EXPRESION DE PSORIASINA POR LAS CELULAS EPITELIALES MAMARIAS.
Un método para evaluar si un individuo padece o no carcinoma ductal in situ (DCIS) de grado alto,
comprendiendo dicho método:
(a) identificar un individuo que se sospecha corre riesgo de padecer DCIS de grado alto; y
(b) medir el nivel de expresión de psoriasina o del gen de psoriasina en una muestra de un fluido corporal, un lavado, un aspirado, un sobrenadante de cultivo de células, o una muestra de tejido de mama del individuo;
en donde dicho método incluye determinar si dicho nivel es superior o no al nivel de expresión de psoriasina o del gen de psoriasina que estaría presente en una muestra de este tipo con respecto a un individuo con DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US02/41795.
Solicitante: DANA-FARBER CANCER INSTITUTE, INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 44 BINNEY STREET,BOSTON, MA 02115.
Inventor/es: POLYAK,KORNELIA, ENERBACK,CHARLOTTA.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 30 de Diciembre de 2009.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/574C4
- G01N33/574V2
Clasificación PCT:
- A61K38/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00).
- A61K39/395 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
- A61K48/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
- C12Q1/00 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones.
- C12Q1/68 C12Q […] › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/53 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
Clasificación antigua:
- A61K38/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00).
- A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
- A61K48/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
- C12Q1/00 C12Q […] › Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones.
- C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
Fragmento de la descripción:
Expresión de psoriasina por las células epiteliales mamarias.
Declaración referente a investigación o desarrollo financiados por el gobierno federal
La investigación descrita en esta solicitud fue soportada en parte por una subvención (No. P50 CA89393-01) del Instituto Nacional del Cáncer de los Estados Unidos, perteneciente a los Institutos Nacionales de la Salud de los Estados Unidos. Por consiguiente, el gobierno de los Estados Unidos tiene ciertos derechos en la invención.
Campo técnico
Esta invención se refiere al diagnóstico del cáncer, y más particularmente al diagnóstico del cáncer de mama.
Antecedentes
El carcinoma de mama es la segunda causa principal de fallecimientos relacionados con el cáncer en las mujeres del mundo occidental. Sólo en los Estados Unidos, se diagnostican anualmente más de 175.000 nuevos casos. La historia natural del cáncer de mama implica una progresión secuencial a lo largo de etapas clínicas y patológicas definidas que comienzan con carácter inicialmente benigno seguido por hiperproliferación atípica, progresando hacia carcinomas in situ y posteriormente invasivos, y culminando en enfermedad metastásica. El carcinoma ductal in situ (DCIS) es el precursor del carcinoma ductal invasivo. Por consiguiente, es importante que se disponga de un test fiable para el DCIS.
En Cancer Research, 56, 4606-4609 [1996], Leygue et al exponen la expresión diferencial del mRNA de psoriasina entre el carcinoma de mama in situ y el invasivo. Se comparan casos de DCIS de tipo comedo y no-comedo. Se llega a la conclusión de que el papel fundamental de la proteína psoriasina en las células tumorales de mama sigue sin determinar.
WO 00/26668 es una solicitud de patente internacional que lleva por título "S100 proteins and auto-antibodies as serum markers for cancer". Se discuten las proteínas S100-Ag, S100-A7, S100-A8 y S100-A9. No se menciona el DCIS.
Sumario
La invención está basada en la observación de que las células DCIS humanas de grado alto expresan niveles elevados de una proteína designada por los inventores HID-5 (del inglés high in DCIS-5, es decir rica en DCIS-5). Esta proteína se conoce también como psoriasina. Los DCIS bajos e intermedios expresan, si acaso, el gen HID-5 a un nivel muy bajo. Adicionalmente, los inventores descubrieron que HID-5 es secretado por las células del cáncer de mama. Por tanto, la invención se refiere a métodos útiles en el diagnóstico del DCIS de grado alto.
De acuerdo con la presente invención, se proporciona un método para evaluar si un individuo padece carcinoma ductal in situ (DCIS) de grado alto, comprendiendo dicho método:
en donde dicho método incluye determinar si dicho nivel es superior o no al nivel de expresión de psoriasina o del gen de psoriasina que estaría presente en una muestra de este tipo con respecto a un individuo con DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo.
La invención proporciona también un método de discriminación del DCIS de grado alto con respecto a DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo, comprendiendo el método medir el nivel de expresión de psoriasina o gen de psoriasina en una muestra de un fluido corporal, un lavado, un aspirado, un sobrenadante de cultivo de células, o una muestra de tejido mamario de un individuo identificado como paciente de DCIS, en donde dicho método incluye determinar si dicho nivel es o no superior al nivel que estaría presente en una muestra de este tipo con respecto a un individuo con DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo.
Diversas características opcionales se exponen en las reivindicaciones 3 a 10.
A no ser que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en esta memoria tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por una persona con experiencia ordinaria en la técnica a la que pertenece esta invención. En caso de conflicto, el presente documento, con inclusión de las definiciones, ejercerá papel de control. Métodos y materiales preferidos se describen a continuación. Los materiales, métodos, y ejemplos descritos en esta memoria son únicamente ilustrativos y no deben considerarse como limitantes.
Descripción de los dibujos
Fig. 1A es un gráfico de barras que muestra los resultados de un análisis PCR en tiempo real de la expresión de mRNA de HID-5/psoriasina en carcinomas primarios de mama purificados por microdisección con captura de láser (LCM) y epitelio mamario normal correspondiente. Los datos se expresan como la relación del nivel de mRNA de HID-5/psoriasina en epitelio canceroso al nivel de mRNA de HID-5/psoriasina en el epitelio normal correspondiente ("relación T/N"). Cada barra está marcada con el número de caso y un acrónimo que indica si el carcinoma estaba localizado in situ ("is") o era invasivo ("inv"). Se muestra si el carcinoma era de grado alto ("H"), intermedio ("I"), o bajo ("L") y con expresión ("+") y ausencia de expresión ("-") del receptor de estrógenos a ("ERa"), receptor de progesterona ("PR"), y erbB2.
Fig. 1B muestra una serie de fotomicrografías de secciones histológicas de dos tumores DCIS con comedo de grado alto ("DCIS-1" y "DCIS-2") que se tiñeron con hematoxilina y eosina ("H&E") o se sometieron a análisis de hibridación in situ con ribosondas HID-5/psoriasina antisentido o sentido marcadas con 33P. Las muestras analizadas con la ribosonda antisentido se fotografiaron en condiciones de "campo brillante" y "campo oscuro" utilizando aumentos de la lente objetivo de 4x y 20x. Las muestras analizadas con la ribosonda sentido se fotografiaron en condiciones de "campo oscuro" únicamente, utilizando un aumento de la lente objetivo de 20x. Análisis de hibridación in situ similares de dos tumores DCIS de grado bajo y dos de grado intermedio lograron detectar mRNA de HID-5/psoriasina en ninguna de las muestras.
Fig. 2A muestra un par de fotografías de inmunotransferencias que demuestran la especificidad de un anticuerpo policlonal anti-HID-5/psoriasina (panel izquierdo) y cuatro anticuerpos monoclonales anti-HID-5/psoriasina individuales (panel derecho). Lisados de células que expresaban HID-5/psoriasina ("H") y células de control que no expresaban HID-5/psoriasina ("C") se resolvieron por electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE) y los geles resultantes se transfirieron a membranas que se tiñeron con suero de control pre-inmune ("P.I."), anticuerpo policlonal anti-HID-5/psoriasina ("aHID5") o los cuatro anticuerpos monoclonales anti-HID-5/psoriasina ("C1 1", "C1 2", "C1-3", y "C1 4"). La pista marcada "M" muestra las posiciones de marcadores de peso molecular de 17 kDa y 7 kDa. Las posiciones de HID-5/psoriasina en ambos paneles se indican por ("HID-5/psoriasina").
Fig. 2B es una serie de 3 fotografías de inmunotransferencias que muestran los niveles relativos de expresión HID-5/psoriasina por células MCF10A que crecían en medio de cultivo que contenía una concentración baja ("medio de suero al 0,2%") o alta ("medio de suero al 5%") de suero y en condiciones de cultivo confluyentes ("Células confluyentes") o dispersa ("Células dispersas"). Las células se testaron respecto a la expresión de la proteína HID-5/psoriasina al cabo de 0, 2, 4, 8, 12, y 16 días de cultivo. Las transferencias se generaron como se describe para Fig. 2A y se tiñeron con un anticuerpo policlonal específico para HID-5/psoriasina. Se indican las posiciones de HID-5 ("HID-5/psoriasina") y una proteína de control ("ß-tubulina") en las inmunotransferencias.
Fig. 2C es una fotografía de una inmunotransferencia que muestra los niveles relativos de proteína HID-5/psoriasina expresadas por células MCF10A que crecían en cultivo de suspensión durante 0, 1, 2, y 3 días. Las trasferencias se generaron como se describe para Fig. 2A y se tiñeron con un anticuerpo policlonal específico para HID-5/psoriasina. Las proteínas de HID-5 ("HID-5/psoriasina") y una proteína de control ("ß-tubulina") en la inmunotransferencia se indican.
Fig. 2D es una fotografía de un autorradiograma de una transferencia Northern...
Reivindicaciones:
1. Un método para evaluar si un individuo padece o no carcinoma ductal in situ (DCIS) de grado alto, comprendiendo dicho método:
en donde dicho método incluye determinar si dicho nivel es superior o no al nivel de expresión de psoriasina o del gen de psoriasina que estaría presente en una muestra de este tipo con respecto a un individuo con DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo.
2. Un método de discriminación del DCIS de grado alto con respecto a DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo, comprendiendo el método medir el nivel de expresión de psoriasina o gen de psoriasina en una muestra de un fluido corporal, un lavado, un aspirado, un sobrenadante de cultivo de células, o una muestra de tejido mamario de un individuo identificado como paciente de DCIS, en donde dicho método incluye determinar si dicho nivel es o no superior al nivel que estaría presente en una muestra de este tipo con respecto a un individuo con DCIS de grado intermedio o DCIS de grado bajo.
3. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el cual el fluido corporal es sangre u orina, el lavado es un lavado del conducto mamario, o el aspirado es un aspirado de pezón.
4. Un método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el cual dicha muestra es una muestra de tejido mamario del individuo.
5. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el cual se mide la proteína psoriasina.
6. El método de la reivindicación 5, en el cual la proteína psoriasina se mide utilizando un anticuerpo que se fija a la psoriasina.
7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el cual se mide mRNA de psoriasina.
8. El método de la reivindicación 7, en el cual el mRNA de psoriasina se mide utilizando RT-PCR.
9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el cual el individuo es un mamífero.
10. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el cual el individuo es un humano.
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