LIGANDO MONOVALENTE DEL RECEPTOR FCALFARI COMO UN AGENTE ANTIINFLAMATORIO.

Uso de un fragmento de anticuerpo monovalente dirigido frente al dominio EC2 del receptor Fcα

RI, como principio activo antiinflamatorio para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad antiinflamatoria

Ligando monovalente del receptor FcRI como un agente antiinflamatorio

La invención se refiere al uso de un ligando monovalente del receptor FcRI de IgA como un agente antiinflamatorio.

La inmunoglobulina A (IgA) es el isotipo Ig más heterogéneo en los seres humanos, existiendo en múltiples formas moleculares, tales como IgA monomérica, polimérica o secretora; comprende dos subclases IgA1 e IgA2.

En suero, la IgA existe principalmente en forma monomérica, con un menor porcentaje de IgA polimérica (pIgA).

En las secreciones de las mucosas (saliva, lágrimas, calostro, fluidos gastrointestinales, secreción nasal bronquial y orina), la IgA se produce como dímeros, unida por un polipéptido denominado cadena J. La IgA dimérica se una al receptor Ig polimérico asociado con membranas (pIgR), y el complejo resultante se transporta desde el lado baso-lateral al apical/luminal del epitelio mucoso. Durante este transporte, el IgA unido se libera por escisión proteolítica a partir del pIgR; sin embargo, una porción del pIgR, el componente secretor, permanece asociado con la IgA dimérica, formando en conjunto IgA secretora (SIgA).

La SIgA tiene una función principal en el sistema inmune innato evitando la penetración de microorganismos y proteínas extrañas en las superficies mucosas. También neutraliza toxinas y organismos infecciosos.

Considerando que la función de la IgA secretora se establece en la inmunología de las mucosas, la función de los anticuerpos IgA séricos en su mayor parte desconocida. Aunque IgA es el segundo isotipo Ig más abundante en suero, normalmente no está implicado en las respuestas inmunes humorales y no activa el complemento. La IgA sérica monomérica tiene actividad antiinflamatoria y es capaz de regular de forma decreciente funciones tales como fagocitosis inducida por IgG, actividad bacteriana, estallido oxidativo y liberación de citoquinas. Por el contrario, la IgA polimérica y los complejos inmunes que contienen IgA (IC) pueden desencadenar eficazmente funciones inmuno efectoras en los leucocitos de la sangre a través de los receptores Fc de IgA.

Los receptores para la región Fc de inmunoglobulinas (FcR) juegan un papel importante en la unión entre respuestas humorales y celulares. Se han descrito FcR para las cinco clases de anticuerpos humanos.

La familia de receptores Fc de IgA humana (FcR) comprende varios miembros (para una revisión, consúltese MONTEIRO y VAN DE WINKEL, Annu. Rev. Immunol. 21: 177-204, 2003), pero solo se ha identificado FcRI (o CD89), un receptor específico para la región Fc de IgA, en las células mieloides de la sangre (MONTEIRO y col., J. Exp. Med. 171: 597-613,1990; MALISZEWSKI y col., J. Exp. Med.172: 1665-1672, 1990). Se expresa FcRI en monocitos/macrófagos, células dendríticas, células de Kupffer, neutrófilos y eosinófilos y se unen tanto a IgA1 como a IgA2 (CONLEY y DELACROIX, Ann. Int. Med. 106: 892-899, 1987; KERR, Annu. Rev. Immunol. 12: 6384, 1994) con baja afinidad (Ka  106 M-1) (MONTEIRO y VAN DE WINKEL, 2003, mencionado anteriormente).

FcRI es un miembro de la superfamilia de genes Ig. Comprende dos dominios extracelulares del tipo Ig (EC1 y EC2), una región transmembrana y una cola citoplasmática que carece de motivos de señalización reconocidos. Las estructuras cristalinas de FcRI humana revelan que los dos dominios del tipo Ig se orientan en ángulos derechos entre sí y que son necesarias dos moléculas FcRI para la unión de una molécula de IgA (HERR y col., J. Mol. Biol. 327: 645-657, 2003). El sitio de unión IgA se localiza en el dominio EC1 distal a la membrana. Se han generado anticuerpos monoclonales (mAb) anti-FcRI de ratón y humanos (MONTEIRO y col., J. Immunol. 148: 1764-1770, 1992; SHEN y col., J. Immunol. 143, 4117-4122, 1989; documento PCT WO 91/05805; documento PCT WO 02/064634), y se ha demostrado que los anticuerpos monoclonales que se unen en el dominio EC1 de FcRI bloquean la unión IgA, mientras que los que se unen a EC2 no lo hacen.

Debido a la constante de asociación y disociación moderadamente rápida de la reacción que une FcRI:IgA, la unión a la IgA monomérica es transitoria, mientras que los complejos inmunes de la IgA y la IgA polimérica se unen con una avidez de crecimiento respectivamente debido a un descenso en la constante de disociación (HERR y col., 2003, mencionado anteriormente; WINES, J. Immunol. 162: 2146-2153, 1999).

Se ha indicado la implicación de FcRI en la capacidad de IgA para desencadenar respuestas inmunes, tales como fagocitosis, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), generación de superóxido, producto de citoquinas, presentación de antígenos y liberación de mediadores inflamatorios (para una revisión, véase MONTEIRO y VAN DE WINKEL, 2003, mencionado anteriormente). Se ha propuesto usar anticuerpos anti-FcRI, tales como My 43 (documento PCT WO 91/05805), o los anticuerpos monoclonales humanos descritos en el documento PCT WO 02/064634, para activar estas respuestas inmunes mediadas por FcRI.

También se ha propuesto usar anticuerpos anti-FcR, incluyendo anticuerpos anti-FcRI, como vectores para dirigir selectivamente los principios activos, tales como compuestos citotóxicos, a células que expresan receptores Fc (documento PCT WO 99/41285).

La patente de US 6018031 describe anticuerpos bifuncionales que contienen la región de unión de un anticuerpo anti-FcR y la región de unión de un anticuerpo dirigido contra una célula diana. Estos anticuerpos bifuncionales pueden unirse, por un lado, a dicha célula diana y, por otro lado, a células efectoras que expresan FcR. Su unión a FcR desencadena la actividad mediada por FcR de la célula efectora, dando como resultado la destrucción de la célula diana unida a la misma molécula de anticuerpo bifuncional.

La señalización a través de FcRI depende de la asociación de FcRI con la subunidad de cadena FcR, formando el trímero FcRI/. La cadena FcR contiene un motivo de activación basado en inmunorreceptores de tirosina (ITAM) en su cola citoplasmática (PFEFFERKORN e YEAMAN, J. Immunol. 153: 3228-3236, 1994; LAUNAY y col., J. Biol. Chem. 274: 7216-7225,1999) que permite el reclutamiento de efectores de señalización cruciales (KINET, Annu. Rev. Immunol. 17: 931-972, 1999). Puede expresarse FcRI con o sin asociación física con la subunidad FcR. El FcRI sin  internaliza y recicla IgA para la superficie celular, mientras que FcI asociado con FcR se dirige refiere al IgA complejado a lisosomas (LAUNAY y col., 1999, mencionado anteriormente; SHEN y col., Blood 97: 205-213, 2001). Hasta ahora no se ha identificado una función celular de FcRI sin agregado distinta de la del reciclaje de IgA. Se requieren agregaciones del receptor para la activación mediada por FcRI de las funciones celulares diana, tales como liberación de citoquina y presentación de antígenos (SHEN y col., 2001, mencionado anteriormente; PATRY y col., Immunol. 86: 1-5, 1995; GEISSMANN y col., J. Immunol: 166: 346-352, 2001).

Mientras que la implicación de FcRI en la inflamación mediada por IgA es bien reconocida, hasta ahora no se ha elucidado la base molecular que sustenta la capacidad antiinflamatoria de IgA. Aunque se ha indicado (WILTON, Clin. Exp. Immunol. 34, 423-8 1978; VAN EPPS y WILLIAMS, J Exp Med 144, 1227-42 1976) que las funciones inhibidoras de IgA requieren la región Fc, la función de los receptores Fc de IgA aun se desconoce.

Un modelo de consenso de señalización negativa en el sistema inmune implica receptores con un motivo inhibidor basado en inmunorreceptores de tirosina (ITIM) en su dominio citoplasmático. Estos receptores inhibidores actúan por co-agregación con receptores activadores: La contaminación cruzada entre los dos receptores genera una señal negativa (RAVETCH y LANIER, Science, 290, 84-89, 2000). Un ejemplo de la clase ITIM de receptores inhibidores es el receptor Fc FcRIIB. Sin embargo, no se conoce ningún receptor ITIM para la región Fc.

Los inventores han descubierto que, inesperadamente, la ocupación monomérica de FcRI por un fragmento Fab monovalente de un anticuerpo dirigido contra el dominio EC2 de FcRI inhibió fuertemente la fagocitosis inducida por IgG y la exocitosis... [Seguir leyendo]

1. Uso de un fragmento de anticuerpo monovalente dirigido frente al dominio EC2 del receptor FcRI, como principio activo antiinflamatorio para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad antiinflamatoria.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad antiinflamatoria se selecciona entre lupus, artritis reumatoide, diabetes, nefritis, fibrosis renal intersticial, nefropatía obstructiva y trastornos inflamatorios intestinales.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad es una enfermedad alérgica.

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicha enfermedad alérgica es asma.