Uso de (a) al menos un antagonista de interferón que reduce la actividad de un interferón de tipo I,

y (b) al menos un antagonista del ligando Flt3 (Flt3L) que reduce la actividad de un Flt3L, para la preparación de un medicamento que contiene el al menos un antagonista de interferón y el al menos un antagonista de ligando de Flt3 (Flt3L) en una cantidad efectiva para el tratamiento del lupus eritematoso sistémico (LES) en un sujeto que lo necesite, en el que el al menos una antagonista de interferón se selecciona del grupo constituido por anticuerpos monoclonales anti-IFN-α y sus fragmentos de unión a antígeno, y en el que el al menos un antagonista de ligando de Flt3 se selecciona del grupo constituido por anticuerpos monoclonales anti-Flt3L y sus fragmentos de unión a antígeno

Campo de la invención

La presente invención se refiere al tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y ensayos de diagnóstico relacionados con enfermedades autoinmunitarias.

Antecedentes de la invención

Las enfermedades autoinmunitarias son enfermedades terribles e incapacitantes, y aparecen cuando el propio sistema inmunológico de un paciente actúa contra sí mismo atacando al propio organismo o a los propios tejidos del paciente. Un ejemplo de una enfermedad autoinmunitaria es el lupus eritematoso sistémico (LES), que se caracteriza por una afectación multiorgánica y anomalías inmunológicas que incluyen la presencia de linfocitos T y linfocitos B autorreactivos. Los autoanticuerpos contra el nucleosoma parecen ser un rasgo característico del LES y sugieren que una manipulación no adecuada de las células que mueren (apoptóticas) puede constituir un acontecimiento patogénico clave en el desarrollo del LES. El LES es el resultado de la alteración de la regulación de las ramas tanto humoral como celular del sistema inmunológico, lo que indica que la alteración inicial puede ser al nivel de las células que reclutan y controlan los efectores inmunitarios, a saber, las células dendríticas (CD).

Las células dendríticas (CD) son células presentadoras de antígeno especializadas que producen respuestas inmunitarias mediadas por linfocitos T (Steinman, R. M. (1991) Ann. Rev. Immunology, Vol. 9, págs. 271-296 y Banchereau y col. (2000) Ann. Rev. Immunol. 18:767). Las CD inducen y sustentan respuestas inmunitarias y se ha demostrado que capturan las células moribundas y presentan sus antígenos a los linfocitos T CD4+, que pueden activar a continuación otros efectores inmunitarios, incluidos los linfocitos B. Las CD progenitoras de la médula ósea dan lugar a la circulación de precursores que se dirigen al tejido al que pertenecen como células no maduras con una elevada capacidad fagocítica. Después del daño tisular, las CD capturan antígenos (Ag) y, posteriormente, migran a los órganos linfáticos donde seleccionan linfocitos T específicos de antígenos inusuales, iniciando así las respuestas inmunitarias. Las CD presentan antígenos a los linfocitos T CD4+, que a su vez regulan los efectores inmunitarios, incluyendo los específicos de antígeno tales como los linfocitos T CD8+ y los linfocitos B, así como los inespecíficos como macrófagos, eosinófilos y células NK. Las CD también pueden activar directamente los linfocitos B e inducir su diferenciación a células plasmáticas in vitro.

En la sangre circulan tres subgrupos de precursores de CD ("preCD"): (1) monocitos CD14+, (2) preCD mieloides CD11c+ y (3) preCD plasmacitoides (linfoides) CD11c-. Los monocitos pueden diferenciarse en células que muestran características de CD no maduras o macrófagos (MO). Las CD no maduras llegan a ser CD maduras tras el tratamiento con CD40L y/o LPS o cuando se cultivan con una combinación de citocinas, que incluyen TNF, IIL-1 e IL

6. Las preCD mieloides CDC11c+ dan lugar a CD intersticiales (CDint), células de Langerhans (CL) o MΦ en función del entorno local de las citocinas.

Los precursores de CD linfoides CD11c IL-3Rα+ son una fuente principal de interferón alfa (IFN-α). Los niveles elevados de IFN-α se encuentran frecuentemente en suero de lupus (Kim y col., Clin. Exp. Immunol. 70:562-269, 1987). Además, el tratamiento con IFN-α induce frecuentemente la aparición de autoanticuerpos y, finalmente, el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias, incluido el LES (Ronnblum y col., J. Intern. Med. 227:207-210, 1990). Se ha informado de anticuerpos anti-IFN-α en pacientes de LES (Suit y col., Clin. Exp. Rheumatol. 1:133-135).

Se ha informado de que las CD plasmacitoides producen IFN-α, que a su vez afecta a la diferenciación de las CD mieloides y al crecimiento y activación de los linfocitos B. Spits y col. (J Exp Med 192(12): 1775-84, 2000) y Blom y col. (J Exp Med 192 (12): 1785-96. 2000) informa de que las CD plasmacitoides CD11c-tienen origen linfoide en humanos. Siegal y col., (Science 284: 1835, 1999) informa de que las CD linfoides (CD plasmacitoides) producen grandes cantidades de IFN-α cuando son expuestas al virus herpes simple inactivado. Cella y col., (Nature Medicine 5(8):868-70, 1999) informa de que las CD linfoides (CD plasmacitoides) producen grandes cantidades de IFN-α en respuesta al virus de la gripe, así como unión a CD40.

Los autoanticuerpos (autoAc) en el LES pueden clasificarse en tres categorías principales: (1) anticuerpos antinucleares y anti-ADN de doble hebra; (2) autoAc dirigidos contra la superficie de células endoteliales y plaquetas (antifosfolípidos/glicoproteína β2); y (3) autoAc dirigidos contra moléculas de la superficie de células hematopoyéticas (véase, por ejemplo, revisión de Cabral y Alarcón-Segovia (1998) Curr. Opin. Rheumatol. 10:409). Además del daño tisular directo causado por las interacciones antígeno-anticuerpo celulares y/o tisulares, muchos de los síntomas de las enfermedades son el resultado del daño indirecto a través del depósito de inmunocomplejos en los tejidos. Se ha demostrado que este mecanismo es responsable de algunas formas de LES, nefritis, artritis y vasculitis (Lahita, R.G. 1999. Systemic Lupus Erythematosus. Academic Press; Kammer, G.M., y G.C. Tsokos. 1999. Lupus, Humana Press). Los fallos en la eliminación de los inmunocomplejos, incluida la disfunción en la inclusión del receptor de Fc ("FcR") y el receptor de C3b ("C3bR"), así como defectos genéticos en proteínas del complemento y proteína C reactiva (todos ellos actores esenciales en la eliminación de complejos anti-ADN/nucleosoma) pueden contribuir al desarrollo del LES (Lahita, R.G. 1999. Academic Press; Kammer, G.M., y G.C. Tsokos. 1999 Humana Press). Los linfocitos B desempeñan un papel principal en la patogenia del LES, ya que son responsables de la producción de autoanticuerpos e hipergammaglobulinemia.

Hooks y col. (N. Engl. J. Med. 301:5, 1979) describen la presencia de interferón inmunitario circulante en pacientes con enfermedades autoinmunitarias, incluido el LES. Kim y col. divulgaron que los niveles de IFN-α se correspondían con el índice de actividad clínica. Preble y col. (J. Exp. Med. 157:214, 1983) y von Wussow y col. (Arthritis Rheum. 32:914, 1989) divulgan que se encuentran niveles elevados de 2-5A sintetasa y proteína MX, dos proteínas inducidas específicamente por IFN-α, en las células mononucleares tanto de suero positivo para IFN como de suero negativo para IFN de pacientes de LES. Vallin y col. (J. Immunol. 163:6306 1999) divulgan que el factor de inducción de IFN-α actúa sobre leucocitos con características de CD no maduras. Batteux y col. (Eur. Cytokine Netw. 10: 509, 1999) divulgan que la inducción de la producción de IFN-α por suero de LES depende de FcγRII (CD32).

Una complicación de la terapia con IFN-α es la inducción de afecciones autoinmunitarias (en aproximadamente del 4% al 19% de los casos), siendo la más frecuente la disfunción tiroidea (Ehrenstein y col., Arthritis Rheum. 36:279, 1993; Okanoue y col., J. Hepatol. 25:283, 1996; Ronnblom y col., Ann. Intern. Med. 115:178, 1991; Kalkner y col., Qjm. 91:393, 1998). De hecho, Schilling y col. (Cancer 68:1536, 1991) divulgan que la terapia con IFN-α también puede inducir LES con una frecuencia del 0,15% al 0,7%. Todos los casos se asocian con la inducción o el aumento notable en las titulaciones de anticuerpos antinucleares y anticuerpos antiADN.

La diabetes de tipo I es otra enfermedad autoinmunitaria en la que el IFN-α juega un papel etiopatogénico importante. Foulis y col. (Lancet 2:1423, 1987) y Huang y col. (Diabetes 44:658, 1995) divulga una fuerte correlación entre la expresión de IFN-α por los islotes pancreáticos y el desarrollo de diabetes autoinmune en humanos. Además, Chakrabarti y col. (J. Immunol. 157:522, 1996) divulga que la expresión de IFN-α por linfocitos B de los islotes de células de Langerhans del páncreas provoca diabetes en un modelo de ratón transgénico. Adicionalmente, Fabres y col. (Lancet 340:548, 1992) y Jerzy y col. (Lancet 343: 1167, 1994) divulga que la terapia con IFN-α puede inducir diabetes de tipo I en seres humanos.

La tirosina cinasa 3 de tipo FMS ("Flt3") es un miembro de la familia de receptores tirosina cinasa de tipo III que también incluye KIT (c-kit RTK), FMS (M-CSF RTK) y el receptor de factor decrecimiento derivado de plaquetas (PDGF). De forma similar a los ligandos para los receptores KIT y FMS, factor... [Seguir leyendo]

1. Uso de (a) al menos un antagonista de interferón que reduce la actividad de un interferón de tipo I, y (b) al menos un antagonista del ligando Flt3 (Flt3L) que reduce la actividad de un Flt3L, para la preparación de un medicamento que contiene el al menos un antagonista de interferón y el al menos un antagonista de ligando de Flt3 (Flt3L) en una cantidad efectiva para el tratamiento del lupus eritematoso sistémico (LES) en un sujeto que lo necesite, en el que el al menos una antagonista de interferón se selecciona del grupo constituido por anticuerpos monoclonales anti-IFN-α y sus fragmentos de unión a antígeno, y en el que el al menos un antagonista de ligando de Flt3 se selecciona del grupo constituido por anticuerpos monoclonales anti-Flt3L y sus fragmentos de unión a antígeno.

2. El uso según la reivindicación 1, en el que el sujeto es un mamífero seleccionado de un ser humano, un primate, una rata, un perro, un gato o un ratón.

3. El uso según la reivindicación 1, en el que el antagonista de interferón y el antagonista de Flt3L son parte de una molécula.

4. El uso según la reivindicación 1, en el que el antagonista de interferón está presente en el medicamento en una cantidad que comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 veces el exceso molar de interferón.

5. El uso según la reivindicación 1, en el que el antagonista de Flt3L está presente en el medicamento en una cantidad que comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 veces el exceso molar de Flt3L.

6. El uso según la reivindicación 1, en el que el tratamiento se efectúa mediante inyección intralesional, intraperitoneal, intramuscular o intravenosa, infusión, administración mediada por liposomas, o administración tópica, nasal, ocular u ótica del medicamento.

7. El uso según la reivindicación 1, en el que el antagonista de interferón reduce uno o más de los siguientes:

(i) unión de un interferón de tipo I con su receptor;

(ii) transducción de señal dependiente de interferón;

(iii) niveles séricos de interferón;

(iv) secreción de interferón por células medida por un ensayo de unión a receptor de interferón;

(v) biodisponibilidad de interferón en suero medida por un ensayo de unión a receptor de interferón; o

(vi) desarrollo de células que producen interferón de tipo I en el sujeto medido por un ensayo de diferenciación de monocitos.

8. Una composición terapéutica para inhibir la diferenciación de monocitos a células dendríticas capaces de presentar antígenos, que comprende:

(a) al menos un antagonista de interferón que reduce la actividad de interferón de tipo I, en el que el al menos un antagonista de interferón se selecciona del grupo constituido por anticuerpos monoclonales anti-IFN-α y sus fragmentos de unión a antígeno; y

(b) al menos un antagonista de ligando Flt3 (Flt3L) que reduce la actividad de Flt3L, en el que el al menos un antagonista de ligando Flt3 se selecciona del grupo constituido por anticuerpos monoclonales anti-Flt3L y sus fragmentos de unión a antígeno.

9. La composición según la reivindicación 8, en la que la composición comprende además un vehículo.

10. La composición según la reivindicación 8, en la que el antagonista de interferón y el antagonista de Flt3L son parte de una molécula.

11. La composición según la reivindicación 8, en la que la composición comprende dos o más antagonistas de interferón y un antagonista de Flt3L.

12. La composición según la reivindicación 11, en la que la composición comprende un anticuerpo anti-IFNα, un anticuerpo anti-Flt3L y TNF.

13. Un ensayo in vitro para determinar el riesgo de un sujeto de desarrollar lupus eritematoso sistémico (LES), que comprende:

(a) cuantificar el IFN-α y el ligando Flt3 (Flt3L) en la muestra de suero obtenida de dicho sujeto; y

(b) comparar la cantidad de IFN-α y Flt3L con las cantidades de IFN-α y Flt3L en suero de sujetos con lupus eritematoso sistémico (LES), determinando así el riesgo del sujeto de desarrollar lupus eritematoso sistémico (LES).

14. El ensayo según la reivindicación 13, en el que el riesgo de desarrollar lupus eritematoso sistémico (LES) aparece cuando las cantidades de IFN-α y Flt3L están dentro de un intervalo del 30% de esas cantidades para sujetos con una enfermedad autoinmunitaria.

15. El ensayo según la reivindicación 14, en el que dicho riesgo aumenta cuando dicho intervalo es de aproximadamente el 20%.

16. El ensayo según la reivindicación 13, en el que dicha etapa de comparación (b) se hace entre sujetos de la misma edad.

17. Un kit para determinar el riego de un sujeto de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria, o para controlar el estado de una enfermedad autoinmunitaria en un sujeto, que comprende una composición que se une específicamente a Flt3L y a IFN-α en una cantidad efectiva para detectar Flt3L e IFN-α en una muestra biológica de un sujeto, en el que la composición comprende un anticuerpo monoclonal que se une a Flt3L y un anticuerpo monoclonal que se une a IFN-α.

18. El kit según la reivindicación 17, en el que el kit comprende además uno o más reactivos para detectar cantidades de la composición unida a una o más muestras.

19. El kit según la reivindicación 17, en el que la composición está marcada con un marcador detectable.

20. El kit según la reivindicación 19, en el que el marcador detectable se selecciona del grupo constituido por un marcador fluorescente, un marcador radioactivo, un marcador enzimático, un marcador colorimétrico, un marcador quimioluminiscente y cualquiera de sus combinaciones.

21. Uso de un antagonista de interferón para la preparación de un medicamento que contiene el antagonista de interferón, siendo el antagonista de interferón uno o más anticuerpos monoclonales humanizados o humanos antiIFNα o sus fragmentos de unión a antígeno, en una cantidad efectiva para el tratamiento de lupus eritematoso sistémico (LES) en un sujeto que lo necesite, en el que el medicamento está constituido por (1) el antagonista de interferón y (2) un diluyente, un conservante, un solubilizante, un emulsionante, un adyuvante, un vehículo, un tampón, un aditivo farmacéutico, un detergente, un antioxidante, un agente voluminizador, un modificador de la tonicidad, un agente aromatizante, un lubricante, un agente de suspensión, una carga, un deslizante, un adyuvante de compresión, un aglutinante, un agente disgregante de comprimidos, un material de encapsulación, un edulcorante, un agente espesante, un colorante, un regulador de la viscosidad, un estabilizante, un regulador osmótico, un propulsor farmacéuticamente aceptable, un saborizante, un pigmento, un revestimiento, o una combinación de cualquiera de ellos.

22. El uso según la reivindicación 21, en el que el antagonista de interferón está presente en el medicamento en una cantidad que comprende desde aproximadamente 1 a aproximadamente 10 veces el exceso molar de interferón.

23. El uso según la reivindicación 21, en el que el antagonista de interferón reduce uno o más de los siguientes:

(i) unión de un interferón de tipo I con su receptor;

(ii) transducción de señal dependiente de interferón;

(iii) niveles séricos de interferón;

(iv) secreción de interferón por células medida por un ensayo de unión a receptor de interferón;

(v) biodisponibilidad de interferón en suero medida por un ensayo de unión a receptor de interferón;

(vi) biodisponibilidad de interferón en suero medida por un ensayo de diferenciación de monocitos; o

(vi) desarrollo de células que producen interferón de tipo I en el sujeto medido por un ensayo de diferenciación de monocitos.

24. Uso de un antagonista de Flt3L seleccionado del grupo constituido por anticuerpos monoclonales antiFlt3L y sus fragmentos de unión a antígeno, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de lupus eritematoso sistémico (LES) en un sujeto que lo necesite, en el que dicho antagonista de Flt3L reduce la diferenciación de monocitos a células dendríticas, tratando así el lupus eritematoso sistémico (LES).

25. El uso según la reivindicación 24, en el que el antagonista de Flt3l reduce la diferenciación de células

madre hematopoyéticas a células productoras de interferón de tipo I.

26. El uso según la reivindicación 25, en el que las células productoras de interferón de tipo I comprenden células dendríticas plamacitoides.

27. El uso según la reivindicación 24, en el que el antagonista de Flt3L está presente en el medicamento en 5 una cantidad que comprende desde aproximadamente 1 a aproximadamente 10 veces el exceso molar de Flt3L

o de receptor de Flt3L.

28. El uso según la reivindicación 21, en el que el antagonista de interferón es un anticuerpo humano antiIFN-α o uno de sus fragmentos de unión a antígeno.

29. El uso según la reivindicación 21, en el que el antagonista de interferón es un anticuerpo monoclonal 10 anti-IFN-α.