Un polipéptido, que comprende una molécula modificada de la IL-7 humana o una porción activa de la misma,

que tiene un epitopo de las células T modificado para reducir una respuesta de las células T anti-IL-7, comprendiendo dicho polipéptido, así mismo, una porción Fc de una molécula de inmunoglobulina fusionada, a través de su extremo C, con el extremo N de dicha molécula modificada de la IL-7, siendo seleccionada dicha molécula Fc-IL7 fusionada entre el grupo que comprende:

(i)la huFcy2(h)(FN>AQ) - L - IL-7(F39P, F57N, L128S),

siendo Fcy2(h) una porción de Fc humano con una bisagra de IgG1 y dominios CH2 y CH3 de IgG2, que comprende las mutaciones F296A y N297Q, siendo L un segmento enlazador, que tiene la secuencia GGGGSGGGG, y siendo IL-7(F39P, F57N, L128S) la IL-7, que contienen las mutaciones F39P, F57N, y L128S; teniendo dicha molécula la secuencia que está representada en la figura 31;

(ii)la huFcy2(h)(FN>AQ) - L - IL-7(F39P, F57N, L77D, L128S),

siendo Fcy2(h) una porción de Fc humano con una bisagra de IgG1 y dominios CH2 y CH3 de IgG2, que comprende las mutaciones F296A y N297Q, siendo L un segmento enlazador, que tiene la secuencia GGGGSGGGG, y siendo IL-7(F39P, F57N, L77D, L128S) la IL-7, que contiene las mutaciones F39P, F57N, L77D y L128S; teniendo dicha molécula la secuencia que esta representada en la figura 32;

(iii)huFcy2(h) - L - IL-7(F39P, F57N, L77D, L128S),

siendo Fcy2(h) una porción de Fc humano con una bisagra de IgG1 y dominios CH2 y CH3 de IgG2, siendo L un segmento enlazador, que tiene la secuencia GGGGSGGGG, y siendo IL-7(F39P, F57N, L77D, L128S) la IL-7, que contiene las mutaciones F39P, F57N, L77D y L128S; teniendo dicha molécula la secuencia que está representada en la figura 33; y

(iv)huFcy2(h) - L - IL-7(F39P, F57N, L128S),

siendo Fcy2(h) una porción de Fc humano con una bisagra de IgG1 y dominios CH2 y CH3 de IgG2, siendo L un segmento enlazador, que tiene la secuencia GGGGSGGGG, y siendo IL-7(F39P, F57N, L128S) la IL-7, que contiene las mutaciones F39P, F57N, y L128S; teniendo dicha molécula la secuencia que ha sido representada en la figura 34

Variantes de la interleucina-7 con inmunogenicidad reducida.

Campo de la invención

El campo de la invención se refiere, de manera general, a moléculas de la interleucina-7 (IL-7) modificadas con objeto de reducir su inmunogenicidad. De la misma manera, estas moléculas incluyen proteínas de fusión, que comprenden dichas moléculas de la IL-7 modificadas y moléculas de inmunoglobulina o porciones de las mismas, que corresponden, de manera especial, a proteínas de fusión Fc.

Fundamento

Las citocinas son estimuladores del sistema inmune y, por lo tanto, son adecuadas como fármacos. Por ejemplo, el interferón-alfa (IFN-a), el interferón-beta (IFN-ß), la interleucina-2 (IL-2) y el factor estimulante de las colonias de granulocitos/macrófagos (GM-CSF) son, todos ellos, fármacos aprobados, que son empleados para el tratamiento de las infecciones víricas, del cáncer, de la desregulación del sistema inmune tal como las enfermedades autoinmunes y para promover el restablecimiento del sistema inmune después de una quimioterapia contra el cáncer. Infelizmente, estas proteínas pueden estimular una respuesta inmune contra sí mismas, provocando que los pacientes desarrollen anticuerpos contra la proteína terapéutica. De la misma manera, estos anticuerpos pueden inhibir la función de la misma proteína producida por vía endógena en el paciente, dando como resultado consecuencias potenciales a largo plazo para la salud del paciente.

La interleucina-7 es una citocina que promueve la supervivencia y la proliferación de las células T, de las células B y de otras células inmunitarias. Por lo tanto, es una proteína potencialmente terapéutica para tratar pacientes, cuyo sistema inmune haya sido dañado por la quimioterapia contra el cáncer, por la infección HIV o por otras enfermedades, desórdenes o exposiciones a productos químicos. Recientemente, han sido publicados ensayos con animales, que muestran el uso de la administración de la IL-7. Se supone que la IL-7 puede corregir la linfopenia de las células T en cáncer y que reduce las tasas de metástasis en ratones. De la misma manera, los primates expuestos al virus de la inmunodeficiencia de los simios SIV muestran una renovación de las células T sin aumento de la replicación vírica. En el último caso, se ha administrado la IL-7 humana recombinante a babuinos, sin que hayan sido observadas reacciones adversas de anticuerpos (Alpdogan and van den Brink, (2005) Trends in Immunol., 26(1):56-64; Storek et al., (2003) Blood, 101(10):4209-4217). Sin embargo, en base a sus propiedades inmunoestimulantes, se espera que la administración terapéutica de la IL-7 induzca una respuesta de anticuerpos contra sí misma. Por consiguiente, existe la necesidad en el estado de la técnica de mejorar versiones de la IL-7, que sean menos inmunogénicas, pero que retengan la propiedad de estimular al sistema inmune.

Sumario de la invención

La presente invención está dirigida a un polipéptido, que comprende una molécula modificada de la IL-7 humana o una porción activa de la misma, que tiene un epitopo de las células T modificado para reducir una respuesta de las células T anti-IL-7, comprendiendo dicho polipéptido, así mismo, una porción Fc de una molécula de inmunoglobulina fusionada, a través de su extremo C, con el extremo N de dicha molécula modificada de la IL-7, siendo seleccionada dicha molécula Fc-IL7 fusionada entre el grupo que comprende:

En una realización, la mitad Ig es la IgG2. En algunas realizaciones, la inmunoglobulina es una inmunoglobulina humana. De la misma manera, la invención se refiere a una célula, que comprende una secuencia de ácidos nucleicos, que codifica un polipéptido modificado de conformidad con la invención. En una realización, la célula es una célula procariota.

De la misma manera, la invención se refiere a un uso del polipéptido de la invención o a la manufactura de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer o del HIV.

Breve exposición de los dibujos

La figura 1 representa la secuencia de aminoácidos de la IL-7 humana. La secuencia señal está mostrada en negrita. De igual modo, se ha representado en negrita y en cursiva un tramo de dieciocho aminoácidos que puede ser suprimido a partir de la secuencia de la IL-7.

La figura 2 representa la secuencia de aminoácidos de la IL-7 bovina. La secuencia señal está mostrada en negrita.

La figura 3 representa la secuencia de aminoácidos de la IL-7 de carnero. La secuencia señal está mostrada en negrita.

La figura 4 representa la secuencia de aminoácidos de una IL-7 humana desinmunizada, ejemplificativa, en la que han sido modificadas secuencias del epitopo de las células T.

La figura 5 representa la secuencia de aminoácidos de una IL-7 humana desinmunizada, producida por vía bacteriana.

La figura 6 representa la secuencia de ácidos nucleicos, que codifica la IL-7 madura, que incorpora codones para las mutaciones F39P, F57N y L128S.

La figura 7 representa la secuencia de aminoácidos de la IL-7 madura con las mutaciones F39P, F57N y L128S.

La figura 8 representa la secuencia de ácidos nucleicos, que codifica la IL-7 madura, que incorpora codones para las mutaciones F39P, F57N, L77D y L128S.

La figura 9 representa la secuencia de aminoácidos de la IL-7 madura con las mutaciones F39P, F57N, L77D y L128S.

La figura 10 representa la secuencia de ácidos nucleicos, que codifica la IL-7 desinmunizada, producida por vía bacteriana (bDel-IL-7), codón-optimizada para E. coli con codones para las mutaciones de los aminoácidos K68D, M69D, 188T, V96G.

La figura 11 representa la secuencia de ácidos nucleicos, que codifica una variante de la IL-7 madura, la IL-7 desinmunizada (Del-IL-7), con codones para las mutaciones de los aminoácidos K68D, M69D, 188T, V96G.

La figura 12 representa la secuencia de aminoácidos para la Fcy1-IL-7, en la que la porción Fc está constituida por una bisagra ?1, región ?1 CH2 y ?1 CH3.

La figura 13 representa la secuencia de aminoácidos para la Fc?2(h)(FN>AQ)-IL-7 humana, que es una porción Fc con una bisagra ?1, un dominio ?2 CH2 y un dominio ?2 CH3. La porción Fc incorpora las mutaciones de los aminoácidos F296A y N297Q.

La figura 14 representa la secuencia de aminoácidos para la Fc?1-(segmento enlazador1)-IL-7 humana, que es una porción Fc, que...

1. Un polipéptido, que comprende una molécula modificada de la IL-7 humana o una porción activa de la misma, que tiene un epitopo de las células T modificado para reducir una respuesta de las células T anti-IL-7, comprendiendo dicho polipéptido, así mismo, una porción Fc de una molécula de inmunoglobulina fusionada, a través de su extremo C, con el extremo N de dicha molécula modificada de la IL-7, siendo seleccionada dicha molécula Fc-IL7 fusionada entre el grupo que comprende:

2. Un polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicha molécula de inmunoglobulina es una inmunoglobulina humana.

3. Un polipéptido según la reivindicación 1 o 2, en el que dicha molécula de inmunoglobulina es la IgG2.

4. Una molécula de ácido nucleico, que codifica un polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Un vector de expresión, que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 4.

6. Una célula procariota, que comprende un vector de expresión según la reivindicación 5.

7. Uso de un polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la manufactura de un medicamento destinado al tratamiento de enfermedades cancerosas o la infección HIV.

8. Uso según la reivindicación 6, en el que la cantidad efectiva de polipéptido administrada al paciente está comprendida entre 0,01 y 10 mg/kg/día.