Un procedimiento in vitro para la detección o predicción de la gravedad de una enfermedad cardiovascular en unpaciente con alteración de la consciencia,

en el que se analiza la cantidad y/o actividad de una proteasa de escisión delfactor de von Villebrand y en el que dicha enfermedad cerebrovascular se selecciona del grupo que consiste en infartocerebral aterotrombótico, infarto de cerebro cardioembólico e infarto cerebral lacunar.

Procedimiento de detección de afección en paciente con alteración de la consciencia

Campo técnico

La presente divulgación se refiere a un procedimiento para la detección (determinación o diagnóstico) de una afección en un paciente con alteración de la consciencia (de forma particular, un paciente inconsciente tal como un paciente con estupor o coma) . De acuerdo con la presente descripción se puede juzgar el grado real de gravedad, o se puede predecir la gravedad un en futuro, analizando (preferiblemente midiendo de forma cuantitativa) la cantidad (concentración) y/o actividad del enzima de una proteasa de escisión del factor de von Willebrand (en lo sucesivo denominada como vWF) contenida en una muestra biológica (por ejemplo, sangre) tomada de un sujeto.

Técnica anterior

La apoplejía era, antes de 1980, la principal causa de muerte en este país, pero ha disminuido en un factor de aproximadamente 4 durante los últimos 20 años, debido al progreso en la tecnología médica y al desarrollo de cuidados médicos de emergencia. Sin embargo, en la actualidad un rápido avance de una sociedad en envejecimiento tiende a aumentar de nuevo el número de pacientes con apoplejía. Para la prevención de la misma es importante el cuidado diario de la salud. Además se puede prolongar la vida del paciente determinando exactamente la causa de alteración de la consciencia en una fase temprana de estupor o coma provocado por apoplejía o similares, y seleccionando una o más opciones apropiadas (un tratamiento, valoración de pronóstico o similares) .

Las apoplejías son trastornos cerebrales provocados por anormalidades en los vasos sanguíneos (un trastorno paroxismal en el que el vaso sanguíneo cerebral se rompe u obstruye debido a una determinada causa) . Es importante un pronto y apropiado tratamiento debido a que la apoplejía pone en peligro la vida o deja secuelas tales como parálisis

o logopatía. Las apoplejías se pueden clasificar en dos categorías principales: hemorragia debida a la ruptura de un vaso sanguíneo cerebral e isquemia debido al bloqueo de un vaso sanguíneo cerebral. Las apoplejías hemorrágicas incluyen hemorragia subaracnoidea y hemorragia intracerebral, y apoplejías isquémicas incluyen infarto cerebral y ataque isquémico transitorio.

El infarto cerebral, provocado por el bloqueo de una arteria cerebral por un trombo, es el tipo principal de apoplejía que es la tercera causa de muerte en Japón, y presenta una alta tasa de mortalidad. El infarto cerebral es un estado en el que una arteria cerebral se obstruida debido a una determinada causa y, como consecuencia, el flujo sanguíneo hasta los tejidos subsiguientes se altera o reduce. Aproximadamente el 20% de todas las causas de muerte son enfermedades cerebrovasculares, y el infarto cerebral llega a aproximadamente el 50% de estas enfermedades. Los infartos cerebrales se pueden clasificar en dos categorías principales: embolia cerebral y trombosis cerebral. La embolia cerebral no es provocada directamente por anormalidades en las arterias cerebrales, pero es provocada por un agregado (tal como sangre, proteínas, lípido, que se forma en el corazón, debido a una enfermedad coronaria, se acelera hasta arterias cerebrales y bloquea la arteria cerebral. Por el contrario la trombosis cerebral se desarrolla debido a la arteriosclersosis de las arterias cerebrales por sí mismas. La trombosis cerebral es más frecuente que la embolia cerebral.

Al igual que la apoplejía, las causas de estupor o coma incluyen, por ejemplo, el daño del tronco cerebral debido a lesión de cabeza, alcoholismo, una sobredosis de un fármaco tal como un sedante, paro cardiaco, aneurisma, una enfermedad pulmonar grave, inhalación de monóxido de carbono, ictus epiléptico, hipotiroidismo, disfunción hepática, disfunción renal, hipoglucemia provocada por diabetes. Por tanto son necesarios muchos exámenes para tomar una decisión precisa. Por ejemplo, se pueden comprobar niveles de sangre en azúcar, sodio, alcohol, oxígeno, dióxido de carbono, conteo de glóbulos rojos y células de glóbulos blancos, o azúcar y sustancias tóxicas en orina. Además se puede medir la troponina o una proteína de unión de ácidos grasos específica del corazón (H-FABP) para determinar si el estupor o coma en un paciente es provocado por infarto de miocardio, y se puede seleccionar un tratamiento apropiado. Sin embargo ejemplos de un procedimiento de diagnóstico para arteriosclerosis como una causa de trombosis cerebral incluye exámenes no invasivos tales como fundoscopia, CT de rayos X, MRI, un procedimiento de velocidad de onda pulsante, o control de flujo sanguíneo usando una onda ultrasónica, y exámenes invasivos, tales como angiografía, angioscopía, o análisis por ultrasonidos intravascular. Estos procedimientos son insuficientes para controlar la extensión de enfermedad vascular arteriosclerótica o el progreso de sus síntomas.

Se ha sugerido que una proteasa de escisión del factor de von Willebrand (en lo sucesivo designado como vWF) [en adelante denominado como ADAMTS13 (otro nombre de la proteasa de escisión de vWF) ] está implicada en el comienzo de la púrpura trombocitopénica trombótica (TTP) que es muy grave y presenta una elevada tasa de mortalidad; la proteasa de escisión de vWF se purificó a partir de plasma (referencia no patente 1) ; y se identificó el gen mediante clonación con ADNc. Se ha revelado actualmente que mutaciones genéticas de ADAMTS13 reducen de forma reseñable la actividad de escisión de vWF (referencia no patente 2) . Se desarrolló recientemente un

inmunoensayo de enzima que usa anticuerpos monoclonales o policlonales específicos de ADAMTS13 (referencia de patente 1) , y se estableció un procedimiento para la detección de causas de trombosis implicadas en la agregación de las plaquetas, y se estableció el grado de trombofilia en trombosis. Este procedimiento se usó para encontrar que las concentraciones de ADAMTS13 contenidas en muestras de plasma recogidas de pacientes con trombosis eran significativamente reducidas en comparación con las de personas sanas.

Por ejemplo, la referencia de patente 2 divulga un procedimiento para la detección de trombosis o el grado de trombofilia, caracterizado por medida de ADAMTS13, y describe que ejemplos de trombosis incluyen leucemia mieloide aguda o crónica, leucemia promielocítica aguda, lupus eritrematoso sistémico, embolia pulmonar, infarto cerebral, enfermedad veno-oclusiva, leucemia linfocítica aguda, microangiopatía trombótica, púrpura trombocitopénica trombótica, síndrome urémico hemolítico, y trombosis venosa profunda. Además la referencia de patente 3 describe un procedimiento de detección de trombosis de plaqueta o disfunción de órgano en un paciente que sufre de coagulación intravascular diseminada (DIC) o síndrome de respuesta inflamatoria sistémico (SIRS) , analizando ADAMTS13 y/o un factor de escisión del mismo (tal como elastasa, plasmina o trombina) .

Como un procedimiento convencional para la determinación de la actividad de ADAMTS13 se usó un procedimiento de detección de multímeros de vWF grandes, usando una combinación de una electroforesis en SDS-agarosa, y autorradiografía en Western blotting (referencia no patente 3) . Además se desarrolló FRETS-VWF73 que se prepara introduciendo un grupo fluorescente y un grupo interruptor en 73 residuos del dominio A2 (es decir, los sitios de escisión específicos por ADAMTS13) de vWF, y permitió que se llevara a cabo de forma conveniente la medida de la actividad de ADAMTS13 (referencia no patente 4) .

[Referencia de patente 1] WO 2004/029242

[Referencia de patente 2] WO 2005/062054

[Referencia de patente 3] WO 2006/049300

[Referencia no patente 1] K. Fujikawa y col., Blood, (EEUU) , 2001, vol. 98, p.1662-6

[Referencia no patente 2] G. G. Levy y col., Nature, (Reino Unido) , 2001, vol. 413, p. 488-494

[Referencia no patente 3] M.Furlan y col., Blood, (EEUU) , 1996, vol. 87, p. 4223-4234

[Referencia no patente 4] Kokame K y col., The British Journal of Haematology, (United Kingdom) , 2005, vol. 129, p.

Divulgación de la invención

Problemas a resolver

Como se describió anteriormente el estupor o coma es provocado por distintos orígenes y es importante para determinar una causa para cada paciente en una fase temprana. De forma particular hay varios procedimientos de examen para diagnosticar... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento in vitro para la detección o predicción de la gravedad de una enfermedad cardiovascular en un paciente con alteración de la consciencia, en el que se analiza la cantidad y/o actividad de una proteasa de escisión del factor de von Villebrand y en el que dicha enfermedad cerebrovascular se selecciona del grupo que consiste en infarto

cerebral aterotrombótico, infarto de cerebro cardioembólico e infarto cerebral lacunar.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cantidad de dicha proteasa de escisión del factor de von Villebrand se analiza con un procedimiento inmunológico usando un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une específicamente a la proteasa de escisión del factor de von Villebrand.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la actividad de una proteasa de escisión del factor de 10 von Villebrand se analiza usando un factor de von Willebrand o un fragmento del mismo.

4. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicha alteración de la consciencia es estupor o coma.