MÉTODOS DE AUMENTO DE LA FUNCIÓN LINFÁTICA.

Uso de (a) un agente que disminuye la expresión, actividad o nivel de VEGF-A,

el agente seleccionado de (i) un anticuerpo que se une a VEGF-A o VEGFR-2 y disminuye la señalización de VEGF-A, (ii) VEGF-A inactivo, mutado que se une a VEGFR-2 e interrumpe la señalización de VEGF-A, (iii) VEGFR-2 o un fragmento del mismo que se une a VEGF-A e interrumpe la señalización de VEGF-A, (iv) un ácido nucleico de VEGF-A o VEGFR-2 que se puede unir a una secuencia celular de ácido nucleico de VEGF-A o VEGFR-2 y puede inhibir la expresión de VEGF-A o VEGFR-2, por ejemplo, un antisentido, ARNip o ribozimas, (v) inhibidores de la tirosina quinasa del receptor de VEGF, para la preparación de un medicamento para reducir el daño en la piel inducido por UVB crónica o aguda, en donde el medicamento comprende además (b) un agente que aumenta la expresión, actividad o nivel de un f a c t o r l i n f a n g i o g é n i c o , e n d o n d e e l f a c t o r linfangiogénico es VEGF-C, VEGF-D o VEGFR-3, el agente seleccionado de: (i) polipéptido VEGF-C o -D , o u n f r a g m e n t o biológicamente activo del mismo, (ii) un ácido nucleico que codifica un polipéptido VEGFC o -D, o un fragmento biológicamente activo del mismo, o (iii) un ácido nucleico de VEGFR-3

ANTECEDENTES

El sistema linfático vascular está compuesto de una densa red de capilares de paredes finas que drenan la linfa rica en proteínas del espacio extracelular. Sus principales papeles incluyen el mantenimiento de la homeostasis tisular de líquidos y la mediación de la respuesta inmune aferente (Oliver et al. (2002) Genes Dev. 16:773-83; Witte et al. (2001) Microsc. Res. Tech. 55:122-45). Una función conocida de los vasos linfáticos es el drenaje de líquido tisular de tejidos normales e

15 inflamados (Kunstfeld et al. (2004) Blood 104:1048-57). La publicación internacional de patente número WO 2005/097187 describe que el daño en la piel, tal como el daño en la piel inducido por UVB aguda, se puede reducir en un sujeto, administrando a un sujeto que tiene, o está expuesto a, daño en

20 la piel inducido por UVB aguda, un agente que inhibe la señalización de VEGF. El artículo titulado “Upregulation of neuropilin-1 by basic fibroblast growth factor enhances vascular smooth muscle cell migration in response to VEGF” de Liu et al. (Cytokine, vol. 32:5, p. 206-212 (2005)) describe que la neuropilina-1 (NRP-1) es un co-receptor para el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Durante la neovascularización, las células vasculares del músculo liso (VSMC) y pericitos modulan la función de las células endoteliales. Los factores que median NRP-1 en las VSMC humanas (hVSMC) permanecen por elucidar. Se estudiaron varias citoquinas angiogénicas para identificar factores que aumentan la expresión de NRP-1 en hVSMC. El tratamiento de hVSMC con factor de crecimiento de fibroblastos básico (b-FGF) indujo expresiones del ARNm y proteína de NRP-1 mientras que el factor de crecimiento epidérmico, el factor de crecimiento de tipo insulínico-1 e interleuquina-1β no. b-FGF

indujo la fosforilación de Erk-1/2 y JNK. Los inhibidores de MEK1/2 y factor nuclear kappa B (NF-κB) (U0126 y TLCK, respectivamente) bloquearon la capacidad de b-FGF de inducir la expresión del ARNm de NRP-1, pero la inhibición de la actividad 5 JNK (SP600125) o PI3-quinasa (wortmanina) no. Además, el aumento en la expresión de NRP-1 por b-FGF aumentó la migración de hVSMC en respuesta a VEGF165. Este efecto era dependiente de la unión de VEGF165 a VEGFR-2, ya que anticuerpos bloqueantes contra VEGFR-2, pero no contra VEGFR-1, inhibieron la migración 10 inducida por VEGF165. En conclusión, b-FGF aumentó la expresión de NRP-1 en hVSMC que a su vez aumentó el efecto de VEGF165 en migración celular. La migración aumentada de las hVSMC estaba mediada a través de la unión de VEGF165 tanto a NRP-1 como a VEGFR-2, ya que la inhibición de VEGFR-2 en estas células

15 bloqueó los efectos de la migración celular mediados por VEGF. El artículo titulado “Overexpression of VEGF-C causes transient lymphatic hyperplasia but not increased lymphangiogenesis in regenerating skin” de Goldman et al. (Circ. Res., vol. 96:11 p. 1193-9 (2005)) describe que el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF)-C es necesario para la linfangiogénesis y tiene potencial para terapia linfangiogénica en enfermedades que carecen de drenaje linfático adecuado. Sin embargo, la capacidad de VEGF-C de aumentar el crecimiento linfático funcional sostenible en tejidos permanece poco claro. Para abordar esto, se evaluó la sobreexpresión de VEGF-C en linfangiogénesis adulta en piel en regeneración. Se usó un modelo de regeneración de piel de cola de ratón que incorpora una suspensión de células tumorales que sobreexpresan VEGF-C, lo que proporciona un suplemento continuo de exceso de VEGF-C al medio natural de regeneración durante más de 25 días, o células tumorales control transfectadas de otra manera idénticas. Se encontró que el exceso de VEGF-C no aumentó la velocidad de migración de células linfáticas endoteliales (LEC), la densidad de vasos linfáticos o la tasa de funcionalidad, incluso aunque anteriormente estaba presente hiperplasia linfática. Además, la hiperplasia desapareció cuando los niveles de VEGF-C

disminuyeron, lo que se produjo después de 25 días, lo que hace los linfáticos indistinguibles de aquellos en los grupos control. In vitro, se mostró que mientras el VEGF-C derivado de células pudo inducir quimioatracción de LEC a través de una 5 membrana (que implica transmigración de tipo ameboidea), no aumentó la quimioinvasión de LEC en una matriz de fibrina tridimensional (que requiere migración proteolítica). Estos resultados sugieren que mientras que el exceso de VEGF-C puede aumentar la proliferación temprana de LEC y producir hiperplasia 10 de vasos linfáticos, no aumenta la tasa fisiológica de migración

o funcionalidad, y por sí mismo no puede sostener ningún efecto duradero en tamaño, densidad u organización linfática en piel adulta en regeneración.

15 COMPENDIO Se describe que tanto la irradiación aguda como crónica con UVB de piel murina produce agrandamiento importante de vasos linfáticos. Sorprendentemente, estos vasos linfáticos agrandados están funcionalmente deteriorados y son hiperpermeables, detectado mediante linfangiografia intravital. Los niveles de expresión del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF)A, pero no de los factores linfangiogénicos conocidos VEGF-C o – D aumentaron en epidermis irradiada con UVB. La sobreexpresión dirigida de VEGF-A en epidermis de ratones transgénicos produjo agrandamiento y fuga incrementados de vasos linfáticos después de irradiación aguda con UVB, mientras que el bloqueo sistémico de la señalización de VEGF-A previno en gran parte anormalidades en los vasos linfáticos y fotodaño inducido por UVB. En conjunto, estos descubrimientos indican que los vasos linfáticos son diana de fotodaño cutáneo inducido por UVB y que VEGF-A media el deterioro de la función de vasos linfáticos y por tanto contribuye a los afectos adversos de la irradiación de UVB sobre la piel.

En un aspecto, la divulgación presenta métodos de reducir 35 el daño en la piel inducido por UVB disminuyendo la actividad o niveles de VEGF-A en la piel, por ejemplo, en la cara, pecho,

cuello, manos u otras regiones del cuerpo. Estos métodos pueden incluir además aumentar la actividad o niveles de un factor linfangiogénico, por ejemplo, VEGF-C o VEGF-D, en la piel.

En otro aspecto, la divulgación presenta métodos de reducir 5 edema disminuyendo la actividad o niveles de VEGF-A.

En aún otro aspecto, la divulgación presenta métodos de reducir el daño en la piel inducido por UVB, por ejemplo, en la cara, pecho, cuello, manos u otras regiones de cuerpo, fomentando la función linfática.

10 En todavía otro aspecto, la divulgación presenta métodos de cribado para un inhibidor de la actividad de VEGF-A proporcionando una célula con un receptor transmembrana que se puede unir y responder a VEGF-A; poniendo en contacto la célula con un polipéptido que incluye VEGF-A o un fragmento del mismo en presencia de un compuesto de prueba, por ejemplo, un producto

o extracto natural; y evaluando la unión del polipéptido a la célula, en donde un compuesto de prueba que inhibe la unión del polipéptido a la célula es un inhibidor de la actividad de VEGF

A.

20 En aún otro aspecto, la divulgación presenta métodos de cribado para un inhibidor de la actividad VEGF-A al proporcionar un primer polipéptido que incluye una parte de un receptor transmembrana que se puede unir a VEGF-A; poner en contacto el polipéptido con un segundo polipéptido que incluye VEGF-A o un fragmento del mismo en presencia de un compuesto de prueba, por ejemplo un producto o extracto natural; y evaluar la unión del primer polipéptido al segundo polipéptido, en donde un compuesto de prueba que inhibe la unión del primer polipéptido al segundo polipéptido es un inhibidor de la actividad VEGF-A.

30 En todavía otro aspecto, de cribado para un inhibidor de la expresión de VEGF-A, el método comprende: (a) proporcionar una célula que tiene una región promotora de VEGF-A; (b) exponer la célula a radiación UVB; (c) antes, durante o después de b), poner en contacto la célula con un compuesto de prueba, por ejemplo, un producto o extracto natural; y (d) medir la expresión dirigida por la región promotora, en donde un

compuesto de prueba que disminuye la expresión es un inhibidor de la expresión de VEGF-A. En un aspecto, la divulgación presenta un método de tratar a un sujeto que tiene daño en la piel inducido por UVB, por ejemplo, en la cara, pecho, cuello, manos u otras regiones del...

3. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en donde el agente que disminuye la expresión, actividad o nivel de VEGF-A es un antagonista del receptor de VEGF.

4. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en donde el agente que disminuye la expresión, actividad o nivel de VEGF-A es un inhibidor de la actividad tirosina quinasa del receptor de VEGF.

5. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en donde el agente que disminuye la expresión, actividad o nivel de VEGF-A es un anticuerpo anti-VEGF.

6. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en donde el agente que aumenta la expresión, actividad o nivel de un factor linfangiogénico es un polipéptido VEGF-C o –D, o un fragmento biológicamente activo del mismo.

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