Procedimiento de producción de partículas de polímero.

Un procedimiento de producción de partículas de polímero que tienen un antígeno o un anticuerpo introducido en la superficie de las mismas,

caracterizado porque comprende la etapa de llevar a cabo la polimerización en miniemulsión usando un monómero, un iniciador de polimerización por radicales, un emulsionante y un hidrófobo en presencia del antígeno o anticuerpo, por medio de lo cual producir las partículas de polímero, en las que el iniciador de polimerización por radicales es un iniciador redox.

Procedimiento de producciïn de partïculas de polïmero Campo tïcnico La presente invenciïn se refiere a un procedimiento de producciïn de partïculas de polïmero que presentan un antïgeno o un anticuerpo introducido en la superficie de las mismas, mediante la coexistencia del antïgeno o anticuerpo en la polimerizaciïn en miniemulsiïn.

Tïcnica anterior

En el campo de ensayos de diagnïstico clïnicos, diversas sustancias, que se pueden usar como un ïndice de diagnïstico de enfermedades, deberïa medirse rïpidamente y de forma precisa en un gran nïmero de muestras, y se deberïa darse una realimentaciïn rïpida y precisa de los resultados a una sala de tratamiento. En particular, la medida inmunolïgica basada en una reacciïn antïgeno-anticuerpo se usa ampliamente para cuantificar de forma exacta una cantidad traza de una sustancia que se va a analizar. A este respecto, como un procedimiento para la mejora de la sensibilidad a detecciïn o precisiïn, se lleva a cabo un procedimiento de aglutinaciïn en lïtex que usa partïculas hechas de un polïmero sintïtico tal como poliestireno (el denominado lïtex) , en el que se conoce un antïgeno o anticuerpo especïfico para una sustancia que se va a analizar sobre la superficie de las partïculas. El procedimiento de aglutinaciïn del lïtex es un procedimiento para la medida rïpida de una sustancia que se va a analizar, mediante detecciïn visual u ïptica de un grado de aglutinaciïn de lïtex-partïcula provocado por una reacciïn de la sustancia que se va a analizar con el antïgeno o anticuerpo inmovilizado en las partïculas de lïtex.

Adicionalmente, tambiïn es ampliamente usado un procedimiento sïndwich, que usa partïculas magnïticas en lugar de partïculas de lïtex, atrapando una sustancia que se va a analizar con un primer anticuerpo inmovilizado sobre las partïculas magnïticas, lavando las partïculas magnïticas acumuladas con un imïn para eliminar sustancias no reaccionadas y similares (la denominada separaciïn B/F) , y aïadiendo un segundo anticuerpo etiquetado con una sustancia que genera seïal tal como un enzima o un agente fluorescente para llevar a cabo de este modo el anïlisis.

Casi todas las sustancias a analizar, que son cuantificadas usando una reacciïn antïgeno-anticuerpo, son por lo general componentes traza contenidas en muestras biolïgicas y, por tanto, es importante la precisiïn en un intervalo a baja concentraciïn. Sin embargo, debido a que hay un caso donde se observa un nivel anormalmente alto de una sustancia que se va a medir de acuerdo con el progreso de una enfermedad, se desea un reactivo capaz de medir de forma precisa desde un intervalo a baja concentraciïn hasta un intervalo a alta concentraciïn en el campo de ensayos de diagnïstico clïnicos.

En procedimientos que usan partïculas de lïtex que incluyen el procedimiento de aglutinaciïn en lïtex y el procedimiento sïndwich, es esencial inmovilizar un antïgeno o anticuerpo sobre la superficie de las partïculas de lïtex, y se usa un procedimiento de inmovilizaciïn fïsica o quïmica del antïgeno o anticuerpo sobre la superficie. Por ejemplo, se usa un procedimiento de inmovilizaciïn directamente del antïgeno o anticuerpo sobre las partïculas de lïtex mediante adsorciïn fïsica, o un procedimiento de uniïn del antïgeno o anticuerpo a las partïculas de lïtex mediante una uniïn covalente con un grupo funcional localizado sobre la superficie de las partïculas de lïtex, por ejemplo, un grupo amino, un grupo carboxilo, un grupo mercapto, un grupo hidroxilo, un grupo aldehïdo, un grupo epoxi, o similares.

Sin embargo una cantidad del antïgeno o anticuerpo capaz de ser portado en la superficie del lïtex se ve limitada en estos procedimientos de uniïn fïsica o quïmica, y por tanto, hay un lïmite para un intervalo de medida o una sensibilidad de detecciïn cuando el procedimiento de aglutinaciïn del lïtex o el procedimiento del sïndwich se lleva a cabo. Esto es, las propiedades (por ejemplo, una carga de superficie, una tasa de grupo funcional introducido, una distribuciïn del tamaïo de partïcula, o similares) de las partïculas de lïtex de por sï no son uniformes entre diferentes lotes o fabricantes, y por tanto, aunque si un procedimiento de uniïn de antïgeno o anticuerpo a partïculas de lïtex fuese uniforme, las propiedades de las partïculas de lïtex unido a anticuerpo no son uniformes. Por ejemplo, en los procedimientos de uniïn fïsica o quïmica de un antïgeno o anticuerpo a la superficie del lïtex, no toda la cantidad del antïgeno o anticuerpo se une al lïtex, y el antïgeno o anticuerpo no unido se elimina mediante lavado tras el procedimiento de uniïn, o el antïgeno o anticuerpo unido se pelan frecuentemente del lïtex mediante centrifugaciïn o dispersiïn. Es decir, un cambio en la cantidad de una uniïn de antïgeno o anticuerpo afecta a un intervalo de medida o a una sensibilidad de detecciïn.

Ademïs, como un nuevo problema surgido recientemente, se han observado a veces muestras que provocan una reacciïn no especïfica, como se muestra en la referencia no de patente 1. Cuando un antïgeno o anticuerpo se une a la superficie de partïculas de lïtex, el antïgeno o anticuerpo se desnaturaliza estructuralmente, y es provocada la reacciïn no especïfica por “una sustancia que se une a la parte desnaturalizada” contenida en las muestras. Debido a la reacciïn no especïfica, la fiabilidad de los valores medidos se pierde, y no se puede hacer un diagnïstico exacto. Este problema no se solventarïa con exïmenes individuales como para un antïgeno o anticuerpo, o partïculas de lïtex, y es muy difïcil de resolver.

Referencia no de patente 1: Rinsho Byori (The Japanese Journal of Clinical Pathology) , Agosto de 2000, vol. 48 nï 8, pïginas 760-763.

El documento WO-A-02/02647 describe un procedimiento para la producciïn de partïculas de tamaïo nanomïtrico que presentan sitios de reconocimiento especïficos de la molïcula, el procedimiento comprende la formaciïn de una emulsiïn que comprende dos fases no miscibles entre sï, en las que la emulsiïn contiene a) al menos un monïmero, b) al menos un agente que da especificidad de molïcula, c) de forma opcional al menos un iniciador, d) opcionalmente al menos un agente reticulante, y e) al menos un emulsionante; y subsiguientemente llevar a cabo una polimerizaciïn en emulsiïn. La polimerizaciïn en emulsiïn se inicia tïrmicamente o fotoquïmicamente.

Divulgaciïn de la invenciïn Problemas a resolver por la invenciïn Los presentes inventores has llevado a cabo estudios intensivos de un procedimiento de uniïn de un antïgeno o anticuerpo a la superficie del lïtex, en lugar de los procedimientos de uniïn fïsica o quïmica convencionales anteriores, y encontraron que cuando un antïgeno o anticuerpo coexisten como una proteïna, se pueden obtener partïculas de lïtex en las que el antïgeno o anticuerpo es introducido en la superficie de las partïculas de lïtex una vez que la sïntesis se complete. Los presentes inventores han encontrado, ademïs de forma sorprendente, que las partïculas de lïtex muestran una mayor reactividad a una sustancia que se analiza en comparaciïn con reactivos convencionales en base a la adsorciïn fïsica o similares, mientras que las propiedades del antïgeno o anticuerpo introducido se mantienen, y que el antïgeno o anticuerpo introducido en la superficie de las partïculas de lïtex no se desnaturaliza estructuralmente con la uniïn, y por tanto, pueden evitarse reacciones no especïficas con muestras que reaccionan no especïficamente con reactivos convencionales. Los presentes inventores encontraron que un monïmero puede polimerizarse en condiciones especïficas, en un estado que el antïgeno o anticuerpo coexiste en la reacciïn sintïtica de partïculas de lïtex y se complementa en la presente invenciïn.

Un objeto de la presente invenciïn es proporcionar un procedimiento nuevo de producciïn e partïculas de polïmero que puedan proporcionar un reactivo para anïlisis inmunolïgico, que presente una sensibilidad a la detecciïn excelente y sea capaz de evitar la reacciïn no especïfica que tiene lugar en procedimientos convencionales.

Medios para resolver los problemas El problema se puede resolver con la presente invenciïn, un procedimiento para la producciïn de partïculas de polïmero que presenta un antïgeno o un anticuerpo introducido en la superficie del mismo, caracterizado porque comprende la etapa de llevar a cabo la polimerizaciïn en miniemulsiïn usando un monïmero, un iniciador de polimerizaciïn por radicales, un emulsionantes, y un hidrïfobo en presencia del antïgeno o anticuerpo con el que se producen las partïculas de polïmero, en el que el iniciador de la... [Seguir leyendo]

1.Un procedimiento de producciïn de partïculas de polïmero que tienen un antïgeno o un anticuerpo introducido en la superficie de las mismas, caracterizado porque comprende la etapa de llevar a cabo la polimerizaciïn en miniemulsiïn usando un monïmero, un iniciador de polimerizaciïn por radicales, un emulsionante y un hidrïfobo en presencia del

antïgeno o anticuerpo, por medio de lo cual producir las partïculas de polïmero, en las que el iniciador de polimerizaciïn por radicales es un iniciador redox.

2.El procedimiento de acuerdo con la reivindicaciïn 1, en el que la reacciïn de polimerizaciïn se lleva a cabo a baja temperatura en la polimerizaciïn en miniemulsiïn.

3.El procedimiento de acuerdo con la reivindicaciïn 2, en el que la reacciïn de polimerizaciïn se lleva a cabo de 0 a 40ï 10 C.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaciïn 1 a 3, en el que el iniciador redox es una combinaciïn de ïcido ascïrbico y H2O2.

5.El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el emulsionante es un tensioactivo.

6. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el emulsionante es un tensioactivo polimïrico que tiene una cadena de polietilenglicol.

7.El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el hidrïfobo es hexadecano o poliestireno.