Procedimiento para detectar trombosis plaquetaria o fallo orgánico.

Un procedimiento de predicción de la cantidad de una proteasa de escisión del factor de von Willebrand en unpaciente que padece coagulación intravascular diseminada o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica,

comprendiendo dicho procedimiento:

analizar una muestra de un fluido corporal del paciente para un factor de escisión de dicha proteasa de escisióndel factor de von Willebrand, en el que dicho factor es una proteasa seleccionada del grupo que consiste enelastasa, plasmina y trombina, en el que un incremento de la cantidad de dicho factor de escisión es indicativode un descenso de la cantidad de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand.

Procedimiento para detectar trombosis plaquetaria o fallo orgánico

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para detectar trombosis plaquetaria o fallo orgánico, particularmente en un paciente que padece coagulación intravascular diseminada (CID) o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) . De acuerdo con la presente invención puede analizarse una proteasa de escisión del factor de von Willebrand (FVW) y/o un factor de escisión de la misma contenidos en una muestra biológica tal como sangre recogida de un sujeto, particularmente un paciente que padece CID o SRIS, para detectar trombosis plaquetaria o fallo orgánico. La detección de trombosis plaquetaria o fallo orgánico incluye, por ejemplo, la detección o predicción de la formación de un trombo plaquetario, la predicción del desarrollo de trombosis o fallo orgánico (es decir, una evaluación del riesgo de desarrollarse) , el dictamen de la presencia o ausencia de trombosis o fallo orgánico, el pronóstico de la trombosis o fallo orgánico, el seguimiento, y la decisión acerca de un tratamiento.

Antecedentes de la técnica En la CID, se forman microtrombos en el sistema microvascular, en presencia de una enfermedad grave subyacente. Los microtrombos dañan la microcirculación y causan una disfunción orgánica o una tendencia a hemorragias. Los síntomas de CID se asocian con SRIS. Se observan los siguientes tres fallos o reacciones en CID:

(1) La formación de microtrombos causa un fallo microcirculatorio y una diversidad de órganos se vuelven disfuncionales debido a isquemia.

(2) La formación de microtrombos favorece una coagulopatía de consumo, es decir, el incremento de la producción del factor tisular en la superficie de las células endoteliales conduce a la activación de la ruta extrínseca de la coagulación. Además, se consumen los factores de coagulación y las plaquetas, y se produce una tendencia a hemorragias.

(3) Hiperfibrinolisis, es decir, el sistema fibrinolítico activado de acuerdo con la activación de la coagulación, genera plasmina, que degrada la fibrina. Cuando el inhibidor de plasmina !2 (IP!2) , que inhibe la plasmina, se consume y desciende a menos del 60% del nivel normal, la plasmina degrada la fibrina y se produce una tendencia a hemorragias.

En la CID inducida por sepsis, los monocitos (macrófagos) generan citocinas, tales como factores de necrosis tumoral (TNF-a) o interleucinas (IL-1∀) , que activan los neutrófilos. El oxígeno activo y la elastasa producidos por los neutrófilos dañan las células endoteliales vasculares, lo que conduce a la hiperpermeabilidad del endotelio vascular y al espasmo vascular. Como resultado, se daña la microcirculación. Además, se considera que los monocitos per se y las células endoteliales vasculares se activan, y producen factores tisulares en la superficie de las células endoteliales para formar microtrombos. Esta formación de microtrombos agrava el fallo microcirculatorio y causa fallo multiorgánico (FMO) . Según un concepto popular reciente de SRIS, se considera que este FMO se produce por una reacción inflamatoria sistémica. En el síndrome de dificultad respiratoria del adulto (SDRA) , las plaquetas se concentran en la circulación pulmonar, y se produce una oclusión de la arteria pulmonar. En el SRIS la reacción inflamatoria no la causan ni una reacción a un antígeno específico ni un aumento de las citocinas. El SRIS es un síndrome en el que la reacción inflamatoria se activa, sin una diana específica, por una reacción no específica con invasión del cuerpo vivo y una producción incontrolada de citocinas que produce FMO grave (referencias no de patente 1 y 2) .

El SRIS se clasifica en SRIS no infeccioso y sepsis. El SRIS no infeccioso se produce por choque, lesiones, quemaduras, o pancreatitis aguda, y la sepsis se produce por bacteriemia de varias bacterias patógenas, u otras enfermedades infecciosas graves. La sepsis es una respuesta biológica inmune per se contra la invasión de un agente patógeno, una lesión de un tejido, o anoxia, y una reacción inflamatoria aguda sistémica y no específica producida por varios mediadores endógenos, independientemente del tipo de invasión. El fallo orgánico que se acompaña por SRIS a veces se produce por una inflamación o isquemia de un tejido, en el estadio temprano. Sin embargo, en el síndrome de disfunción orgánica múltiple (SDOM) que se produce por un SRIS prolongado, la sobrerreacción producida por acción de varios mediadores está involucrada en la agravación de las afecciones, y por tanto es difícil predecir el pronóstico del SRIS.

En el SRIS, están aumentadas en la sangre ciertas citocinas inflamatorias como el TNF-!, IL-1 (interleucina-1) , o IL6 (interleucina-6) . En particular el TNF-! se considera una citocina que activa los neutrófilos y promueve la reacción de coagulación en el SRIS. Cuando la activación de los neutrófilos excede las funciones citoprotectoras de las células endoteliales vasculares, proteasas tales como la elastasa de los neutrófilos o la catepsina G dañan las células endoteliales vasculares, y por tanto, se daña la microcirculación y se forman microtrombos. Los neutrófilos activados se acumulan no solo en el área irritada, sino también en órganos distantes tales como los pulmones o el hígado (los leucocitos se adhieren fácilmente debido a la baja presión de perfusión) . Se considera que la formación de microtrombos produce estasis e isquemia de los tejidos, y, como resultado, se produce FMO. Además los neutrófilos se infiltran en el sistema extravascular para dañar los órganos. Cuando continúa la formación de microtrombos, se consumen los factores de coagulación y las plaquetas. Cuando el estado de SRIS continúa

durante 3 días o más, el paciente se asocia fuertemente a CID. Como se describió anteriormente, la CID está estrechamente relacionada con SRIS.

La elastasa de los neutrófilos es una proteasa neutra que tiene un peso molecular de aproximadamente 30.000 y se localiza en los gránulos azurófilos. En condiciones fisiológicas, la elastasa de los neutrófilos digiere y degrada las bacterias fagocitadas o los cuerpos extraños dentro de los neutrófilos y digiere la elastina, colágeno (tipo III, tipo IV) , fibronectina, inmunoglobulinas, o factor XIII de coagulación en el exterior de los neutrófilos, para regular la biosíntesis en los tejidos. En condiciones patológicas, la elastasa de los neutrófilos inactiva componentes biológicos, tales como las fibras elásticas, los proteoglicanos, las fibras de colágeno, la antitrombina III, o el inhibidor de plasmina !2. Cuando la elastasa de los neutrófilos actúa en el sitio de unión a la heparina de la antitrombina III para inactivar la antitrombina III, se produce CID. La !1-antitripsina (!1-AT) es un inhibidor de la elastasa en sangre que durante 3 mseg inactiva la elastasa de los neutrófilos. Sin embargo, en un tejido inflamado, se considera que el oxígeno activo, mieloperoxidasa, y/o lactoferrina liberados por los neutrófilos oxidan la !1-AT, y por tanto, la elastasa de los neutrófilos no se inactiva y se produce el daño del tejido. Como la elastasa de los neutrófilos muestra una especificidad de sustrato baja, cuando la elastasa de los neutrófilos se libera en exceso o un inhibidor como la !1-AT está disminuido, hay una posibilidad de que la elastasa de los neutrófilos degrade los componentes biológicos y dañe sus propios tejidos. Se lesionan las células endoteliales vasculares gravemente dañadas, y las plaquetas se adhieren y se agregan al área lesionada para formar trombos.

Esta adhesión de las plaquetas necesita el FVW humano en el plasma, y desencadena una serie de activaciones plaquetarias incluyendo la agregación de las plaquetas y la liberación de los gránulos intracelulares, y los trombos formados conducen a la hemostasia. En general, el FVW se segrega del endotelio vascular a la sangre como una macromolécula que tiene un peso molecular de más de 20.000 kDa, y es escindido por una metaloproteasa, la proteasa de escisión del FVW, en multímeros de 500 a 20.000 kDa, que circulan por la sangre. En algunos estados de enfermedad (es decir, cuando se produce una alta tensión de corte por oclusión o similar) , las estructuras proteínicas del FVW cambian a una estructura extendida. El FVW extendido es resistente a la proteasa de escisión del FVW. Se considera que cuando se producen en exceso las moléculas de FVW “excesivamente largas” en la sangre y se unen a las plaquetas entonces, como resultado, se promueve la agregación plaquetaria en los vasos sanguíneos y se forman trombos en la microcirculación. Esta formación de trombos que involucra las plaquetas es esencial para los mecanismos... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de predicción de la cantidad de una proteasa de escisión del factor de von Willebrand en un paciente que padece coagulación intravascular diseminada o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, comprendiendo dicho procedimiento:

analizar una muestra de un fluido corporal del paciente para un factor de escisión de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand, en el que dicho factor es una proteasa seleccionada del grupo que consiste en elastasa, plasmina y trombina, en el que un incremento de la cantidad de dicho factor de escisión es indicativo de un descenso de la cantidad de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además:

analizar la muestra para dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand; y confirmar que la predicción es correcta.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además:

analizar la muestra para dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand; y diagnosticar el paciente con trombosis plaquetaria, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de trombosis plaquetaria.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además:

analizar la muestra para dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand; y diagnosticar el paciente con fallo orgánico, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de fallo orgánico.

5. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además:

analizar la muestra para dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand; y determinar una opción apropiada de tratamiento, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de la utilización de un inhibidor de dicho factor de escisión.

6. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho factor de escisión es la elastasa.

7. El procedimiento de predicción de la cantidad de un factor de escisión de una proteasa de escisión del factor de von Willebrand, en el que dicho factor de escisión es una proteasa seleccionada del grupo que consiste en elastasa, plasmina y trombina, en un paciente que padece coagulación intravascular diseminada o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, comprendiendo dicho procedimiento:

analizar una muestra de fluido corporal de un paciente para dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand, en el que un descenso de la cantidad de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand es indicativo de un incremento de la cantidad de dicho factor de escisión.

8. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende además:

analizar la muestra para dicho factor de escisión; y confirmar que la predicción es correcta.

9. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende además:

analizar la muestra para dicho factor de escisión; y diagnosticar el paciente con trombosis plaquetaria, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de trombosis plaquetaria.

10. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende además:

analizar la muestra para dicho factor de escisión; y diagnosticar el paciente con fallo orgánico, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de fallo orgánico.

11. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende además:

analizar la muestra para dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand; y determinar una opción apropiada de tratamiento, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de la utilización de un inhibidor de dicho factor de escisión.

12. El procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 7 a 11, en el que dicho factor de escisión es la elastasa.

13. Un procedimiento de determinación de una opción apropiada de tratamiento para un paciente que padece coagulación intravascular diseminada o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, comprendiendo dicho procedimiento:

determinar la cantidad de una proteasa de escisión del factor de von Willebrand, y la cantidad de un factor de escisión de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand, en el que dicho factor de escisión es una proteasa seleccionada del grupo que consiste en elastasa, plasmina, y trombina, en el paciente; y elegir una opción de tratamiento, en el que un incremento de dicho factor de escisión y un descenso de dicha proteasa de escisión del factor de von Willebrand son indicativos de la utilización de un inhibidor de dicho factor

de escisión.

14. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 13, en el que dicho factor de escisión es la elastasa.