Un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica para analizar un antígeno o anticuerpo en una muestra,

que comprende las etapas de:

(1) tratar albúmina con una proteasa para preparar una albúmina fragmentada;

(2) someter una muestra que puede contener el antígeno o anticuerpo a análisis en contacto con la albúmina fragmentada preparada por tratamiento de proteasa en la etapa anterior (1); y

(3) poner una mezcla obtenida en la etapa anterior (2) en contacto con partículas de látex que llevan un anticuerpo o antígeno que se hace reaccionar específicamente con el antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo y analizar una turbidez causada por una reacción de aglutinación de látex.

Procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica y reactivo para el mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica y a un reactivo de turbidimetría de látex inmunológica, haciendo uso cada uno de una reacción antígeno-anticuerpo. Más particularmente, la presente invención se refiere a un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica y a un reactivo de turbidimetría de látex inmunológica, siendo cada uno capaz de reducir una reacción de aglutinación no específica y aplicándose preferentemente en un analizador automatizado. El término "analizar" como se usa en el presente documento incluye una medición para determinar cuantitativa o semicuantitativamente una cantidad de un antígeno o anticuerpo para someterse a ensayos y una detección para juzgar una presencia o ausencia de un antígeno o anticuerpo para someterse a ensayos.

Técnica anterior

Los reactivos de ensayo inmunológico que hacen uso de una reacción antígeno-anticuerpo se usan como un reactivo para analizar cuantitativamente un componente particular, tal como un antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo, en una muestra líquida. De los reactivos, se usa ampliamente un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica, porque se puede llevar a cabo una determinación cuantitativa por un analizador automatizado y por procedimientos fáciles. En el procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica, se analizó una aglutinación de las partículas de látex por un cambio en la absorbancia o por una turbidez. La aglutinación está causada por una reacción antígeno-anticuerpo entre las partículas de látex que llevan en ellas antígenos o anticuerpos y anticuerpos o antígenos en una muestra líquida.

Recientemente, se ha deseado un análisis simple, rápido y de sensibilidad alta en un campo de análisis usando un analizador automático como anteriormente. Así, se han requerido un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica y un reactivo para ello para satisfacer la necesidad anterior.

Hasta ahora, el reactivo de turbidimetría de látex inmunológica contiene una seroalbúmina bovina (en adelante referida algunas veces como BSA) y/o una BSA modificada térmicamente, para potenciar una sensibilidad, acelerar una dispersión de partículas de látex suspendidas, o evitar una aglutinación no específica causada por una unión no específica de proteínas o similares en una muestra, al látex. Esto es debido a que algunos de los pacientes a partir de los que se toman muestras tienen anticuerpos frente a BSA, debido a un cambio reciente de hábitos alimentarios. El BSA añadido a un reactivo de análisis puede aceptar un anticuerpo anti-BSA del paciente. Por ejemplo, en un reactivo de turbidimetría de látex inmunológica que lleva un antígeno proveniente de Streptococcus haemolyticus (estreptolisina O; en adelante referido algunas veces como SLO) para detectar un anticuerpo de SLO, se añade BSA térmicamente modificada para absorber la reacción no específica. Sin embargo, aún quedan muestras que muestranuna reacción no específica que no puede absorberse sólo por una adición de la BSA térmicamente modificada. Éste ha sido un problema a resolverse.

Database Medline, US National Librar y of Medicine, Bethesda, MD, EE.UU., octubre de 1999, Hanai Y. y cols., Número de Acceso de Base de Datos NLM10616286 revela un procedimiento de turbidimetría de microagregación de látex para detección de O-anticuerpos de anti-estreptolisina.

Falchuk K.R. y cols., Gastroenterology, vol. 70, n.º: 1976, p. 5-8 se refiere a anticuerpos circulantes frente a albúmina bovina en colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn, en particular a la caracterización de la respuesta de anticuerpos.

El documento JP 58 144 748 A se refiere a un reactivo de látex para reacciones inmunológicas con estabilidad y sensibilidad mejoradas.

El documento JP 11 023 573 A también revela un procedimiento de inmunoagregación de látex usando albúmina desnaturalizada térmicamente.

El documento US 4.427.781 se refiere a inmunoensayos de proteínas y a la evitación de interferencia del ensayo con otras proteínas tales como factores del complemento en el fluido para someterse a ensayo.

Divulgación de la invención De acuerdo con ello, un objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica capaz de evitar una influencia de una reacción no específica y una mejora de una evitación tal, manteniendo mientras una especificidad alta para un antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo y un reactivo para ello. En particular, el objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica capaz de un análisis fácil, rápido y de alta sensibilidad cuando se aplica a un analizador automatizado y un reactivo para ello.

El problema anterior puede resolverse por la presente invención, es decir, un procedimiento de turbidimetría inmunológica para analizar antígeno o anticuerpo en una muestra de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende las etapas de:

(1) poner una muestra que puede contener el antígeno o anticuerpo a analizarse en contacto con una albúmina tratada con proteasa; y

(2) poner una mezcla obtenida en la etapa anterior (1) en contacto con partículas de látex que llevan un anticuerpo

o antígeno que se hace reaccionar específicamente con el antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo y analizar una turbidez causada por una reacción de aglutinación de látex.

Adicionalmente, la presente invención se refiere a un reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con la reivindicación 6 que comprende (1) un primer componente que contiene la albúmina tratada por proteasa y (2) un segundo componente que contiene partículas de látex que lleva un anticuerpo o antígeno que se hace reaccionar específicamente con un antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo.

Mejor forma de llevar a cabo la invención De acuerdo con la presente invención, una albúmina tratada con proteasa, preferentemente una seroalbúmina tratada con proteasa, más preferentemente una BSA tratada con proteasa, se usa como un agente para reducir una reacción no específica en un análisis de turbidimetría de látex inmunológica, por lo que una reacción no específica de las partículas de látex se puede evitar sin bajar una especificidad de reactivo.

La expresión "análisis de turbidimetría de látex inmunológica" como se usa en el presente documento quiere decir un análisis óptico de un fenómeno de aglutinación acompañado por una reacción inmunológica causada en transportadores de látex que llevan un antígeno (o anticuerpo) cuando se ponen en contacto con un antígeno (o anticuerpo) en una muestra, por un cambio de una absorbancia o una turbidez.

Una muestra que puede analizarse por el procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica de la presente invención o el reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de la presente invención no está particularmente limitada, mientras sea una muestra que pueda contener posiblemente un antígeno o anticuerpo a analizarse. Por ejemplo, la muestra puede ser un líquido tomado de un cuerpo vivo y usado generalmente en un examen clínico, tal como un suero, plasma, u orina.

La albúmina tratada con proteasa usada en la presente invención no está particularmente limitada, mientras sea una albúmina fragmentada, preferentemente una seroalbúmina fragmentada, más preferentemente una BSA fragmentada, preparada por un tratamiento de proteasa. La albúmina a tratarse puede ser una albúmina preparada a partir de una fuente que se da en la naturaleza, una albúmina recombinante (preferentemente una albúmina bovina recombinante) , o una albúmina sintetizada parcialmente. La presente invención se explicará más adelante con respecto a la BSA, que es una realización preferida.

La proteasa no está particularmente limitada, mientras pueda reducir la reacción de aglutinación no específica sin bajar una sensibilidad del reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de la presente invención, por ejemplo, pepsina, papaína, o tripsina. La proteasa anterior puede usarse individualmente o en combinación de la misma. De las proteasas como anteriormente, la pepsina es preferible con respecto al coste y la estabilidad. Por ejemplo, la BSA tratada con proteasa puede prepararse manteniendo la BSA en una condición ácida y añadiendo... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica para analizar un antígeno o anticuerpo en una muestra, que comprende las etapas de:

(1) tratar albúmina con una proteasa para preparar una albúmina fragmentada;

(2) someter una muestra que puede contener el antígeno o anticuerpo a análisis en contacto con la albúmina fragmentada preparada por tratamiento de proteasa en la etapa anterior (1) ; y

(3) poner una mezcla obtenida en la etapa anterior (2) en contacto con partículas de látex que llevan un

anticuerpo o antígeno que se hace reaccionar específicamente con el antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo 10 y analizar una turbidez causada por una reacción de aglutinación de látex.

2. El procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la albúmina es una seroalbúmina.

3. El procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con la reivindicación 2 en el que la seroalbúmina es una seroalbúmina bovina.

15 4. El procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que la proteasa es una pepsina.

5. El procedimiento de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que el anticuerpo a analizarse es un anticuerpo anti-estreptolisina O y el antígeno llevado en las partículas de látex es un antígeno de estreptolisina O.

20 6. Un sistema de reactivos de turbidimetría de látex inmunológica que comprende

(1) un primer componente reactivo que contiene una albúmina fragmentada preparada por tratamiento de proteasa; y

(2) un segundo componente reactivo que contiene partículas de látex que llevan un anticuerpo o antígeno que reacciona específicamente con un antígeno o anticuerpo para someterse a ensayo.

25 7. El reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con la reivindicación 6 en el que la albúmina es una seroalbúmina.

8. El reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con la reivindicación 7 en el que la seroalbúmina es una seroalbúmina bovina.

9. El reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8 en el 30 que la proteasa es una pepsina.

10. El reactivo de turbidimetría de látex inmunológica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9 en el que el anticuerpo a ser analizado es un anticuerpo anti-estreptolisina O y el antígeno llevado en las partículas de látex es un antígeno de estreptolisina O.