Una combinación de anticuerpos para uso médico en un sujeto, en la que dicha combinación de anticuerpos comprende un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4),

y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2), en la que el anticuerpo anti-TLR4 comprende tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25, respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 59

Campo de la invención

Esta invención se refiere en general a composiciones que contienen anticuerpos múltiples, por ejemplo, anticuerpos neutralizantes múltiples que se unen inmunoespecíficamente a uno o más receptores de tipo toll, por ejemplo, dos o más receptores de tipo toll, y a procedimientos de uso de estas composiciones en el tratamiento de dolencias inflamatorias.

Antecedentes

Los receptores toll, que fueron descubiertos por primera vez en Drosophila, son proteínas transmembrana tipo I que tienen repeticiones ricas en leucina (LRR) en la porción extracelular de la proteína, y uno o dos dominios ricos en cisteína. Los homólogos mamíferos de los receptores toll de Drosophila se conocen como “Receptores de tipo toll” (TLR). Se ha demostrado que los TLR desempeñan una función en la inmunidad innata reconociendo partículas microbianas y activando células inmunes contra la fuente de estas partículas microbianas.

En la actualidad se han identificado diez tipos de receptores de tipo toll, TLR 1-10. Estos TLR se caracterizan por la homología de sus dominios intracelulares con los del receptor IL-1 y por la presencia de repeticiones extracelulares ricas en leucina.

Los TLR se activan por diferentes tipos de partículas microbianas conocidas como patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP). Por ejemplo, TLR4 se activa principalmente por lipopolisacárido (LPS), mientras que TLR2 se activa por ácido lipoteicoico (LTA), lipoarabinomanano (LAM), lipoproteína (BLP) y peptidoglicanos (PGN). Por tanto, es posible que cualquier microbio dado pueda estimular varios TLR diferentes en paralelo en cualquier momento temporal dado durante una infección.

Además, se ha demostrado que ciertos TLR requieren la presencia de proteínas accesorias para funcionar. Por ejemplo, el TLR4 forma un complejo con la proteína 2 de diferenciación mieloide (MD-2) sobre la superficie celular. Se ha encontrado que la proteína MD-2 interactúa directamente con TLR4, y la MD-2 tiene la capacidad de permitir modificaciones postraduccionales de TLR4, además de facilitar su transporte a la superficie celular. CD14 es otra proteína que se ha relacionado con a la función de TLR4, y además CD14 también se ha relacionado con el reconocimiento de TLR2 de microbios.

Resumen de la invención

La invención proporciona composiciones que contienen una combinación de anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos monoclonales (MAb) neutralizantes múltiples o uno o más anticuerpos multivalentes que se unen inmunoespecíficamente a uno o más receptores de tipo toll, por ejemplo, dos o más receptores de tipo toll, comprendiendo la combinación un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4) y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2), comprendiendo el anticuerpo anti-TLR4 tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25 respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 59. La divulgación también proporciona procedimientos de uso de estas combinaciones de anticuerpos en el tratamiento de dolencias inflamatorias. El trastorno inflamatorio es, por ejemplo, septicemia, inflamación aguda e inflamación crónica. Por ejemplo, la inflamación crónica está asociada a una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio tal como trastorno inflamatorio del intestino, osteoartritis, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, aterosclerosis, asma o EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica).

La invención también se refiere a la identificación de la contribución relativa de TLR4, TLR2 y CD14 al reconocimiento de y a la respuesta inmunitaria a la bacteria gram-negativa Escherichia coli en sangre completa humana usando anticuerpos monoclonales neutralizantes para cada componente de receptor. Además, la invención se refiere a procedimientos de detección del efecto de tratamiento con MAb de combinación en la inhibición de respuesta inmunitaria.

La invención proporciona composiciones que contienen anticuerpos múltiples o composiciones que contienen uno o más anticuerpos multivalentes, comprendiendo las composiciones un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4) y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2), comprendiendo el anticuerpo anti-TLR4 tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25, respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 59. Dicha combinación o composición de anticuerpos incluye dos o más anticuerpos, uniéndose los anticuerpos inmunoespecíficamente a dos o más dianas tales como concretamente al menos receptor 4 similar a toll (TLR4) y receptor 2 similar a toll (TLR2) y por ejemplo receptor 1 similar a toll (TLR1), receptor 5 similar a toll (TLR5), receptor 6 similar a toll (TLR6), MD-2 y CD14. Por ejemplo, la combinación contiene al menos dos anticuerpos, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR4 y el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR2. Por ejemplo, la combinación contiene al menos tres anticuerpos, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR4, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR2 y un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a MD-2. La combinación contiene al menos tres anticuerpos, por ejemplo, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR4, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR2 y un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a CD14. La combinación contiene al menos cuatro anticuerpos, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR4, el anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a TLR2, un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a MD-2 y un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a CD14.

Los anticuerpos son, por ejemplo, anticuerpos monoclonales y más específicamente anticuerpos monoclonales neutralizantes que pueden bloquear, es decir, neutralizar la actividad biológica

o función de la diana. Como se usa en este documento, los términos “anticuerpo” y “anticuerpos” se refieren a anticuerpos monovalentes (es decir, monoespecíficos) y anticuerpos multivalentes (por ejemplo, biespecíficos, triespecíficos). Anticuerpos adecuados incluyen, por ejemplo, anticuerpos humanizados, anticuerpos completamente humanos y fragmentos de los mismos. Por ejemplo, los anticuerpos pueden bloquear la producción de citocinas proinflamatorias inducida por LPS. Como se usa en este documento, el término “citocina proinflamatoria” se refiere a aquellas citocinas inmunoreguladoras que promueven la inflamación y/o están asociadas a inflamación. Las citocinas proinflamatorias incluyen, por ejemplo, IL-6, IL-8, TNF-alfa, IL1-alfa, IL1-beta, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gamma, IL-10, IL12, IL-23, IL17 y IL18.

Los anticuerpos reconocen, por ejemplo, el complejo de receptores de TLR4/MD-2 expresado sobre la superficie celular. Los anticuerpos usados en las composiciones y procedimientos de la invención incluyen anticuerpos que se unen al complejo de receptores de TLR4/MD-2 humano y también se unen a TLR4 independientemente de la presencia de MD-2. Los anticuerpos de la invención también incluyen anticuerpos que se unen a la porción TLR4 del complejo de receptores de TLR4/MD-2 humano, pero la unión es completamente dependiente de la presencia de MD-2. Además, los anticuerpos de la invención incluyen anticuerpos que se unen al complejo de receptores de TLR4/MD-2 humano y también se unen a MD-2, pero sólo en presencia de TLR4. Otros anticuerpos adecuados incluyen anticuerpos que se unen a MD-2 cuando no se complejan a TLR4, anticuerpos que se unen a TLR2, anticuerpos que se unen a TLR1, anticuerpos que se unen a TLR5, anticuerpos que se unen a TLR6 y anticuerpos que se unen a CD14.

Anticuerpos a modo de ejemplo de la invención incluyen, por ejemplo, el anticuerpo 18H10 murino, el anticuerpo 16G7 murino, el anticuerpo 15C1 murino, el anticuerpo 7E3 murino, el anticuerpo 18H10 humanizado, el anticuerpo 16G7 humanizado, el anticuerpo 15C1 humanizado,...

1. Una combinación de anticuerpos para uso médico en un sujeto, en la que dicha combinación de anticuerpos comprende un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4), y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2), en la que el anticuerpo anti-TLR4 comprende tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25, respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 59.

2. Una combinación de anticuerpos para el tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto, en la que dicha combinación de anticuerpos comprende un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4) y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2), en la que el anticuerpo anti-TLR4 comprende tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25, respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 59.

3. La combinación de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el anticuerpo anti-TLR4 comprende CDR de cadena pesada que tienen la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25 y CDR de cadena ligera que tienen la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30.

4. La combinación de anticuerpos de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el anticuerpo anti-TLR4 contiene una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27.

5. La combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la combinación de anticuerpos comprende además un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente a MD-2.

6. La combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la combinación de anticuerpos comprende además un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente a un receptor similar a toll seleccionado del grupo que está constituido por receptor 1 similar a toll (TLR1), receptor 5 similar a toll (TLR5) y receptor 6 similar a toll (TLR6).

7. La combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que la combinación de anticuerpos está comprendida en una composición.

8. La combinación de cualquier reivindicación previa, en la que el sujeto es un ser humano.

9. La combinación de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, en la que el trastorno inflamatorio es septicemia, una enfermedad autoinmunitaria, un trastorno inflamatorio crónico o un trastorno inflamatorio agudo.

10. La combinación de la reivindicación 9, en la que el trastorno inflamatorio crónico se selecciona del grupo que está constituido por trastorno inflamatorio del intestino, artritis reumatoide, osteoartritis, esclerosis múltiple, aterosclerosis, asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

11. Uso de una combinación de anticuerpos en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio en un sujeto, en el que dicha combinación de anticuerpos comprende un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4) y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2), en el que el anticuerpo anti-TLR4 comprende tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25, respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO:

59.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que el anticuerpo anti-TLR4 comprende CDR de cadena pesada que tienen la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25 y CDR de cadena ligera que tienen la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30.

13. El uso de la reivindicación 12, en el que el anticuerpo anti-TLR4 contiene una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27.

14. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que la combinación de anticuerpos comprende además un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente a MD-2 o un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente a un receptor similar a toll seleccionado del grupo que está constituido por receptor 1 similar a toll (TLR1), receptor 5 similar a toll (TLR5) y receptor 6 similar a toll (TLR6).

15. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en el que el sujeto es un ser humano.

16. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, en el que el trastorno inflamatorio es septicemia, una enfermedad autoinmunitaria, un trastorno inflamatorio crónico o un trastorno inflamatorio agudo.

5 17. El uso de la reivindicación 16, en el que el trastorno inflamatorio crónico se selecciona del grupo que está constituido por trastorno inflamatorio del intestino, artritis reumatoide, osteoartritis, esclerosis múltiple, aterosclerosis, asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

10 18. Una composición que comprende un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 4 similar a toll (TLR4), un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente al receptor 2 similar a toll (TLR2) y un anticuerpo neutralizante que se une inmunoespecíficamente a MD-2, en la que el anticuerpo anti-TLR4 comprende tres CDR de cadena pesada idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 23, 24 y 25, respectivamente, y tres CDR de cadena ligera idénticas al menos el 90% a la SEQ ID NOS: 28, 29 y 30, respectivamente, y el anticuerpo anti-TLR2 comprende una región variable de cadena pesada como se muestra en SEQ ID NO: 56 y una región variable de cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 59.