METODO PARA DIAGNOSTICAR ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES.

El método para diagnosticar una enfermedad cardiovascular en un individuo comprendiendo las etapas de:

- proporcionar una muestra sanguínea de un individuo,

- determinar la cantidad de fragmentos de citoqueratina 18 (CK-18) escindidos por caspasa en dicha muestra,

- comparar la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en dicha muestra con la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa presentes en un control de referencia de al menos un individuo que no padece una enfermedad cardiovascular y

- diagnosticar una enfermedad cardiovascular si la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en la muestra está aumentada en comparación con la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en el control de referencia

Método para diagnosticar enfermedades cardiovasculares.

La presente invención se refiere a un método para diagnosticar una enfermedad cardiovascular.

De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS; Ginebra) las enfermedades cardiovasculares son la causa de más de 15 millones de muertes en el mundo cada año. Explican el 50% de todas las muertes en varios países desarrollados y más del 50% en África y en el Oeste y Sudeste Asiático. También son la causa principal de muerte en adultos. Además, muchos incidentes cardiovasculares no son necesariamente letales, pero pueden afectar a la capa- cidad de vivir una vida diaria normal, lo que da como resultado enormes costes de asistencia sanitaria para la sociedad.

Debido a la mejora en las medicaciones agudas y crónicas y los procedimientos quirúrgicos, así como los cambios en el estilo de vida y en la alimentación, ha habido unos descensos significativos en la mortalidad total de las enfermedades cardiovasculares durante las últimas décadas. A pesar de ello, debido a estas altas incidencias y tasas de mortalidad, las enfermedades cardiovasculares son objeto de enormes inversiones por parte de tanto industrias biotecnológicas como farmacéuticas.

Sin embargo, un tratamiento y una prevención eficaces de las enfermedades cardiovasculares no sólo implica la administración de los medicamentos adecuados si no que también necesita herramientas de diagnóstico fiables. Por lo tanto, es de gran importancia, la identificación y el uso de marcadores moleculares de enfermedades cardiovasculares para el diagnóstico y la prevención precoces. Por ejemplo, las troponinas cardiacas las liberan de manera selectiva los miocardiocitos dañados. La especifidad de este acontecimiento es suficientemente alta para producir mejoras en el diagnóstico de trastornos isquémicos cardiacos agudos. Además permite al médico predecir el riesgo y los escenarios de resultados para los pacientes de manera más fiable.

Además, la búsqueda de marcadores biológicos indicativos de la formación de aterosclerosis, de su progreso y desestabilización es de gran importancia en los entornos clínicos de síndromes coronarios agudos y otras entidades clínicas relacionadas con acontecimientos isquémicos, por ejemplo el accidente cerebro-vascular.

A día de hoy, múltiples líneas de evidencia sugieren que la aterosclerosis es una enfermedad inflamatoria crónica e implica componentes del sistema inmune en la aterogénesis. Recientemente, el trabajo de investigación identificó la participación del potente mediador inmune CD40 y su equivalente el ligando de CD40 (CD40L o CD154) de estar implicados en la inflamación. Previamente, se sugirió que los marcadores de la inflamación general tales como la proteína C reactiva de alta sensibilidad (hsCRP) y la interleucina-6, así como el amiloide del suero, estaban relacionados con resultados adversos en pacientes con enfermedad coronaria.

Bancher-Todesca et al (Hypertens in Pregnancy. (2001): 89-98) describe la sobreexpresión de CK-18 en mujeres que padecen hipertensión inducida por el embarazo (HIE).

En el documento WO 99/16789 se describen los compuestos antigénicos relacionados con la apoptosis.

En Nikkari Seppo T et al (Atherosclerosis (98) 1993: 11-16) se describen los autoanticuerpos en enfermedades coronarias por lo que los Autores de dichos estudios especulan sobre la asociación entre la unión de Anticuerpos, entre otros a CK-18 y las enfermedades coronarias.

En Adlbrecht C et al (Europ. J. Clin. Invest. 37 (2007): 372-380) se analizan los niveles elevados de la enzima conversora de interleucina ß y la citoqueratina 18 escindidos por caspasa en el infarto agudo de miocardio.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar métodos para diagnosticar enfermedades cardiovasculares en un individuo. También se describe un método para distinguir la angina de pecho estable de la inestable y medios para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, en particular enfermedades asociadas con la trombosis.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a un método para diagnosticar una enfermedad cardiovascular en un individuo, comprendiendo las etapas de:

- proporcionar una muestra sanguínea de un individuo,

- determinar la cantidad de fragmentos de citoqueratina 18 (CK-18) escindidos por caspasa en dicha muestra,

- comparar la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en dicha muestra con la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa presentes en un control de referencia de al menos un individuo que no padece una enfermedad cardiovascular y

- diagnosticar una enfermedad cardiovascular si la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en la muestra está aumentada en comparación con la cantidad de los fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en el control de referencia.

Además, se descubrió que la cantidad de CK-18 o fragmentos de la misma y de precursor de IL-ß en una muestra de un individuo que padecía o que se sospechaba que padecía una enfermedad cardiovascular en comparación con una muestra de un individuo sano indica una enfermedad cardiovascular. La cantidad de CK-18 o fragmentos de la misma y de precursor de IL-1ß en una muestra de un individuo que padece una enfermedad cardiovascular está aumentada y disminuida, respectivamente, en comparación con la cantidad de dichos marcadores en una muestra obtenida de un individuo sano que no padece una enfermedad cardiovascular.

La inflamación local y sistémica desempeña una función principal en las enfermedades cardiovasculares, en particular en síndromes coronarios agudos (SCA), incluyendo la angina inestable (AI) y el infarto agudo de miocardio (IAM). Distintos datos indican que la apoptosis es un acontecimiento clave durante el desarrollo y el progreso de la placa aterosclerótica. Aunque se ha demostrado claramente que el IAM ocurre como un resultado directo de la necrosis miocítica inducida por isquemia, se ha descrito la apoptosis como una entidad importante que contribuye después de la oclusión de la arteria coronaria. Mecánicamente, la formación de trombos después de la ruptura de la placa supone la oclusión de los vasos en el IAM y contribuye a un flujo comprometido en la AI. La intervención coronaria percutánea urgente (ICP) es la opción de tecnología punta para el tratamiento de pacientes con SCA y se asocia con tasas de reperfusión más altas y mejor resultado que la terapia trombolítica. Sin embargo, la ICP conlleva el riesgo de movilizar material trombótico y trombogénico, produciendo embolización distal y daño microcirculatorio, que puede limitar la recuperación miocárdica.

Se introdujeron varios dispositivos de trombectomía en el área clínica para permitir la fragmentación y eliminación de material trombótico intracoronario en el entorno del IAM. En prospectiva, los ensayos aleatorizados, por ejemplo el dispositivo de trombectomía X-sizer se ha mostrado que mejora el flujo epicardiaco y la resolución del segmento ST. Sin embargo, no se podría demostrar la mejora de la supervivencia o una mejor recuperación miocardiaca en estos estudios. A pesar del efecto de la trombectomía aguda en la supervivencia, no se probaron la función ventricular y la mejora de la calidad de vida en grandes ensayos multicéntricos hasta el día de hoy, la técnica ofrece la posibilidad de recoger muestras sanguíneas del sitio de la trombosis arterial aguda en la arteria coronaria para permitir la investigación de proteínas que se sabe que están asociadas con la inflamación y apoptosis.

La apoptosis se refiere a las alteraciones morfológicas que exhiben las células que están muriendo "activamente" que incluyen la retracción celular, la vesiculización de la membrana, la condensación de la cromatina y la fragmentación del ADN. La muerte celular apoptótica puede ser el resultado de la activación controlada del desarrollo de programas de ejecución endógenos o de la transducción de señales de muerte activadas por una gran variedad de estímulos exógenos. Una vía principal necesita la activación del receptor de la enzima conversora de interleucina 1ß (ECI) y una familia de proteasas de cisteína de tipo proteína 32, homólogas al producto génico del gen de muerte celular ced-3 de Caenorhabditis elegans. Otras proteínas que se conoce que están asociadas con la inflamación y la apoptosis incluyen IL-1ß y el precursor de IL-1ß (IL-1ßp), TNF-a y TNF-R1/CD120a, CD95 y CD95L/CD178, CD40 y CD40L/CD154. Además, los pacientes con AI muestran concentraciones...

1. El método para diagnosticar una enfermedad cardiovascular en un individuo comprendiendo las etapas de:

- proporcionar una muestra sanguínea de un individuo,

- determinar la cantidad de fragmentos de citoqueratina 18 (CK-18) escindidos por caspasa en dicha muestra,

- comparar la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en dicha muestra con la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa presentes en un control de referencia de al menos un individuo que no padece una enfermedad cardiovascular y

- diagnosticar una enfermedad cardiovascular si la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en la muestra está aumentada en comparación con la cantidad de fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa en el control de referencia.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis, una enfermedad coronaria, un síntoma agudo coronario, preferiblemente angina de pecho inestable o infarto agudo de miocardio, angina de pecho estable, accidente cerebro-vascular, preferiblemente accidente cerebro-vascular isquémico, enfermedad inflamatoria o autoinmune asociada con arteriosclerosis o reestenosis.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 a 2, caracterizado por que la cantidad de fragmentos de citoqueratina 18 (CK-18) escindidos por caspasa está determinada inmunológicamente, preferiblemente mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, mediante radioinmunoensayo o mediante análisis de transferencia de Western.

4. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la muestra sanguínea es plasma o suero.

5. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que la muestra sanguínea se obtiene de la arteria femoral.

6. Uso de un kit para el diagnóstico in vitro de una enfermedad cardiovascular, para distinguir entre la angina de pecho estable e inestable o para diagnosticar la angina de pecho estable e inestable en un individuo o para evaluar el riesgo de un individuo de desarrollar un trombo en el sistema cardiovascular, comprendiendo el kit:

- medios para detectar los fragmentos de citoqueratina 18 (CK-18) escindidos por caspasa y

- un control de referencia, en el que

dichos medios comprenden anticuerpos dirigidos contra fragmentos de CK-18 escindidos por caspasa y en los que el control de referencia se obtiene a partir de al menos un individuo que no padece una enfermedad cardiovascular o de al menos un individuo que padece una angina de pecho estable o inestable.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado por que la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis, una enfermedad coronaria, un síntoma coronario agudo, preferiblemente una angina de pecho inestable o infarto agudo de miocardio, angina de pecho estable, accidente cerebro-vascular, arteriosclerosis o reestenosis asociadas a enfermedad inflamatoria o autoinmune.