PROCEDIMIENTO DE CRIBADO DE AGENTES SUSCEPTIBLES DE TRATAR LA OBESIDAD.

Procedimiento de cribado in vitro o realizado en un mamífero no humano de agentes susceptibles de reducir la expresión o la actividad de la proteína SPARC en un sujeto obeso o predispuesto a la obesidad,

que comprende las siguientes etapas:

- medir las tasas de expresión o la actividad de la proteína SPARC en presencia y eventualmente en ausencia del agente que va a someterse a prueba,

- determinar si la expresión o la actividad de la proteína SPARC se reduce en presencia del agente que va a someterse a prueba con respecto a un control,

- eventualmente, identificar el agente que reduce la expresión o la actividad de la proteína SPARC

Procedimiento de cribado de agentes susceptibles de tratar la obesidad.

La presente invención tiene por objeto un procedimiento de cribado de agentes susceptibles de tratar, de manera preventiva o curativa, la obesidad o uno de los trastornos asociados con la obesidad. También se refiere a un procedimiento de diagnóstico de la obesidad o de uno de los trastornos asociados con la obesidad siguiendo la expresión de la proteína SPARC o de su actividad. Se refiere a una composición que comprende al menos un agente que modula la expresión o la actividad de la proteína SPARC. También se refiere al uso de cualquier agente que module la expresión o la actividad de la proteína SPARC para la preparación de una composición farmacéutica destinada a tratar, de manera preventiva o curativa, la obesidad o uno de los trastornos asociados con la obesidad.

La obesidad resulta de un desequilibrio positivo de larga duración entre la energía almacenada y la energía gastada. La obesidad es un trastorno fisiopatológico mayor que puede estar asociado con numerosas enfermedades, tales como trastornos cardiovasculares, incluyendo hipertensión y arterosclerosis, trastornos metabólicos, tales como diabetes, hiperinsulinemia, resistencia a la insulina y ciertos tipos de cáncer. En los Estados Unidos, se estima que más del 30% de la población adulta es obesa, es decir que presenta un peso de más del 20% superior al peso estimado como normal. Numerosas indicaciones tienden a demostrar que la obesidad está convirtiéndose en un problema de salud mundial.

Se admite que el peso de un cuerpo está determinado por múltiples interacciones entre genes y factores ambientales, tales como el régimen alimenticio, el estado psicológico y la frecuencia de actividad física. Se reconoce que, para numerosos casos, un régimen alimenticio y ejercicio físico no son suficientes para perder peso, esto es tanto más cierto en las personas predispuestas genéticamente a volverse obesas. Numerosos genes parecen contribuir en efecto a la patogénesis de la obesidad. Así, recientemente han podido identificarse genes específicos de la obesidad en el ser humano. No obstante, las mutaciones identificadas hasta ahora sólo permiten explicar una proporción mínima de los síndromes de la obesidad.

Por consiguiente, resulta necesario analizar la expresión específica de genes en el tejido adiposo que pueden explicar los mecanismos que contribuyen a esta desregulación en las personas obesas. Los genes que presentan una expresión alterada pueden, por tanto, ser una diana particularmente adaptada para el diagnóstico o el tratamiento, curativo o preventivo, de la obesidad.

Así, tras diferentes estudios, los autores de esta invención han descubierto que la proteína SPARC ("Secreteó Protein Acidic and Rich in Cysteine", "proteína secretada ácida y rica en cisteína", también conocida con el nombre de osteonectina y de BM-40) la secreta el adipocito blanco, que su expresión es más elevada en modelos de ratón "obeso" que en modelos de ratón "delgado" y que su expresión puede regularse en función del régimen administrado.

La proteína SPARC es una glicoproteína asociada con la matriz extracelular ampliamente distribuida en los tejidos humanos en el transcurso del desarrollo. Se describe que regula la morfogénesis, la proliferación y la diferenciación celular. Aunque todavía no queda claro su papel específico, su alto grado de conservación entre las especies sugiere una presión elevada para conservarla a lo largo de la evolución. En la solicitud de patente WO98/20112, se describe que un ratón transgénico carente del gen SPARC tiene tendencia a la hiperglucemia. También se describe un procedimiento de tratamiento de trastornos asociados con una subexpresión de SPARC, tales como especialmente diabetes, cataratas, osteoporosis y proteinuria, introduciendo en las células del mamífero que padece este trastorno un polinucleótido que codifica la proteína SPARC.

La presente invención tiene, por tanto, por objeto un procedimiento de cribado in vitro o realizado en un mamífero no humano de agentes susceptibles de reducir la expresión o la actividad de la proteína SPARC en un sujeto obeso o predispuesto a la obesidad, mediante la modulación de la tasa de expresión o de la actividad de la proteína SPARC.

Con respecto a la prevención de la obesidad, en efecto puede ser interesante tratar con ayuda de agentes así identificados a sujetos a los que se les ha diagnosticado que están predispuestos a la obesidad antes de que presenten un peso demasiado elevado.

Más específicamente, este procedimiento de cribado comprende las siguientes etapas:

- medir las tasas de expresión o la actividad de la proteína SPARC en presencia y eventualmente en ausencia del agente que va a someterse a prueba,

- determinar si la tasa de expresión o la actividad de la proteína SPARC se reduce en presencia del agente que va a someterse a prueba con respecto a un control.

- eventualmente, identificar el agente que reduce la tasa de expresión o la actividad de la proteína SPARC.

O bien se administra directamente el agente que va a someterse a prueba por vía enteral o parenteral al mamífero, generalmente no humano, después se realiza entonces la medición en o a partir de un material biológico de dicho mamífero, tal como una célula, un extracto celular, un fluido corporal, suero, plasma, un tejido o un extracto de tejido. O bien se pone en contacto el agente que va a someterse a prueba con un extracto biológico, tal como especialmente una célula, un extracto celular, un fluido corporal, suero, plasma, un tejido, un receptor o un extracto de tejido y entonces se realiza directamente la medición, habiendo tenido lugar la extracción de dicho extracto biológico antes de dicha puesta en contacto.

Esta tasa de expresión o esta actividad puede medirse a partir de un extracto biológico; tal como especialmente una célula, un extracto celular, un fluido corporal, suero, plasma, un tejido, un receptor o un extracto de tejido. Evidentemente, el extracto o el material usado debe poder expresar o responder a una actividad de la proteína SPARC. De preferencia, el extracto o el material usado procede de un tejido adiposo o de un fluido corporal, tal como suero o plasma. Por ejemplo, en el caso de las células, se prefiere medir la expresión o la actividad de la proteína SPARC en adipocitos o células de músculo estriado. Por tanto esta medición puede requerir que se extraiga previamente el órgano o una parte del órgano del mamífero que va a someterse a prueba. De preferencia, el órgano o la parte del órgano extraído comprende un tejido adiposo. Más particularmente, el tejido adiposo es tejido adiposo abdominal o músculo esquelético.

Según la etapa siguiente, se determina si se modula la tasa de expresión o la actividad de SPARC. Así, puede analizarse si se aumenta o reduce en presencia del agente que va a someterse a prueba con respecto a la misma prueba en ausencia del agente que va a someterse a prueba (control). Esta modulación también puede determinarse en el tiempo. Así, el agente que va a someterse a prueba puede, por ejemplo, añadirse a las células o administrarse a un animal y se extraen muestras sucesivamente en el tiempo para determinar la evolución en el tiempo de la expresión o de la actividad de la proteína SPARC. En este caso, el control corresponde a una medición de la tasa de expresión o de la actividad de la proteína SPARC en presencia del agente, pero realizada en un momento diferente.

La expresión o la actividad asociada con la proteína SPARC puede modularse de diferentes maneras. La modulación de su expresión puede corresponder a la modulación de la tasa de expresión de la proteína SPARC o de su gen. La actividad de la proteína SPARC corresponde más particularmente a su actividad biológica propia o a su señalización, es decir a las consecuencias biológicas que conlleva su actividad biológica. La modulación de su señalización puede corresponder a la modulación de un efecto biológico debido a la proteína SPARC, especialmente bloqueando un sitio activo de la proteína SPARC o modificando su conformación modulando así uno de sus efectos biológicos.

Así, los procedimientos de medición que pueden usarse son numerosos y son los conocidos por el experto en la técnica. Pueden mencionarse especialmente el procedimiento ELISA (que mide la tasa de expresión de la proteína), los procedimientos de análisis de transferencia de tipo Northern o de PCR cuantitativa (que miden la tasa de expresión...

1. Procedimiento de cribado in vitro o realizado en un mamífero no humano de agentes susceptibles de reducir la expresión o la actividad de la proteína SPARC en un sujeto obeso o predispuesto a la obesidad, que comprende las siguientes etapas:

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el agente que va a someterse a prueba se administra directamente por vía enteral o parenteral al mamífero, después se realiza la medición en, o a partir de, un material biológico de dicho mamífero.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el agente que va a someterse a prueba se pone en contacto con un extracto biológico y entonces se realiza directamente la medición, habiendo tenido lugar la extracción de dicho extracto biológico antes de dicha puesta en contacto.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el extracto o el material usado proceden de un tejido adiposo o de un fluido corporal, tal como suero o plasma.

5. Procedimiento según la reivindicación anterior, caracterizado porque el tejido adiposo es tejido adiposo abdominal o tejido adiposo del músculo esquelético.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la expresión o la actividad de la proteína SPARC es la expresión de la proteína SPARC o de su gen.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque se mide la expresión o la actividad de la proteína SPARC circulante o de tejido adiposo.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el procedimiento de medición usado se elige del procedimiento ELISA, un procedimiento de análisis de transferencia de tipo Northern o de PCR cuantitativa, un procedimiento de análisis bioquímico mediante la medición de la proliferación o de la diferenciación celular y una análisis microscópico sobre la morfogénesis del material o extracto biológico estudiado.