COMBINACIÓN FARMACÉUTICA DE G-CSF Y PLGF ÚTIL PARA CÉLULAS MADRE DE SANGRE.

Combinación farmacéutica de G-CSF y PLGF útil para células madre de sangre. Campo de la invención Esta invención se refiere a una combinación de moléculas biológicamente activas para uso en la movilización de células madre sanguíneas en un paciente o sujeto que tiene necesidad de ello. Más específicamente, la invención proporciona una combinación de G-CSF y P1GF particularmente eficaz en la estimulación de células madre de sangre periféricas (PBPC), aumentando así la factibilidad y eficacia del trasplante de órganos o células y de protocolos quimio-radioterapéuticos en pacientes con tumor. Antecedentes de la invención Las PBPC autólogas tienen indicaciones significativamente incrementadas de factibilidad y eficiencia en quimioradioterapia a dosis altas y trasplantes de células madre autólogas (SCT) 1,2 en pacientes con linfoma no hodgkiniano (NHL) 3 , linfoma de Hodgkin de recidiva (HL) 4 así como mieloma múltiple (MM) 5 . Las PBPC alógenas representan la fuente preferida de células madre para SCT que casan con HLA y la única fuente de alógrafos desacoplados a HLA 6, 7, 8, 9, 10, 11 que es una terapia potencialmente curativa para pacientes con riesgo alto de leucemia que carecen de un donante acoplado a HLA relacionado o no relacionado, esto es, aproximadamente 40% de la población global de pacientes que se pueden beneficiar de los trasplantes alógrafos. Los protocolos usados para movilizar PBPC autólogas en pacientes de cáncer incluyen el uso de factores de crecimiento mieloides solos o durante la recuperación de quimioterapia citotóxica, permitiendo este último enfoque una movilización óptima de PBPC 12, 13, 14 . La movilización de PBPC alógenas de donantes sanos usualmente se logra con tratamientos cortos con factor recombinante humano estimulante de granulocitos (rhG-CSF) en dosis que varían de 10 a 20 µg/kg/día 15, 16, 17,18 . Los pacientes de cáncer autoinjertados con >5 x 10 6 células CD34+/kg experimentan un pronto y durable injerto hematopoyético, mientras que los que reciben < 2 x 10 6 células CD34+/kg tienen el riesgo de injerto demorado, fallo de injerto o mielodisplasia 19 . Por tanto, en la realización de SCT autólogo, la disponibilidad de cantidades adecuadas de células CD34+ representa un prerrequisito esencial. Debido a una quimio-radioterapia anterior o a factores relacionados con enfermedad, una proporción sustancial de pacientes de cáncer con quimioterapia simple (de 10 a 20%) o demorada/refractaria (de 30 a 40%) fracasan en la movilización de cantidades óptimas de células CD34+ 20, 21, 22 . La recogida de cantidades adecuadas de células CD+ alógenas no representa una cuestión crítica en receptores de trasplantes de HLA idénticos; sin embargo, de 5 a 1 0% de donantes normales experimentan una mala movilización de células madre y requieren dosis incrementadas de rhG-CSF y múltiples procedimientos aferéticos 22, 24, 25 . Los receptores de HLA desacoplado requieren la reinfusión de dosis mega de células CD34+ empobrecidas en linfocitos para prevenir fallo de injerto y GvHD 26 severa. Bajo el régimen de movilización estándar, (esto es, un tratamiento de 7 días de rhG-CSF), donantes de SCT desacoplados a HLA experimentan una media de 4 leucoferasas para recoger la dosis diana de células CD34+ (12 x 10 6 células de CD34+/kg de peso corporal), con una proporción sustancial de donantes (de 20 a 25%) que fracasan en el suministro de la dosis diana de células CD34+. A pesar de que la edad, el sexo, el programa del tratamiento con citoquinas así como la quimio-radioterapia previa pueden afectar a la movilización de células madre 27, 28, 29 , no se han identificado claramente características específicas como factores de predicción de la movilización de citosinas. Por tanto, es de esperar que, cualquier procedimiento aplicable a pacientes de cáncer o donantes normales y capaz de aumentar el rendimiento de progenitores circulantes en ausencia de toxicidad añadida, tendrá un impacto profundo sobre la factibilidad, toxicidad y costes de SCT autólogo y alógeno. Se puede conseguir una movilización aumentada de PBPC usando moléculas capaces de interferir con el(los) mecanismo(s) que regula(n) el tráfico de células madre hematopoyéticas, esto es, la transmigración a través de el endotelio luminal a los espacios extravasculares de la médula espinal en el alojamiento y la reversión en la movilización 30, 31, 32, 33 . Un enfoque adicional para intensificar la movilización de PBPC se basa en el uso de combinaciones de citocinas, tales como el factor recombinante humano (rh) estimulante de colonias de granulocitosmacrófagos (rhGM-CSF) más rhG-CSF 34 , interleucina-3 (rhlL-3) más rhG-CSF o rhGM-CSF 35 y PlXY-321 36 . Finalmente, se puede conseguir la intensificación de la movilización de PBPC por incorporación en el régimen estándar de movilización, de citosinas de actuación temprana, tales como el factor de células madre estándar (rhSCF) 37, 38 del ligando flt-3 39 , capaz de expandir los progenitores de la médula, aumentando así el número de células susceptibles de posterior movilización por rhG-CSF. 2   Los sustituidos o adjuntos de rhG-CSF fracasaron en mejorar sustancialmente la movilización de progenitores de sangre activados con rhgCSF solos, o dieron por resultado una mejora contrarrestada por una toxicidad sustancialmente incrementada de la toxicidad. El factor de crecimiento placentario (P1FG) es un miembro de la familia de factores de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y funciona como un amplificador señalador a través del receptor-1 de VEGF (VEGFR1). Recientemente, la administración de un vector adenoviral que expresa P1GF (h) humano ha demostrado que ejerce efectos hematopoyéticos complejos, incluida la intensificación de la recuperación de médula ósea después de mielosupresión y movilización de progenitores hematopoyéticos. Sin embargo, la administración de factores de crecimiento después de inyección de vectores adenovirales presenta varias diferencias importantes con la inyección directa de un factor purificado, y es posible no poder predecir sus efectos cuando se administra de acuerdo con las modalidades usadas en el contexto clínico. Descripción de la invención Debido al relevante impacto clínico de cualquier procedimiento capaz de mejorar la movilización de células madre, se ensayó la actividad de movilización de P1GF en modelos animales que permiten estimular la movilización de PBPC como se presenta en una situación clínica. Se inyectó intraperitonealmente (IP) en ratones BALB/c normales durante 5 días, vehículo de control (PBS(MSA), rhG-CSF solo (10 µg/d) o una combinación de rhG-CSF (10 µg/d) y P1GF recombinante de murino (rh) (2,5-5 µg/día). Se recogieron muestras de sangre 2 horas después de la última inyección de citocinas y se evaluaron los parámetros siguientes: recuento de leucocitos (WBC), frecuencia y número absoluto de células formadoras de colonia (CFC), número absoluto de células de inicio d cultivo a largo plazo (LTClC). En las Tablas 1-4 de más adelante se ilustran los efectos de rmP1GF. Es evidente que rmP1GF inyectado solo no tiene efecto sobre la movilización de WBC, CFC y LTC-IC en comparación con mG-CSF solo. Además, se ensayó la actividad de movilización de combinaciones de P1GF/G-CSF en un modelo no humano de primate (macacos de la India). Los resultados obtenidos en ratones se confirmaron en este modelo animal. En particular, la combinación de P1GF/G-CSF mejoró la movilización de WBC, CFC, HPP-CFC y LTC-C en términos de cinética, frecuencia y números absolutos. Los estudios indicados antes se han realizado usando procedimientos y condiciones que se asemejan íntimamente a la administración de factores de crecimiento hematopoyéticos a pacientes humanos. Los resultados demuestran claramente la presencia de un efecto sinérgico por G-CSF y rhP1GF en la movilización de células progenitoras de sangre periférica. Es objetivo de la invención, por tanto, una preparación combinada de G-CSF y P1GF útil para estimular la movilización de células madre de sangre en un paciente o sujeto que lo necesita. Tal como se usan aquí, los términos paciente y sujeto se refieren preferiblemente a individuos humanos, aunque también pueden referirse a animales, especialmente mamíferos preferiblemente mamíferos. Entre los ejemplos de estados de enfermedad, afecciones y enfermedades que se pueden beneficiar de la movilización de células madre de sangre figuran, no limitativamente, trasplante de órganos o células y quimio-radioterapia de tumores, en particular SCT autólogo 1,2 o alógeno en pacientes con NHL, recidiva de HL 4 , MM 5 , o en la fase de recuperación que sigue a quimioterapia mielosupresora. Los ingredientes activos de la preparación combinada se pueden administrar simultánea o separadamente en formulación... [Seguir leyendo]

1. Preparación farmacéutica combinada que contiene G-CSF y P1GF como sustancias activas, para uso en la estimulación de la movilización de células progenitoras de sangre periférica (PBPC) para aumentar la factibilidad y eficacia del trasplante de órganos o células y de protocolos de quimio-radioterapia en pacientes con tumores. 2. Preparación farmacéutica combinada para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el mencionado trasplante de células es un trasplante de células madre autólogo o alógeno realizado en pacientes con linfoma no hodgkiano (NHL), recidiva de linfoma de Hodgkin (EL), mieloma múltiple o la fase de recuperación que sigue a un trasplante mielosupresor qumioterapéutico. 3. Preparación combinada para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que G-CSF y P1GF se administran simultánea o separadamente al mencionado paciente o sujeto. 4. Preparación combinada para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, para administración parenteral. 5. Preparación combinada para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, que contiene hG-CSF y rhPILG recombinantes. 6. Preparación combinada para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-5, que contiene de 1 a 150 µg/kg de G- CSF y de 10 a 300 µg/kg de P1GF. 14