BANDEJA CON PROTUBERANCIAS.

Esta invención se refiere a una bandeja de alimentación para alojar un medio nutriente utilizado con un aparato de pruebas con múltiples pocillos, para promover las interacciones de los fluidos tales como el crecimiento de células en un líquido nutriente con una multiplicidad de pocillos. Con carácter más particular, esta invención se refiere a dicha bandeja de alimentación de un aparato de pruebas con múltiples pocillos que permite añadir o quitar líquido de la bandeja de alimentación de un aparato de pruebas con múltiples pocillos sin perturbar a un material de la placa de pruebas tal como las células dentro de los pocillos. En la actualidad, un aparato de pruebas con múltiples pocillos para probar muestras incluye una placa filtrante con múltiples pocillos, una placa receptora con múltiples pocillos y una tapa. Los pocillos de la placa filtrante están formados de miembros huecos, típicamente de forma tubular, aunque se han usado formas rectangulares, cuadradas, triangulares y hexagonales, con dos extremos abiertos a uno de los cuales, típicamente el extremo del fondo, se ha fijado una membrana tal como una membrana microporosa. Los miembros se pueden insertar en una bandeja de alimentación que contenga un medio nutriente de tal manera que las células contenidas en los pocillos se puedan fijar a la membrana y crezcan en ésta. Las células se alimentan a medida que los nutrientes pasan desde el medio nutriente a través de la membrana y a las células a una velocidad controlada por el gradiente de concentración de los nutrientes desde el medio a las células. El medio nutriente contenido en la bandeja de alimentación se repone periódicamente para mantener el crecimiento de las células. Es conveniente efectuar la reposición del medio nutriente rápidamente y de una manera que evite que se produzcan daños a las membranas y a las células. Una vez que se ha alcanzado el nivel previsto de crecimiento de las células en las membranas de los pocillos, se puede utilizar la placa filtrante de múltiples pocillos en métodos de ensayo convencionales. Estos métodos de ensayo generalmente se efectúan posicionando las membranas y las células de la placa filtrante de múltiples pocillos en la placa receptora de múltiples pocillos, tal como una placa receptora de 96 pocillos situada debajo de la placa filtrante de múltiples pocillos, o bien justamente tendrán que ser el mismo número de pocillos en coincidencia con la placa filtrante de las células. Los pocillos de la placa receptora de múltiples pocillos contienen una composición líquida a ensayar. La composición a ensayar se difunde en las paredes, si las hay, y luego a través de la membrana. Los productos líquidos resultantes dentro de los pocillos de la placa filtrante de múltiples pocillos o en los pocillos de la placa receptora de múltiples pocillos se ensayan luego para determinar la capacidad de la composición que se está ensayando para penetrar la barrera de células. Un componente importante en el proceso de descubrimiento y desarrollo de fármacos es la determinación de la absorción oral y biodisponibilidad de nuevos compuestos. Con el fin de realizar esta evaluación en un ensayo económico, de gran producción y sensible, es ideal usar un dispositivo in vitro con una multitud de pocillos que contengan células, una pequeña cantidad de material para ensayo y dispositivos de automatización. Clásicamente, la determinación de las características de la absorción oral in Vitro se realiza usando una estirpe definida de células epiteliales y midiendo la velocidad de transporte aparente del fármaco a través de un monoestrato de las células. Más recientemente, es posible clasificar u ordenar la velocidad de transporte pasiva de potenciales candidatos a fármacos usando una barrera de membrana artificial. Los valores generados a partir de estos experimentos in vitro son unos valiosos métodos para aislar selectivamente los candidatos a fármacos que tengan más probabilidades de dar resultados satisfactorios mucho antes de que sea validada la velocidad de absorción oral por las medidas in vivo. Un experimento típico para determinar las características de absorción de fármaco de un compuesto químico conocido o desconocido se realiza de la manera siguiente. El dispositivo de múltiples pocillos se siembra con células epiteliales en la parte superior del filtro en un medio de nutrientes definido. El mismo medio se añade también a la bandeja de alimentación de un solo pocillo, situada por debajo y en un contacto para fluidos con el dispositivo que contiene las células. Se deja que las células proliferen y se diferencien durante una serie de días. El medio nutriente se reemplaza periódicamente por medio fresco para reponer los nutrientes agotados y extraer los residuos y las células muertas. Al final de un período de crecimiento, la placa filtrante de múltiples pocillos se transfiere a la placa receptora de múltiples pocillos, y los productos químicos a ensayar se introducen, o bien en el compartimiento situado por encima del estrato de células, o bien por debajo del soporte de células y filtro de la bandeja receptora de múltiples pocillos. La cámara opuesta se llena con una disolución amortiguadora exenta de fármaco, y el dispositivo de múltiples pocillos se incuba durante cierto período de tiempo, típicamente a 37º centígrados con agitación. Si se desean puntos correspondientes a múltiples instantes, se puede obtener una toma de muestras de otro compartimiento sin separar el dispositivo. La cantidad de fármaco o de producto químico que se transporta a través de la barrera de células se puede determinar mediante una variedad de métodos analíticos, pero típicamente se determina usando cromatografía de líquidos- espectrometría de masas- espectrometría de masas (en adelante LC- MS/MS). Una vez que las células han crecido de forma satisfactoria y hay que reemplazar la bandeja de alimentación por la placa receptora de múltiples pocillos, es conveniente minimizar el transporte del medio nutriente a la placa receptora de múltiples pocillos para de ese modo minimizar la dilución de la composición que se esté ensayando. Por tanto, es conveniente extraer cualesquiera gotitas de medio nutriente retenidas en las superficies inferiores de las membranas después que se haya retirado el filtro de múltiples pocillos del medio nutriente de la bandeja de alimentación. 2   De acuerdo con lo anteriormente expuesto, sería conveniente proveer un aparato de pruebas de múltiples pocillos que sea capaz de minimizar el transporte de medio nutriente que se va a mezclar con una composición líquida a ensayar. El documento EP 0418035A divulga un aparato para determinar la interacción de tejido y uno o más agentes, y el aparato comprende un pocillo exterior que es cuadrado y está provisto de secciones elevadas en cuyo fondo se podría posicionar un recipiente interior. El pocillo exterior está formado como una cavidad de la parte superior del aparato. El documento US 5795775 A divulga un conjunto y vasija de cultivo para uso en el campo del cultivo de células y tejido. El conjunto incluye una base que tiene uno o más tejidos y una pieza insertada para el cultivo de células que se puede fijar a la base de tal manera que la pared del fondo de la pieza insertada esté suspendida dentro del pocillo (o pocillos). Cada pocillo tiene una configuración generalmente rectangular de tal manera que se han provisto unas aberturas en cada esquina del pocillo para introducir fluido al mismo. Está provista una tapa para proteger al conjunto y mantener la posición de la pieza insertada de cultivo de células. Una pluralidad de protuberancias troncocónicas discretas se extiende hacia arriba desde la pared de fondo de la base, que son sustancialmente más bajas que la altura de las paredes laterales y no contactan con la pared de fondo de la pieza insertada cuando ésta está suspendida dentro del pocillo.. El documento US 5534227 divulga una pieza insertada de plato termoformada para uso en el campo de los cultivos de células y tejido. El conjunto es similar al del documento US 5795775 A e incluye una pluralidad de salientes discretos parecidos a crestas que se extienden hacia arriba desde la pared del fondo de cada pocillo para soportar la superficie de fondo de cada pieza insertada del cultivo de celdas cuando ésta está suspendida dentro del pocillo. El documento OS55801055 A divulga un conjunto de plato de cultivo con múltiples pocillos que incluye una placa delgada que define un gran canal o pocillo con una superficie de soporte rodeada por una pared periférica escalonada. Se puede fijar una pieza insertada de múltiples pocillos a la placa de pocillo de tal manera que las membranas sujetas a la pieza insertada de la envoltura de pocillo de la pieza insertada estén suspendidas por encima de la pared de... [Seguir leyendo]

1. Una bandeja de alimentación (10; 70; 104) destinada a retener una composición líquida y a soportar a una placa filtrante (40) que tiene una multiplicidad de pocillos (42), cada uno formado de un miembro hueco que tiene una parte superior abierta y un fondo cerrado, cuyo fondo tiene una barrera permeable (43) fijada al mismo, en donde la bandeja de alimentación (10; 70; 104) comprende: una superficie de soporte (20; 102); unas paredes (12, 14, 16, 118) que rodean a dicha superficie (20; 102) para encerrar a dicha superficie (20; 102), y una multiplicidad de protuberancias (60; 72; 100) que se extienden desde dicha superficie de soporte (20; 102) en una dirección sustancialmente igual a una dirección en la que dichas paredes (12, 14, 16, 18) se extienden desde dicha superficie de soporte (20; 102), en donde dichas protuberancias (60; 72; 100) están dispuestas de tal manera que cada protuberancia (60; 72; 100) está en contacto con de uno a cuatro pocillos (42) de la placa filtrante (40) cuando la placa filtrante (40) se levanta y separa de la bandeja de alimentación (10, 70, 104) y se mueve lateralmente para hacer que el medio líquido en exceso de las barreras permeables (43) fluya hacia abajo de dichas protuberancias (60; 72;100). 2. La bandeja de alimentación de la reivindicación 1, en la que dicha placa filtrante es una placa filtrante con múltiples pocillos en la que los miembros huecos que forman los pocillos (42) son de forma tubular y tienen la barrera permeable en la forma de una membrana porosa (43) fijada a los mismos. cada una de dichas membranas porosas (43) se extiende dentro de un volumen de espacio vacío por encima de dicha superficie de soporte (20), y dichas paredes incluyen unas superficies exteriores configuradas para soportar a dicha placa filtrante con múltiples pocillos. 3. La bandeja de alimentación de las reivindicaciones 1 ó 2, en la que dichas protuberancias (60) se seleccionan del grupo que consiste en tubos, hoyuelos, conos y pirámides. 4. La bandeja de alimentación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que una protuberancia (60) está posicionada junto a cada pocillo (42) que se extiende en la bandeja (10). 5. La bandeja de alimentación de la reivindicación 1, en la que la bandeja de alimentación (104) contiene uno o más deflectores (100) provistos en la superficie (102) de la bandeja de alimentación (104). 6. La bandeja de alimentación de la reivindicación 5, en la que los deflectores (100) tienen una forma seleccionada del grupo que consiste en elementos ondulados, elementos curvilíneos, elementos rectos y elementos cruzados. 7. La bandeja de alimentación de las reivindicaciones 5 ó 6, en la que los deflectores (100) no tocan a las paredes laterales de la bandeja de alimentación (104). 8. La bandeja de alimentación de las reivindicaciones 5 ó6, en la que los deflectores (100) tocan a las paredes laterales de la bandeja de alimentación (104) y hay uno o más agujeros pasantes practicados a lo largo del borde inferior de los deflectores (100) para permitir el movimiento de un fluido sin obstáculos a lo largo de las paredes. 9. Un aparato de pruebas con múltiples pocillos que comprende una bandeja de alimentación (10) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, y una placa filtrante (40) con múltiples pocillos soportada por dicha bandeja de alimentación (104), cuya placa filtrante (40) con múltiples pocillos comprende una multiplicidad de pocillos (42) que se extienden desde la placa, cada uno de cuyos pocillos (42) comprende (a ) un miembro hueco que tiene dos aberturas, una de cuyas aberturas se extiende desde dicha placa, y (b) una barrera permeable (43) sujeta alrededor de dicha abertura que se extiende desde la placa, cuya barrera (43) de dichos pocillos (42) está posicionada dentro de un volumen de espacio vacío de dicha bandeja de alimentación (10). 6   7   8   9     11   12   13