Polinucleótido aislado seleccionado entre el grupo que consiste en:

(a) una secuencia de ácido nucleico que codifica o es complementaria con una secuencia que codifica un polipéptido EGVIII que tiene la actividad biológica de una endoglucanasa, que tiene por lo menos un 85%, por lo menos un 90%, por lo menos un 95% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos presentada en la Figura 2 o en la SEQ ID NO: 2 en toda la longitud de la secuencia de la Figura 2 o SEQ ID NO: 2;

(b) una secuencia de ácido nucleico presentada como SEQ ID NO: 4, o su complemento; y

(c) una secuencia de ácido nucleico que hibrida, bajo condiciones de alta estringencia a la secuencia presentada como SEQ ID NO: 4, o el complemento o un fragmento de la misma, en el que dicho polinucleótido aislado codifica un polipéptido que tiene la actividad biológica de una endoglucanasa

Endoglucanasa EGVIII y ácidos nucleicos que la codifican.

La presente invención se refiere a secuencias de ácido nucleico egl8 aisladas que codifican polipéptidos con actividad endoglucanasa. La invención también se refiere a construcciones de ácido nucleico, vectores y células huésped que comprenden secuencias de ácido nucleico, así como procedimientos para la producción de polipéptidos EGVIII recombinantes.

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Antecedentes de la invención

La celulosa y la hemicelulosa son los materiales vegetales más abundantes producidos mediante fotosíntesis. Pueden degradarse y utilizarse como fuente de energía por parte de numerosos microorganismos, incluidos bacterias, levaduras y hongos, que producen enzimas extracelulares capaces de hidrólisis de los sustratos poliméricos de azúcares monoméricas (Aro et al, 2001). Como los límites de los recursos no renovables se acercan, el potencial de la celulosa para convertirse en un importante recurso de energía renovable es enorme (Krishna et al, 2001). La utilización eficaz de la celulosa a través de procesos biológicos, es un camino para superar la escasez de alimentos, forrajes y combustibles (Ohmiya et al, 1997).

Las celulasas son enzimas que hidrolizan la celulosa (enlaces beta-1, 4-glucano y beta-D glucosídicos), resultando en la formación de glucosa,...

1. Polinucleótido aislado seleccionado entre el grupo que consiste en:

(a) una secuencia de ácido nucleico que codifica o es complementaria con una secuencia que codifica un polipéptido EGVIII que tiene la actividad biológica de una endoglucanasa, que tiene por lo menos un 85%, por lo menos un 90%, por lo menos un 95% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos presentada en la Figura 2 o en la SEQ ID NO: 2 en toda la longitud de la secuencia de la Figura 2 o SEQ ID NO: 2;

(b) una secuencia de ácido nucleico presentada como SEQ ID NO: 4, o su complemento; y

(c) una secuencia de ácido nucleico que hibrida, bajo condiciones de alta estringencia a la secuencia presentada como SEQ ID NO: 4, o el complemento o un fragmento de la misma, en el que dicho polinucleótido aislado codifica un polipéptido que tiene la actividad biológica de una endoglucanasa.

2. Polinucleótido aislado según la reivindicación 1(a) o (b).

3. Polinucleótido aislado según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho polinucleótido es una molécula de ARN.

4. Polinucleótido aislado según la reivindicación 1 ó 2, que codifica una enzima que tiene actividad de endoglucanasa, en donde la enzima se deriva de una fuente de Trichoderma.

5. Polinucleótido aislado según la reivindicación 4, en el que la enzima se deriva de Trichoderma reesei.

6. Construcción de expresión que incluye una secuencia de ácido nucleico tal como se define en la reivindicación 1 ó 2.

7. Vector que incluye la construcción de expresión de la reivindicación 6.

8. Vector que comprende un polinucleótido aislado según la reivindicación 1 ó 2, enlazado de manera operativa con secuencias de control reconocidas por una célula huésped transformada con el vector.

9. Célula huésped transformada con el vector según la reivindicación 7 o la reivindicación 8.

10. Célula huésped recombinante que comprende un polinucleótido según la reivindicación 1 ó 2.

11. Célula huésped según la reivindicación 9 ó 10, que es una célula procariota o una célula eucariota.

12. Polipéptido EGVIII aislado con la actividad biológica de una endoglucanasa, que comprende una secuencia seleccionada entre el grupo que consiste en:

(a) una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos un 85%, por lo menos un 90%, por lo menos un 95% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos presentada en la Figura 2 o SEQ ID NO: 2 en toda la longitud de la secuencia de la Figura 2 o SEQ ID NO: 2; y

(b) un fragmento biológicamente activo substancialmente purificado de la secuencia de aminoácidos presentada como SEQ ID NO: 2.

13. Polipéptido EGVIII aislado según la reivindicación 12(a).

14. Célula huésped recombinante que comprende una supresión o inserción u otra alteración en un gen egl8 que tiene una secuencia de ácido nucleico tal como se define en la reivindicación 1, cuya eliminación, inserción u otra alteración inactiva el gen y evita la producción de polipéptido EGVIII.

15. Oligonucleótido antisentido complementario a un ARN mensajero que codifica un polipéptido EGVIII que tiene la secuencia presentada como SEQ ID NO: 2, donde bajo la exposición a una célula huésped productora de endoglucanasa, dicho oligonucleótido disminuye o inhibe la producción de endoglucanasa por parte de dicha célula huésped.

16. Oligonucleótido antisentido según la reivindicación 15, en el que la célula huésped es un hongo filamentoso.

17. Composición detergente, comprendiendo dicha composición un polipéptido según la reivindicación 12 ó 13.

18. Procedimiento para expresar EGVIII en una celda, comprendiendo el procedimiento:

(i) proporcionar células del huésped que han sido transducidas, transformadas o transfectadas con un vector de expresión que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica EGVIII según la reivindicación 1 ó 2;

(ii) cultivar las células.

19. Procedimiento según la reivindicación 18, donde la secuencia de ácido nucleico que codifica EGVIII incluye una secuencia de codificación de un péptido de señal adicional.

20. Procedimiento según la reivindicación 18, en el que las células huésped son Aspergillus sp.

21. Procedimiento según la reivindicación 18, que también comprende:

(a) transformar de manera estable las células huésped con un vector de expresión que comprende un polinucleótido según la reivindicación 1 ó 2 para proporcionar las células huésped en (i), y

(b) recuperar dicha endoglucanasa de las células cultivadas en (ii).

22. Procedimiento según la reivindicación 21, en donde la célula huésped es un hongo filamentoso o célula de levadura.

23. Procedimiento para convertir celulosa en etanol, comprendiendo el procedimiento la utilización de una composición enzimática que comprende un polipéptido EGVIII según la reivindicación 12 ó 13 para hidrolizar la celulosa en sus componentes de azúcar.

24. Procedimiento según la reivindicación 23, en donde la composición se enriquece en EGVIII.

25. Procedimiento según la reivindicación 23 ó 24, en el que la composición que comprende EGVIII se añade a la biomasa de celulosa antes de la adición de un organismo de fermentación.

26. Procedimiento según la reivindicación 23 ó 24, en el que la composición que comprende EGVIII se añade a la biomasa de celulosa al mismo tiempo como un organismo de fermentación.

27. Procedimiento según la reivindicación 26, que comprende una sacarificación y fermentación simultáneas mediante las cuales la celulosa presente en la biomasa se convierte en glucosa y, al mismo tiempo y en el mismo reactor, las cepas de levadura convierten la glucosa en etanol.

28. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 27, en el que la composición también comprende además enzimas celulasas adicionales seleccionados entre: otras endoglucanasas; beta-glucosidasas y/o celobiohidrolasas.

29. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, en el que la celulosa se proporciona mediante: pulpa de madera, papel, algodón, pañales de celulosa, residuos de maíz, árboles, plantas herbáceas, residuos sólidos urbanos o residuos agrícolas y forestales.

30. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 29, en el que la celulosa se proporciona mediante una materia prima celulósica que se trata previamente mediante un tratamiento previo seleccionado entre: temperatura elevada; la adición de un ácido diluido, ácido concentrado o solución álcali diluida.