Una vacuna que comprende como principio activo un polipéptido, que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 6

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Streptococcus pneumoniae es una bacteria gram positiva que es un agente principal causante de infecciones invasivas en animales y seres humanos, tales como septicemia, meningitis, otitis media y neumonía lobar (Tuomanen, et al. NEJM 322:1280-1284 (1995)). Como parte de un proceso infeccioso, los neumococos se unen fácilmente a las células epiteliales humanas no inflamadas de las vías respiratorias altas y bajas mediante la unión a los hidratos de carbono eucarióticos de manera similar a la lectina (Cundell et al., Micro. Match 17:361-374 (1994)). La conversión en infecciones por neumococos invasivas para bacterias de unión puede implicar la generación local de factores inflamatorios que pueden activar a las células epiteliales para cambiar el número y tipo de receptores en sus superficies (Cundell, et al., Nature, 377:435-438 (1995)). Aparentemente, uno de tales receptores, el factor de activación plaquetaria (FAP) se aplica por la bacteria neumocócica y en un periodo de tiempo muy corto (minutos) a partir de la aparición de FAP, los neumococos muestran adherencia fuertemente aumentada e invasión del tejido. Se ha mostrado que ciertos análogos de receptores solubles evitan la progresión de las infecciones por neumococos (Idanpaan-Heikkila et al., J. Inf. Dis., 176:704-712 (1997)). Se ha sugerido que varias otras proteínas están implicadas en la patogenicidad de S. pneumoniae pero solo algunas se han confirmado como factores virulentos. A pesar del hecho de que hay conjugados de cápsula actualmente en ensayo, existe todavía la necesidad de identificar polipéptidos adicionales que tienen epítopos en común de diversas cepas de S. pneumoniae con el fin de usar tales polipéptidos como vacunas para proporcionar protección frente a una amplia variedad de serotipos de S. pneumoniae.

El documento WO 98/18930 describe antígenos de Streptococcus pneumoniae que son candidatos potenciales para la preparación de vacunas.

BREVE SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención dada a conocer en el presente documento se refiere a una vacuna que comprende como ingrediente activo un polipéptido del organismo neumocócico Streptococcus pneumoniae que comprende la SEQ ID NO: 6.

Más específicamente, la presente invención da a conocer Sp128 (SEQ ID NO:6) compuesto de 664 residuos de aminoácidos. Se ha encontrado que Sp128 confiere propiedades protectoras en animales inmunizados con dicho polipéptido.

La presente invención se refiere también al campo de los antígenos bacterianos y su uso, por ejemplo, como agentes inmunogénicos en seres humanos y animales para estimular una respuesta inmunitaria. Más específicamente, se refiere a la vacunación de especies de mamíferos con uno o más polipéptidos producidos según la invención descrita en el presenta documento, derivándose tales polipéptidos recombinantes a partir de Streptococcus pneumoniae.

Según la presente invención, tales proteínas sirven como un mecanismo para estimular la producción de anticuerpos que protegen al receptor de la vacuna frente a la infección por un intervalo amplio de serotipos capsulares de S. pneumoniae patógena.

En un aspecto particular, la presente invención se refiere a la prevención y tratamiento de infecciones por neumococos, tales como infecciones del área del oído medio, nasofaringea, del pulmón y bronquial, sangre, LCR y similares, que están producidas por bacterias neumocócicas.

Además la presente invención se refiere a vacunas preparadas a partir del nuevo polipéptido, descrito en el presente documento. Además, se describen de la misma manera ejemplos del uso de tal polipéptido como una vacuna para la protección de mamíferos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La figura 1 muestra los resultados de 2 experimentos (figuras 1A y 1B, respectivamente), que utilizan la misma preparación de polipéptidos Sp128 y Sp130 (con fines de contextualización). Los resultados demuestran que la inmunización activa con polipéptidos Sp128 o Sp130 recombinantes derivados a partir de un serotipo 4 de Noruega de una cepa de neumococo es capaz de proteger de la muerte a ratones en un modelo de septicemia por neumococos usando la cepa heteróloga SJ2 (serotipo 6B). En estos 2 experimentos, sobrevivieron el 90% y el 100% respectivamente, de los ratones inmunizados con Sp130 al periodo de observación de 14 días tras la exposición con aproximadamente 400 UFC (unidades formadoras de colonias) de neumococos. A la inversa, murieron el 100% de los ratones con inmunización simulada (inyectados solo con PBS (solución salina tamponada con fosfato) más adyuvante) durante el mismo periodo. Además, para ambos experimentos, sobrevivieron el 90% de los ratones inmunizados con Sp128 el mismo periodo de observación de 14 días.

La figura 2 muestra los resultados de la administración pasiva de antisuero de conejo producido frente a Sp130 derivado a partir del serotipo 4 de Noruega. Tal administración pudo de proteger a ratones en el modelo de septicemia por neumococos utilizando una cepa heteróloga. Más específicamente, sobrevivieron el 70% de los ratones inmunizados con el antisuero de Sp130 al periodo de observación de 10 días tras exposición con 1400 UFC de la cepa WO2 (serotipo 3).

Además, murieron el 100% de los ratones inmunizados con un suero control (recogido antes de la inmunización) en el día 4.

La figura 3 es una inmunotransferencia de tipo western blot que muestra la reactividad de antisuero producido frente a Sp130 recombinante (derivado a partir de la cepa de serotipo 4 de Noruega) con los lisados de célula completa de cepas heterólogas. Todas las cepas de S. penumoniae probadas mostraron una banda de peso molecular de aproximadamente 220 kD, la masa esperada para un proteína que contiene tanto la secuencia de Sp128 como la secuencia de Sp130, lo que indica que esta proteína estaba presente en todas las cepas que se probaron. Las cepas probadas incluyeron aislados de cada uno de los serotipos de neumococo representados en el uso actual de la vacuna de polisacárido 23-valente

La figura 4 es una inmunotransferencia de tipo de western blot que muestra la reactividad del suero del paciente o bien con Sp128 o bien con Sp130. La figura 4A muestra los resultados para Sp128. La figura 4B muestra los resultados para Sp130. Se determinaron las proteínas recombinantes mediante SDS-PAGE y se transfirieron a nitrocelulosa. Se recogieron los sueros de 5 pacientes (indicados por número en la parte superior) en dos momentos diferentes. La primera recogida (denominada “A” por “suero agudo”) fue poco después de la aparición de la enfermedad; la segunda recogida (denominada “C” por “convaleciente”) se realizó de 8 a 30 días más tarde. Se utilizaron estos sueros para sondear las inmunotransferencias. Los resultados muestran que para los pacientes 2, 3 y 5, el suero convaleciente reaccionó de manera más fuerte con Sp128 y Sp130 de lo que lo hizo el correspondiente de suero agudo. Tales hallazgos constituyen una evidencia indirecta de que tanto Sp128 como Sp130 se expresan por S. pneumoniae durante esta fase de infección.

SUMARIO DETALLADO DE LA INVENCIÓN

Según la presente invención en el presente documento se describe un polipéptido recombinantes correspondiente a Sp128 (SEQ ID NO: 6).

Es un objetivo de la presente invención proporcionar métodos de uso de este polipéptido recombinante, como un medio de inmunización de animales, especialmente mamíferos, lo más especialmente seres humanos, frente a una variedad de infecciones microbianas, especialmente infecciones por neumococo.

Es un objeto adicional de la presente invención proporcionar un polipéptido, tal como se describe en el presente documento, tanto si se derivan de fuentes naturales como si se preparan por medio de tecnología recombinante, para el uso en la inmunización de animales, especialmente mamíferos, loa más especialmente seres humanos, frente infección por neumococo.

Es todavía un objeto adicional de la presente invención proporcionar vacunas que incluyen el polipéptido obtenidos a partir de S. Pneumoniae, que incluyen el polipéptido preparado mediante medios recombinantes ( es decir, proteínas y polipéptidos recombinantes).

El polipéptido de las vacunas descritas como productos de expresión según la invención puede estar en “forma enriquecida”. Tal como se utiliza en el presente documento, el término... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna que comprende como principio activo un polipéptido, que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 6.

2. Una composición de vacuna según la reivindicación 1, junto con un vehículo farmacéuticamente

5 aceptable, en el que el polipéptido está presente en una cantidad eficaz para obtener anticuerpos en un animal frente a un organismo del género Streptococcus.

3. Una vacuna según la reivindicación 1, en la que el polipéptido se proporciona por un organismo microbiano transformado con polinucleótidos, y que expresa de ese modo el polipéptido de SEQ ID NO: 6 como principio activo de dicha vacuna.

4. La vacuna según la reivindicación 3, para usar en la prevención o atenuación de una infección producida por un miembro del género Streptococcus en un animal.

5. La vacuna según la reivindicación 3, en la que dicho microorganismo transformado se selecciona del grupo que consiste en salmonela, micobacteria, estreptococo, virus de la viruela, y adenovirus.

6. Uso de un polipéptido que comprende la SEQ ID NO:6 para la fabricación de una preparación

15 farmacéutica para prevenir o atenuar una infección producida por un miembro del género Streptococcus en un animal.

7. Uso de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de SEQ ID NO:6 para la fabricación de una preparación farmacéutica para prevenir o atenuar una infección producida por un miembro del género Streptococcus en un animal.