DISPOSITIVO DESECHABLE PARA UNA O MÁS INTRODUCCIONES, TRATAMIENTO Y TOMA DE MUESTRAS DE MATERIAL BIOLÓGICO PROCEDENTE DE AL MENOS UNA DE LAS FASES SEPARADAS PRESENTES EN EL DISPOSITIVO, EN CONDICIONES DE ESTERILIDAD Y PRESIÓN CONSTANTE.

Dispositivo desechable (1) para una o más introducciones, tratamiento y toma de muestras de material biológico de al menos una de las fases separadas en condiciones de esterilidad y presión constante,

que consta de un tubo de ensayo (2) estéril sellado, estando dicho tubo de ensayo (2) estéril compuesto de vidrio o material plástico y provisto de un tapón (3), estando dicho tapón (3) provisto de un primer orificio (4), u orificio de toma de muestras, un segundo orificio (7) u orificio de entrada y un tercer orificio (8), u orificio con filtro para mantener la presión atmosférica estéril, una aguja (5) que pasa a través del citado primer orificio (4), teniendo dicha aguja (5) una longitud suficiente para llegar al fondo del tubo de ensayo, siendo el acoplamiento entre la citada aguja (5) y el primer orificio (4) un acoplamiento sellado obtenido mediante un elemento elástico (6) que permite la traslación en una dirección prácticamente vertical y que permite además la inclinación de la aguja (5); el citado segundo orificio (7) está sellado mediante una membrana (7) compuesta de un material que permite la perforación mediante una aguja hipodérmica y se cierra de nuevo después de retirar la aguja hipodérmica; el citado tercer orificio (8) está provisto de un filtro o de una válvula sellada (8) que equilibra la presión en el interior del tubo de ensayo y la presión ambiental, garantizando la esterilidad del contenido; el citado dispositivo (1) tiene dimensiones y materiales que permiten su centrifugación

La presente invención se refiere a un dispositivo desechable para múltiples introducciones, tratamiento y toma de muestras de material biológico procedente de una de las fases separadas en condiciones de esterilidad y presión constante.

Más específicamente, la invención se refiere a un dispositivo del tipo arriba indicado para permitir, 5 por ejemplo, llevar a cabo ex vivo el marcado de elementos que configuran la sangre, tales como leucocitos, glóbulos rojos y plaquetas, con isótopos radiactivos u otro material marcador, en condiciones de esterilidad y seguridad para el operador.

En lo que sigue, la memoria se encaminará fundamentalmente al uso del dispositivo para llevar a cabo el marcado ex vivo de leucocitos con isótopos radiactivos en condiciones de esterilidad, pero es bien 10 evidente que el dispositivo de acuerdo con la invención puede ser usado para cada aplicación, tal como la extracción de ácidos nucleicos y proteínas, que requiera admisión y toma de muestras de substancias de un recipiente, en condiciones de esterilidad, en dos o más fases y teniendo lugar mediante la toma de muestras dentro del recipiente a diferentes niveles.

De este modo, refiriéndose en particular a la gammagrafía con leucocitos marcados, es conocido 15 que esto es una investigación de diagnóstico con el objetivo de identificar la presencia de un posible foco de infección en un organismo que no puede ser individualizado mediante otras técnicas.

El método anterior está basado en la inyección intravenosa de glóbulos blancos del paciente a los que previamente se les ha ligado un agente radio-mimético in vitro, 99mTc-HM-PAO (Roca et al. 1998) o 111In-oxina (Thakur et al. 1977), con el fin de identificar los sitios donde se acumulan poniendo en 20 evidencia la presencia de un foco de infección.

Como es bien conocido, la gammagrafía con leucocitos marcados es una práctica clínica utilizada para diagnosis de patologías caracterizadas por la presencia de zonas de inflamación aguda. La gammagrafía con leucocitos marcados es considerada muy importante para la diagnosis y seguimiento de prótesis articulares e infecciones vasculares, así como de la osteomielitis. Aún más, tiene un importante 25 papel en las enfermedades inflamatorias crónicas intestinales y en las infecciones neurológicas posoperatorias.

En la actualidad, la preparación de leucocitos marcados tiene lugar mediante varios protocolos, todos muy similares entre sí.

El protocolo principalmente usado (Roca et al. 1998) establece que: 30

- se extraen 50 cc de sangre de la vena del antebrazo del paciente mediante una jeringa que contenga una dosis adecuada de anticoagulante (ACD);

- en condiciones de esterilidad, mediante la utilización de una campana de flujo laminar y una máquina de centrifugar, los glóbulos blancos se purifican mediante las otras células de la sangre y se marcan entonces con una substancia radiactiva (9SmTc-HMPAO o 111Inoxina o 99mTcSnF); 35 dicha operación dura aproximadamente 90 minutos;

- al final de la operación anterior, la suspensión conteniendo los glóbulos blancos se inyecta al paciente vía intravenosa y se obtienen entonces imágenes mediante una cámara de rayos gamma de la totalidad del cuerpo o de porciones individuales del cuerpo, después de unas 3 a 4 horas y de alrededor de 24 horas desde la inyección. 40

Los diferentes protocolos que se emplean para marcar glóbulos blancos 99mTc-HMPAO; Solanki et al. 1988; (Roca et al. 1998) o 111In-oxina (Thakur et al. 1977) son diferentes entre sí únicamente en aspectos secundarios.

Todos los protocolos conocidos establecen el uso de una campana de flujo laminar para llevar a cabo el procedimiento y personal técnico experto autorizado para manejar substancias biológicas 45 potencialmente infectadas o substancias cancerígenas.

En consecuencia, en la actualidad, este procedimiento puede llevarse a cabo únicamente en centros de medicina nuclear con personal entrenado y provistos de una campana de flujo laminar capaz de permitir que las diferentes fases que comprenden el método puedan llevarse a cabo en condiciones de esterilidad y antipiréticas para el paciente y en condiciones de seguridad para el operador. 50

Dichas condiciones son indispensables puesto que los glóbulos blancos marcados son reinyectados al paciente al final del mismo procedimiento y pueden ser portadores de microorganismos patógenos virales.

El problema anterior limita notablemente la difusión de la gammagrafía con leucocitos marcados, a pesar de que esta puede ser una prueba básica para algunas patologías, como la diagnosis de prótesis articulares, infecciones vasculares y osteomielitis.

La imposibilidad de realizar el procedimiento anterior en un hospital crea notables problemas logísticos para la transferencia de los pacientes a los centros donde se practica: otra consecuencia de la 5 menor disponibilidad es una inevitablemente larga lista de espera para los pacientes. El otro problema notable, relevante para la separación y procedimiento de marcado de los glóbulos blancos, es el potencial riesgo de infección por exposición del operador que lleva a cabo el procedimiento para manejar la sangre.

En vista de lo anterior, es bien evidente la ventaja de tener un dispositivo como el propuesto de acuerdo con la presente invención que permite limitar notablemente el riesgo de infección. 10

Otro objetivo de la presente invención es el de facilitar un dispositivo que permite la separación y marcado de los glóbulos blancos con uno de los agentes radio-miméticos comercialmente disponibles (99mTc-HMPAO o 111In-oxina u otros) sin necesidad de tener una campana de flujo laminar, mientras el procedimiento estándar descrito por Roca et al. (1988) establece el marcado mediante “trabajo abierto” pero bajo la campana de flujo laminar con el fin de mantener las condiciones de esterilidad de la 15 preparación que debe ser entonces reinyectada al paciente, requiriendo el uso de materiales estériles desechables (pipeta Pasteur, tubos de ensayo Falcon, etc.), entrenamiento de personal experto para trabajar en condiciones de esterilidad, ejecución de controles periódicos de esterilidad de la campana y de otros aparatos empleados, alto riesgo de contaminación vírica y bacteriológica de la preparación, y alto riesgo de contaminación del operador cuando maneja sangre infectada. A lo anterior, es necesario añadir 20 la inversión y los costes de mantenimiento de la campana de flujo laminar.

Mediante la solución de acuerdo con la presente invención, por el contrario, es posible obtener:

- reducción del uso de material desechable;

- reducción del riesgo de infección de la preparación;

- reducción del riesgo de infección del operador; 25

- mayor simplicidad de ejecución del procedimiento al no requerir personal especializado;

- reducción de los controles de calidad a llevar a cabo.

Por lo tanto, es objetivo específico de la presente invención un dispositivo desechable para una o más introducciones, tratamiento y toma de muestras de material biológico procedente de al menos una de las fases separadas en condiciones de esterilidad y presión constante, que consta de un tubo de ensayo 30 estéril sellado, estando el tubo de ensayo estéril citado compuesto de vidrio o de material plástico y provisto de un primer orificio superior, u orificio para toma de muestras, un segundo orificio u orificio de entrada, y un tercer orificio, u orificio de filtrado para el mantenimiento de la presión atmosférica estéril, una aguja (5) que pasa a través del citado primer orificio, teniendo dicha aguja una longitud suficiente para llegar al fondo del tubo de ensayo, siendo el acoplamiento entre la citada aguja y el primer orificio un 35 acoplamiento sellado obtenido mediante un elemento elástico que permite el desplazamiento en dirección prácticamente vertical y que permite además la inclinación de la aguja; el citado segundo orificio está sellado mediante una membrana compuesta de un material que permite la perforación por una aguja hipodérmica y su posterior cierre después de extraer la aguja hipodérmica; el citado tercer orificio está...

1. Dispositivo desechable (1) para una o más introducciones, tratamiento y toma de muestras de material biológico de al menos una de las fases separadas en condiciones de esterilidad y presión constante, que consta de un tubo de ensayo (2) estéril sellado, estando dicho tubo de ensayo (2) estéril compuesto de vidrio o material plástico y provisto de un tapón (3), estando dicho tapón (3) provisto de un 5 primer orificio (4), u orificio de toma de muestras, un segundo orificio (7) u orificio de entrada y un tercer orificio (8), u orificio con filtro para mantener la presión atmosférica estéril, una aguja (5) que pasa a través del citado primer orificio (4), teniendo dicha aguja (5) una longitud suficiente para llegar al fondo del tubo de ensayo, siendo el acoplamiento entre la citada aguja (5) y el primer orificio (4) un acoplamiento sellado obtenido mediante un elemento elástico (6) que permite la traslación en una dirección prácticamente 10 vertical y que permite además la inclinación de la aguja (5); el citado segundo orificio (7) está sellado mediante una membrana (7) compuesta de un material que permite la perforación mediante una aguja hipodérmica y se cierra de nuevo después de retirar la aguja hipodérmica; el citado tercer orificio (8) está provisto de un filtro o de una válvula sellada (8) que equilibra la presión en el interior del tubo de ensayo y la presión ambiental, garantizando la esterilidad del contenido; el citado dispositivo (1) tiene dimensiones 15 y materiales que permiten su centrifugación.

2. Dispositivo de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el citado tapón (3) está acoplado al tubo de ensayo mediante un acoplamiento sellado.

3. Dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el citado tapón (3) está integrado en el mismo tubo de ensayo. 20

4. Dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el acoplamiento entre el citado primer orificio (4) y la citada aguja desplazable (5) está compuesto por un fuelle o una funda elástica.

5. Dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la citada membrana (7) está integrada en el citado tubo de ensayo o en el tapón (3) del citado tubo de 25 ensayo.

6. Dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el citado tercer orificio (8) está provisto de un filtro, con el fin de impedir la penetración de bacterias dentro del tubo de ensayo.

7. Método para el marcado de componentes sanguíneos, particularmente leucocitos, con isótopos 30 radiactivos en condiciones de esterilidad empleando un dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6 precedentes, caracterizado porque comprende los siguientes pasos:

-mezclar suavemente una cantidad de sangre con un agente anticoagulante y un agente de sedimentación, cantidad de sangre que ha sido muestreada mediante una jeringa que contiene agente anticoagulante y agente de sedimentación, usando un dispositivo de aguja mariposa; 35

-dejar que sedimente la sangre dentro de la jeringa durante 30 a 60 minutos;

-al final de la sedimentación, transferir el plasma rico en células desde la jeringa al dispositivo, mediante la introducción de la aguja mariposa dentro del segundo orificio;

-centrifugar el dispositivo durante 5 minutos, creando en el fondo del tubo de ensayo un precipitado de color rojo que contiene los leucocitos, e introducir entonces una jeringa estéril desechable dentro de la 40 aguja introducida dentro del primer orificio y extraer el sobrenadante del dispositivo;

-después de haber suspendido de nuevo el precipitado celular agitando suavemente el dispositivo, añadir 99mTc-HMPAO, ya preparado, mediante una jeringa estéril desechable a través del segundo orificio del dispositivo;

-al final del tiempo de incubación necesario de alrededor de 10 minutos, añadir una solución estéril 45 fisiológica mediante una jeringa estéril desechable a través del primer orificio y centrifugar durante 5 minutos;

-introducir una jeringa estéril desechable en la aguja introducida en el primer orificio y extraer el sobrenadante del dispositivo;

-añadir de 2 a 3 ml de una solución estéril fisiológica mediante una jeringa estéril desechable a 50 través del segundo orificio y suspender de nuevo suavemente el precipitado antes de tomar de nuevo células marcadas para ser inyectadas al paciente, introducir una jeringa estéril desechable en la aguja del primer orificio y tomar muestras de todos los contenidos del dispositivo.