Método para medir un analito en sangre completa, que comprende:

una etapa de reacción de formar un sistema de reacción que contiene una muestra que contiene sangre completa, una primera sustancia que está soportada mediante un soporte sólido y se une de manera específica a un analito contenido en la muestra y una segunda sustancia que se une de manera específica al analito para permitir que el analito reaccione con la primera y segunda sustancias, y

una etapa de medición de medir un producto de reacción formado,

en el que dicho sistema de reacción comprende un detergente en el intervalo de concentración del 0,5 - 5% de manera que se impide la hemólisis

Método de medida de sangre completa.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un método para analizar un componente particular contenido en sangre completa en el que se usa sangre completa como muestra.

Antecedentes de la técnica

La medición de componentes en sangre, por ejemplo, antígenos, anticuerpos, proteínas, sustancias endocrinas, etcétera, es clínicamente muy importante. En general, se usa plasma o suero como muestra de sangre en muchos casos, y en tales casos, la sangre completa se separa normalmente en suero o plasma lo más rápidamente posible con el fin de evitar la hemólisis. Esto es porque, por ejemplo, en el campo de las pruebas inmunológicas, si están presentes componentes hemocíticos o se provoca hemólisis en una muestra, pueden haberse provocado fenómenos alterantes tales como la influencia de la hemólisis sobre los sistemas ópticos, la inhibición de la reacción inmunológica por componentes internos de las células sanguíneas y la agregación o adhesión de componentes de la membrana citoplasmática de las células sanguíneas sobre un soporte sólido usado como fase sólida. Por tanto, en las pruebas clínicas habituales, ha sido una práctica común que se centrifugue en primer lugar la sangre completa extraída para eliminar las células sanguíneas, y se use el plasma o suero obtenido como muestra para medición.

Sin embargo, con el fin de eliminar las células sanguíneas, se requieren instrumentos especializados tales como la centrífuga, y el funcionamiento es laborioso. Por tanto, es deseable usar sangre completa tal cual como muestra para medición para médicos en consultas que no tienen tales instalaciones y pruebas urgentes con escaso margen de tiempo.

Para satisfacer los requisitos anteriores, ya se han propuesto diversos métodos de someter a ensayo la propia sangre completa sin separar el suero o plasma. En cuanto a los inmunoensayos, se ha notificado un método que utiliza la coagulación de látex como ensayo homogéneo (método que no requiere separación B/F) como método de medición en el que se provoca de manera intencionada y forzada la hemólisis de las células sanguíneas (publicación de patente japonesa abierta a consulta por el público (Kokai) número 10-48214). En segundo lugar, como métodos de ensayo sin provocar hemólisis de las células sanguíneas, se han notificado un método de ensayo homogéneo que usa luz dispersada por látex (Clinical Chemistry, Vol. 43, 1764-1770 (1997)), un método de ensayo heterogéneo (método que requiere separación B/F) que usa una cubeta de plástico como fase sólida (publicación de patente japonesa abierta a consulta por el público número 6-265554) y un método que usa perlas de poliestireno o partículas magnéticas como fase sólida (publicación de patente internacional sin examinar en japonés (Kohyo) número 2000-508075, documento WO96/04558).

Sin embargo, no puede decirse que ya se hayan establecido métodos de ensayo sumamente sensibles y convenientes que usan sangre completa como muestra incluso mediante el uso de estos métodos. En primer lugar, aunque se han notificado algunos inmunoensayos que usan un ensayo homogéneo como métodos convenientes, un analito es con frecuencia una sustancia contenida en la sangre en una cantidad traza en las pruebas clínicas etcétera, y por tanto generalmente se requiere mucho más someter a ensayo sangre completa usando un ensayo heterogéneo que permite en teoría un ensayo sumamente sensible. En segundo lugar, con los antecedentes de que los soportes sólidos tales como partículas magnéticas se usan ampliamente en un ensayo heterogéneo como fase sólida debido a la simplicidad de la separación B/F, es probable que micropartículas tales como partículas magnéticas se vean influidas, en particular, por células sanguíneas, aunque los soportes sólidos que tienen un tamaño tal que los soportes sólidos no se agregan no provocan ningún problema, como en los casos de perlas que tienen un diámetro del orden de milímetros y placas de plástico. Por ejemplo, cuando se produce hemólisis, sustancias inhibidoras tales como hemoglobina y sustancias derivadas del núcleo de las células, que fluyen fuera del interior de las células sanguíneas hacia un sistema de reacción, pueden provocar agregación no específica de los soportes sólidos o reducir la reacción inmunitaria, afectando de este modo gravemente al ensayo. Además, incluso cuando se usa sangre completa no hemolizada fresca como muestra, si existen células sanguíneas, se vuelve probable que los soportes sólidos de adhieran fácilmente sobre una pared interna del vaso de reacción o una punta de pipeta debido a sustancias de superficie de la membrana de las células sanguíneas o similares, y por tanto pueden provocarse daños tales como imprecisión.

Además, se usan con frecuencia instrumentos y cartuchos para ensayo automático de modo que se lleven a cabo de manera rápida y conveniente tales ensayos de sangre completa tal como se describió anteriormente. Sin embargo, también se producen problemas similares en cada etapa de tales ensayos automáticos. Es decir, dado que los componentes de las células sanguíneas en la sangre completa y los soportes sólidos usados para los ensayos se precipitan con el tiempo, es esencial incluir una etapa de agitar de manera suficiente una muestra que contiene sangre completa antes de los ensayos de modo que se mantienen los componentes de las células sanguíneas uniformes o agitar de manera suficiente la muestra, el soporte sólido, los reactivos, etc. en una etapa de reacción o una etapa de ensayo. En una etapa de agitación de este tipo, se impone una fuerte fuerza sobre las células sanguíneas, y se alteran las células sanguíneas, dando como resultado hemólisis extremadamente fácil. Además, dado que la succión y descarga de la muestra se realizan en cada etapa para transferir sucesivamente la muestra a vasos de reacción objetivos siguiendo las etapas, se impone una fuerte fuerza sobre las células sanguíneas y por tanto se produce fácilmente hemólisis. Además, también se produce fácilmente adhesión y agregación no específica. Por tanto, pueden provocarse con frecuencia errores en los ensayos.

En los últimos años, tales instrumentos y cartuchos para ensayos automáticos tal como se describieron anteriormente también se usan ampliamente en el campo de las pruebas en el lugar de asistencia (POCT), que llaman la atención como prueba de emergencia o prueba llevada a cabo fácilmente por médicos y enfermeras. Por consiguiente, se ha requerido el desarrollo de un método de ensayo que pueda proporcionar resultados de ensayo correctos incluso mediante un ensayo que use tales equipos y sangre completa.

Descripción de la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar medios para someter a ensayo de manera rápida y conveniente un analito en sangre completa con alta sensibilidad usando la sangre completa tal cual es como muestra.

Los inventores de la presente invención llevaron a cabo diversos estudios con el fin de conseguir el objeto mencionado anteriormente. Como resultado, se encontró que, en un método para medir un analito contenido en una muestra que contenía sangre completa, si se realizaba una reacción en presencia de un detergente y en un estado en el que no se alteran las células sanguíneas, la medición podía llevarse a cabo en un corto periodo de tiempo con alta sensibilidad sin realizar la separación de suero/plasma mediante centrifugación o similares.

Por tanto, la presente invención proporciona un método para medir un analito, que comprende una etapa de reacción de formar de un sistema de reacción que incluye una muestra que contiene sangre completa, una primera sustancia soportada mediante un soporte sólido y que se une de manera específica a un analito contenido en la muestra y una segunda sustancia que se une de manera específica al analito y permitir que el analito reaccione con la primera y segunda sustancias y una etapa de ensayo de someter a ensayo un producto de reacción formado, en el que (1) la etapa de reacción se realiza en un estado en el que no se alteran las células sanguíneas, y (2) al menos la etapa de reacción se realiza en presencia de una cantidad suficiente de detergente que no provoca hemólisis, no inhibe las reacciones del analito con la primera y segunda sustancias que se unen de manera específica al analito y puede impedir la influencia sobre el sistema de reacción de un componente que existe en el sistema de reacción.

Además, otra realización de la presente invención es un método para medir un analito en sangre completa, que comprende: