en el que el parámetro inmunológico es las proporciones de linfocitos.
13. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el método además comprende el paso de evaluación del grosor de la íntima vascular para determinar si hay grosor que puede ser indicativo de la presencia o probabilidad de aterosclerosis o placas ateroscleróticas.
14. Método según la reivindicación 13, en el que la evaluación del espesor de la íntima vascular es por ultrasonografía.
15. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los datos son interpretados usando el software informático y representación de imágenes gráfica.
16. Método según la reivindicación 3, en el que análisis de la muestra de sangre comprende marcar toda la sangre en un único tubo.
17. Método según la reivindicación 16, en el que el análisis de la muestra de sangre comprende los otros pasos de lisar glóbulos rojos, y leer usando citometría de flujo.
18. Método según la reivindicación 16, en el que análisis de la muestra de sangre comprende los otros pasos de añadir las células marcadas a una fase sólida, y usar un analizador de imágenes para contar células.
19. Método según la reivindicación 17 o 18, en el que el software informático se utiliza para comparar resultados únicos de los pacientes con una base de datos de resultados saludables de los individuos y con una base de datos de datos de estadios variables de la enfermedad para facilitar una predicción precisa de la formación de placas.
Patentes similares o relacionadas:
SISTEMAS Y PROCEDIMIENTO PARA IDENTIFICAR RIESGO DE TRASPLANTE DE ÓRGANOS, del 17 de Enero de 2012, de RENOVAR, INC: Procedimiento de detección de marcadores de rechazo, que comprende la detección de la presencia de un ligando CXCR3, en donde dicho ligando CXCR3 […]
EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE LA CITOCINA EN CÁNCER HUMANO, del 29 de Diciembre de 2011, de APOGENIX GMBH: Un método in vitro para diagnosticar un tipo de cáncer, que comprende las etapas: (a) proporcionar una muestra procedente de un tumor epitelial que comprende células tumorales, […]
PROTEÍNAS DE UNIÓN TRIMÉRICAS PARA CITOCINAS TRIMÉRICAS, del 8 de Noviembre de 2011, de ANAPHORE, INC: Un polipéptido trimérico que comprende tres monómeros, comprendiendo cada uno de dichos monómeros un miembro de unión específico que puede unirse […]
DETECCIÓN Y PREDICCIÓN DE PREECLAMPSIA, del 31 de Agosto de 2011, de PERKINELMER LAS, INC.: Método de predicción de preeclampsia (PE) que comprende determinar en una muestra materna obtenida de una paciente que se encuentra entre las 10 y 38 semanas de gestación, […]
PROCEDIMIENTOS PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES AUTOINMUNITARIAS EN UN SUJETO Y EN ENSAYOS DE DIAGNÓSTICO IN VITRO, del 16 de Agosto de 2011, de BAYLOR RESEARCH INSTITUTE: Uso de (a) al menos un antagonista de interferón que reduce la actividad de un interferón de tipo I, y (b) al menos un antagonista del ligando Flt3 (Flt3L) que reduce […]
PROCEDIMIENTO DE EVALUACIÓN DE LA EFICACIA ADCC MEDIADA POR EL CD16 DE ANTICUERPOS MONOCLONALES O POLICLONALES, del 8 de Julio de 2011, de LFB BIOTECHNOLOGIES: Procedimiento in vitro para evaluar la eficacia ADCC mediada por el CD16 de un anticuerpo monoclonal o policlonal, que comprende la puesta en […]
ANTICUERPOS INJERTADOS CON CDR HUMANOS Y FRAGMENTOS DE ANTÍCUERPO DE LOS MISMOS, del 5 de Abril de 2011, de KYOWA HAKKO KIRIN CO., LTD.: Anticuerpo humano injertado con CDR que reacciona específicamente con una región extracelular del receptor 4 humano de la quimiocina CC (CCR4) pero no reacciona con una plaqueta […]
ENSAYO PARA IDENTIFICAR CÉLULAS PRODUCTORAS DE ANTICUERPOS, del 13 de Febrero de 2012, de UCB PHARMA, S.A.: Un ensayo homogéneo in vitro para identificar una célula productora de anticuerpos que produce un anticuerpo que se une a un antígeno seleccionado que comprende: a) […]