Una vacuna para la protección contra infección neumocócica que comprende un polipéptido en un vehículo farmacéuticamente aceptable,

en donde dicho polipéptido comprende una porción alfa helicoidal que tiene al menos 90% de identidad con la secuencia de la SEQ ID NO: 1 y en donde dicho polipéptido no comprende una porción de unión a colina, estando el contenido de polipéptido de dicha vacuna en una cantidad efectiva para la protección contra infección neumocócica

Derivados de proteínas neumocócicas de unión a colina para vacunas.

La presente invención se refiere generalmente al campo de antígenos bacterianos y su uso, por ejemplo, como agentes inmunogénicos en humanos y animales para estimular una respuesta inmune. Más específicamente, se refiere a la vacunación de especies mamíferas con un polipéptido que comprende un polipéptido que forma una hélice alfa obtenido a partir de un polipéptido de unión a colina como un mecanismo para estimular la producción de anticuerpos que protegen al receptor de la vacuna contra una infección provocada por especies bacterianas patogénicas. Además, la invención se refiere a anticuerpos y antagonistas contra dichos polipéptidos útiles en el diagnóstico y terapia inmune pasiva con respecto al diagnóstico y tratamiento de dichas infecciones neumocócicas.

En un aspecto particular, la presente invención se refiere a la prevención y el tratamiento de infecciones neumocócicas tales como infecciones en las áreas del oído medio, nasofaringe, pulmón y bronquios, sangre, LCR y similares, que son causadas por bacterias neumocócicas. En este sentido, determinados tipos de Streptococcus pneumoniae son de interés particular.

S. pneumoniae es una bacteria gram positiva que es unos de los principales agentes que provocan infecciones invasivas en animales y humanos, tales como sepsis, meningitis, otitis media y neumonía lobular (Tuomanen, et al. NEJM 322:1280-1284 (1995)). Como parte del proceso infeccioso, los neumococos fácilmente se unen a las células epiteliales humanas no inflamadas del tracto respiratorio superior e inferior mediante la unión a carbohidratos eucariotas en un modo similar a la lectina (Cundell et al., Micro. Path. 17:361-374 (1994)). La conversión a infecciones neumocócicas para bacterias unidas puede implicar la generación local de factores inflamatorios que pueden activar las células epiteliales para cambiar la cantidad y tipo de receptores sobre su superficie (Cundell, et al., Nature, 377:435-438 (1995)). Aparentemente, uno de estos receptores, el factor activador de plaquetas (FAP), es captado por las bacterias nemocócicas y, dentro de un período de tiempo corto (minutos) desde la aparición del FAP, los neumococos exhiben una adherencia e invasión de tejido altamente mejoradas. Ciertos análogos de receptores solubles han demostrado evitar la evolución de infecciones neumocócicas (Idanpaan-Heikkila et. al., J. Inf. Dis., 176:704-712 (1997)).

Una familia de proteínas de unión a colina (CBP), que se unen no covalentemente a fosforilcolina, están presentes sobre la superficie de los neumococos y se asocian no covalentemente con ácido teicoico o ácido lipoteicoico. Un ejemplo de dicha familia es la proteína A de unión a colina (CbpA), un tipo de CBP de aproximadamente 75 kD de peso que incluye un dominio N-terminal, una región rica en prolina y un dominio C-terminal que comprende múltiples repeticiones de 20 aminoácidos responsables de la unión a colina. Un segmento de la porción de N-terminal de la proteína CbpA forma una hélice alfa como parte de su estructura tridimensional.

El documento WO97/09994 revela polipéptidos inmunogénicos que corresponden a PspA y PspC, que contienen porciones de CBP.

El documento WO97/41151 enseña el uso de proteínas de unión a colina para vacunas que contienen regiones de CBP.

Por lo tanto, es un objeto de la presente invención proporcionar un polipéptido que tenga una amplia protección contra infecciones neumocócicas.

Definiciones

Con el fin de facilitar la comprensión de la siguiente descripción y los ejemplos que siguen se describirán ciertos métodos y/o términos que aparecen con frecuencia.

Los "plásmidos" son designados por una p minúscula precedida y/o seguida de letras mayúsculas y/o números. Los plásmidos de partida en la presente invención están disponibles comercialmente, disponibles públicamente sin restricciones o pueden construirse a partir de plásmidos disponibles de acuerdo con procedimientos publicados. Además, los plásmidos equivalentes a los descritos se conocen en la técnica y serán evidentes para un experto en la técnica.

"Digestión" de ADN se refiere a escisión catalítica del ADN con una enzima de restricción que actúa solamente en determinadas secuencias en el ADN. Las diversas enzimas de restricción utilizadas en la presente están comercialmente disponibles y sus condiciones de reacción, cofactores y otros requisitos se utilizaron de la forma en la que lo haría cualquier experto en la técnica.

Con fines analíticos, generalmente se utiliza 1 µg de fragmento de plásmido o ADN con aproximadamente 2 unidades de enzima en aproximadamente 20 µl de solución amortiguadora. Con el fin de aislar fragmentos de ADN para la construcción de plásmidos, generalmente se digieren 5 a 50 µg of ADN con 20 a 250 unidades de enzima en un volumen mayor. Las soluciones amortiguadoras y cantidades de sustrato apropiadas para enzimas de restricción particulares son especificadas por el fabricante. Comúnmente se utilizan tiempos de incubación de aproximadamente 1 hora a 37ºC, pero pueden variar de acuerdo con las instrucciones del proveedor. Después de la digestión la reacción se somete a electroforesis directamente sobre un gel de poliacrilamida para aislar el fragmento deseado.

La separación por tamaño de los fragmentos escindidos se realiza utilizando un 8 por ciento de gel de poliacrilamida como se describe en Goeddel, D. et al., Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980).

"Oligonucleótidos" se refiere a un polidesoxinucleótido de una sola hebra o dos hebras de polidesoxinucleótidos complementarias que pueden sintetizarse químicamente. Dichos oligonucleótidos sintéticos no tienen fosfato 5' y, por lo tanto, no se ligarán con otro oligonucleótido sin agregar un fosfato con una ATP en presencia de una quinasa. Un oligonucleótido sintético se ligará a un fragmento que no ha sido desfosforilado.

"Ligación" se refiere al proceso de formación de enlaces fosfodiéster entre dos fragmentos de ácido nucleico de doble hebra (Maniatis, T., et al., Id., p. 146). A menos que se indique lo contrario, la ligación se puede lograr utilizando soluciones amortiguadoras y condiciones conocidas con 10 unidades a ligasa de ADN de T4 ("ligasa") por 0,5 µg de cantidades aproximadamente equimolares de los fragmentos de ADN a ligar.

"Porción HPS", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a una secuencia de aminoácidos como se indica en la SEQ ID NO: 2 para una proteína de unión a colina ("CBP") de una bacteria neumocócica que puede estar localizada hacia el extremo amino terminal con respecto a la porción rica en prolina de la secuencia de aminoácidos general para dicha CBP.

Las expresiones "identidad", "% de identidad" o "porcentaje de identidad", tal como se utilizan en esta solicitud, se refieren a un cálculo de diferencias entre dos secuencias contiguas que se han alineado para un "mejor ajuste" (para proporcionar el mayor número de elementos de secuencias correspondientes idénticos alineados, en donde los elementos son nucleótidos o aminoácidos) y todas las diferencias individuales se consideran como diferencia individual con respecto a la identidad. En este sentido, todas las brechas de elementos individuales (causadas por inserciones y eliminaciones con respecto a una secuencia inicial ("secuencia de referencia")) a lo largo de la secuencia de referencia y sustituciones individuales de diferentes elementos (para elementos individuales de la secuencia de referencia) se consideran diferencias individuales en el cálculo del número total de diferencias entre dos secuencias. Las diferencias individuales se pueden comparar entre dos secuencias cuando una secuencia inicial (secuencia de referencia) se ha modificado para obtener una secuencia variante (secuencia comparativa) o cuando una nueva secuencia (secuencia comparativa) simplemente se alinea y compara con dicha secuencia de referencia. Cuando dos secuencias alineadas se comparan, todas las brechas individuales en AMBAS secuencias que son causadas por la alineación para el "mejor ajuste" a lo largo de la secuencia de referencia se consideran diferencias individuales a los efectos de identidad. Si existe una alineación que cumpla con la identidad mínima indicada, entonces una secuencia tiene la identidad mínima indicada con la secuencia de referencia. Por ejemplo, la siguiente comparación es una comparación hipotética de dos secuencias que tienen 100 elementos cada una que están alineadas...

1. Una vacuna para la protección contra infección neumocócica que comprende un polipéptido en un vehículo farmacéuticamente aceptable, en donde dicho polipéptido comprende una porción alfa helicoidal que tiene al menos 90% de identidad con la secuencia de la SEQ ID NO: 1 y en donde dicho polipéptido no comprende una porción de unión a colina, estando el contenido de polipéptido de dicha vacuna en una cantidad efectiva para la protección contra infección neumocócica.

2. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicha porción alfa helicoidal tiene al menos 95% de identidad con la secuencia de la SEQ ID NO: 1.

3. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicha porción alfa helicoidal tiene al menos 97% de identidad con la secuencia de la SEQ ID NO: 1.

4. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicha porción alfa helicoidal comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 1.

5. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicha secuencia de aminoácidos de dicha porción alfa helicoidal tiene al menos 90% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19.

6. La vacuna de la reivindicación 1, en donde la secuencia de aminoácidos de dicha porción alfa helicoidal tiene al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19.

7. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicha porción alfa helicoidal comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19.

8. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicha vacuna es para prevenir la otitis media, sepsis, meningitis e infecciones de neumonía lobular.

9. La vacuna de la reivindicación 6, en donde dicha vacuna es para infecciones invasivas.

10. La vacuna de la reivindicación 6, en donde dicha vacuna es para infecciones de otitis media causadas por S. pneumoniae.

11. Uso de una vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para prevenir infecciones neumocócicas en un huésped.

12. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 para prevenir infecciones neumocócicas en un huésped.

13. La vacuna de la reivindicación 1, en donde dicho polipéptido, además, no comprende una región HPS.