Un ácido ribonucleico de interferencia corto aislado (ARNsi) que comprende una cadena de ARN sentido de aproximadamente 19 a aproximadamente 25 nucleótidos de longitud y una cadena de ARN anti-sentido de aproximadamente 19 a aproximadamente 25 nucleótidos de longitud,

donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a la secuencia diana en ARNm del factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº: 47, SEC ID Nº: 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56

Composiciones y métodos para inhibición de angiogénesis por ARNsi.

Referencia cruzada a solicitud relacionada

Esta Solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos Nº de serie 60/398.417, presentada el 24 de julio de 2002 y la solicitud de patente no provisional de los Estados Unidos Nº de serie 10/294.228, presentada el 14 de noviembre de 2002.

Referencia a concesión del gobierno

La invención descrita en este documento estuvo apoyada parcialmente por la concesión de NIH/NEI Nº R01-EY10820, EY-13410 y EY12156. El gobierno de los Estados Unidos tiene ciertos derechos en esta invención.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a la regulación de la expresión génica mediante ARN de interferencia pequeño, en particular para tratar enfermedades o afecciones que implican la angiogénesis.

Antecedentes de la invención

La angiogénesis, definida como el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos capilares o "neovascularización", juega un papel fundamental en el crecimiento y el desarrollo. En seres humanos maduros, la capacidad de iniciar la angiogénesis está presente en todos los tejidos, pero se mantiene bajo un control estricto. Un regulador clave de la angiogénesis es el factor de crecimiento endotelial vascular ("VEGF"), también denominado factor de permeabilidad vascular ("VPF"). El VEGF existe en al menos cuatro formas de empalme alternativas diferentes en seres humanos (VEGF₁₂₁, VEGF₁₆₅, VEGF₁₈₉ y VEGF₂₀₆), las cuales todas ejercen actividades biológicas similares.

La angiogénesis se inicia cuando el VEGF secretado se une a los receptores Flt-1 y Flk-1/KDR (también denominado receptor 1 de VEGF y receptor 2 de VEGF), que se expresan en la superficie de células endoteliales. Flt-1 y Flk-1/KDR son proteínas tirosina quinasas transmembrana y la unión de VEGF inicia una cascada de señal celular que da como resultado la neovascularización final en el tejido circundante.

La angiogénesis aberrante o el crecimiento patógeno de nuevos vasos sanguíneos, está implicado en una diversidad de afecciones. Entre estas afecciones están retinopatía diabética, psoriasis, degeneración macular relacionada con la edad exudativa o "húmeda" ("ARMD"), artritis reumatoide y otras enfermedades inflamatorias y la mayoría de los cánceres. Los tejidos o tumores enfermos asociados con estas afecciones expresan niveles anormalmente altos de VEGF y muestran un grado elevado de vascularización o permeabilidad vascular.

ARMD en particular es una enfermedad angiogénica clínicamente importante. Esta afección se caracteriza por neovascularización coroidal en uno o ambos ojos en individuos mayores y es la causa principal de ceguera en los países industrializados.

Existen varias estrategias terapéuticas para inhibir la angiogénesis aberrante, que intentan reducir la producción o el efecto de VEGF. Por ejemplo, se han desarrollado anticuerpos anti-VEGF o anti-receptor de VEGF (Kim ES et al. (2002), PNAS EE.UU. 99: 11399-11404) y "trampas" de VEGF soluble que compiten con los receptores de células endoteliales por la unión a VEGF (Holash J et al. (2002), PNAS EE.UU. 99: 11393-11398). También se han propuesto terapias clásicas "anti-sentido" o de aptámero de VEGF dirigidas frente a la expresión génica de VEGF (solicitud publicada de los Estados Unidos Nº 2001/0021772 de Uhlmann et al.). Sin embargo, los agentes anti-angiogénicos usados en estas terapias pueden producir sólo una reducción estequiométrica en VEGF o el receptor de VEGF y los agentes típicamente se ven arrollados por la producción anormalmente alta de VEGF por el tejido enfermo. Los resultados conseguidos con terapias anti-angiogénicas disponibles, por lo tanto, no han sido satisfactorias.

El ARN de interferencia (en lo sucesivo en este documento "ARNi") es un método de regulación génica post-transcripcional que se conserva a través de muchos organismos eucariotas. El ARNi se induce por moléculas de ARN bicatenario ("ARNds") corto (es decir, > 30 nucleótidos) que están presentes en la célula (Fire A et al. (1998), Nature 391: 806-811). Estas moléculas de ARNds cortas, denominadas "ARN de interferencia corto" o "ARNsi", provocan la destrucción de ARN mensajeros ("ARNm") que comparten homología de secuencia con el ARNsi hasta dentro de una resolución de un nucleótido (Elbashir SM et al. (2001), Genes Dev, 15: 188-200). Se cree que el ARNsi y el ARNm dirigido se unen a un "complejo de silenciamiento inducido por ARN" o "RISC", que escinde el ARNm dirigido. El ARNsi aparentemente se recicla de forma muy parecida a una enzima de renovación múltiple, siendo una molécula de ARNsi capaz de inducir la escisión de aproximadamente 1000 moléculas de ARNm. La degradación de ARNi mediada por ARNsi de un ARNm, por lo tanto, es más eficaz que las tecnologías disponibles actualmente para inhibir la expresión de un gen diana.

Elbashir SM et al. (2001), mencionado anteriormente, ha demostrado que los ARNsi sintéticos de 21 y 22 nucleótidos de longitud, y que tienen salientes 3' cortos, son capaces de inducir ARNi de ARNm diana en un lisado de células de Drosophila. Las células de mamífero cultivadas también muestran degradación de ARNi con ARNsi sintético (Elbashir SM et al. (2001) Nature, 411: 494-498), y la degradación ARNi inducida por ARNsi sintético se ha demostrado recientemente en ratones vivos (McCaffrey AP et al. (2002), Nature, 418: 38-39; Xia H et al. (2002), Nat. Biotech. 20: 1006-1010). El potencial terapéutico de la degradación de ARNi inducida por ARNsi se ha demostrado en varios estudios in vitro recientes, incluyendo la inhibición dirigida por ARNsi de infección por VIH-1 (Novina CD et al. (2002), Nat. Med. 8: 681-686) y la reducción de expresión de proteína neurotóxica de enfermedad de poliglutamina (Xia H et al. (2002), mencionado anteriormente).

Por lo tanto, lo que se necesita, son agentes que inhiban selectivamente la expresión de VEGF o receptores de VEGF en cantidades catalíticas o sub-estequiométricas.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a ARNsi que tiene la secuencia mostrada en SEC ID Nº: 47, 48, 50, 51, 52, 56 que se dirigen específicamente y provocan la degradación inducida por ARNi de ARNm a partir de genes de VEGF, Flt-1 y Flk-1/KDR. Los compuestos y composiciones de la invención de ARNsi se usan para inhibir la angiogénesis, en particular para el tratamiento de tumores cancerosos, degeneración macular relacionada con la edad y otras enfermedades angiogénicas.

Por tanto, la invención proporciona un ARNsi aislado que se dirige a ARNm de VEGF, ARNm de Flt-1 humano, ARNm de Flk-1/KDR humano o una forma de empalme alternativa, mutante o afín de los mismos. El ARNsi comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido que forman un dúplex de ARN. La cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a una secuencia diana de aproximadamente 19 a aproximadamente 25 nucleótidos contiguos en el ARNm diana.

La invención también proporciona plásmidos recombinantes y vectores virales que expresan el ARNsi de la invención, así como composiciones farmacéuticas que comprenden el ARNsi de la invención y un transportador farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona además un método para inhibir la expresión de ARNm de VEGF humano, ARNm de Flt-1 humano, ARNm de Flk-1/KDR humano o una forma de empalme alternativa, mutante o afín de los mismos, que comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz del ARNsi de la invención de forma que el ARNm diana se degrada.

La invención proporciona además un método para inhibir la angiogénesis en un sujeto, que comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un ARNsi dirigido a ARNm de VEGF humano, ARNm de Flt-1 humano, ARNm de Flk-1/KDR humano o una forma de empalme alternativa, mutante o afín de los mismos.

La invención proporciona además un método para tratar una enfermedad angiogénica, que comprende administrar a un sujeto que necesita tal tratamiento una cantidad eficaz de un ARNsi dirigido a ARNm de VEGF humano, ARNm de Flt-1 humano, ARNm de Flk-1/KDR humano o una forma de empalme alternativa, mutante o afín de los mismos, de forma que la angiogénesis asociada con la enfermedad angiogénica se inhibe.

Breve descripción de los dibujos

Las Figuras 1A y 1B son histogramas de la concentración de...

1. Un ácido ribonucleico de interferencia corto aislado (ARNsi) que comprende una cadena de ARN sentido de aproximadamente 19 a aproximadamente 25 nucleótidos de longitud y una cadena de ARN anti-sentido de aproximadamente 19 a aproximadamente 25 nucleótidos de longitud, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a la secuencia diana en ARNm del factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº: 47, SEC ID Nº: 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56.

2. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que el ARNm de VEGF humano se selecciona entre el grupo que consiste en ARNm de VEGF₁₂₁ (SEC ID Nº: 2); ARNm de VEGF₁₆₅ (SEC ID Nº: 3); ARNm de VEGF₁₈₉ (SEC ID Nº: 4) y ARNm de VEGF₂₀₆ (SEC ID Nº: 5).

3. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77, y la cadena anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

4. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que la cadena de ARN sentido comprende una molécula de ARN y la cadena de ARN anti-sentido comprende una molécula de ARN.

5. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que las cadenas de ARN sentido y anti-sentido que forman el dúplex de ARN están enlazadas covalentemente por una horquilla monocatenaria.

6. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que el ARNsi comprende además material no nucleotídico.

7. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que las cadenas de ARN sentido y anti-sentido se estabilizan frente a degradación por nucleasa.

8. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, comprendiendo además un saliente 3'.

9. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 8, en el que el saliente 3' comprende de 1 a aproximadamente 6 nucleótidos.

10. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 8, en el que el saliente 3' comprende aproximadamente 2 nucleótidos.

11. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 4, en el que la cadena de ARN sentido comprende un primer saliente 3' y la cadena de ARN anti-sentido comprende un segundo saliente 3'.

12. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 11, en el que el primer y segundo salientes 3' por separado comprenden de 1 a aproximadamente 6 nucleótidos.

13. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 12, en el que el primer saliente 3' comprende un dinucleótido y el segundo saliente 3' comprende un dinucleótido.

14. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 13, en el que dinucleótido que comprende el primer y segundo saliente 3' es ácido ditimidílico (TT) o ácido diuridílico (uu).

15. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 8, en el que el saliente 3' se estabiliza frente a degradación por nucleasa.

16. Una célula epitelial de pigmento retiniano que comprende el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1.

17. Un plásmido recombinante que comprende secuencias de ácido nucleico para expresar un ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) que comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a una secuencia diana en ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº: 47, SEC ID Nº: 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56.

18. El plásmido recombinante de la reivindicación 17 en el que las secuencias de ácido nucleico expresan un ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) en el que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77 y la cadena de ARN anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

19. El plásmido recombinante de la reivindicación 17, en el que las secuencias de ácido nucleico para expresar el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) comprenden un promotor inducible o regulable.

20. El plásmido recombinante de la reivindicación 17, en el que las secuencias de ácido nucleico para expresar el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) comprenden una secuencia codificante de cadena de ARN sentido en conexión operativa con una secuencia de terminación poliT bajo el control de un promotor de ARN U6 humano y una secuencia codificante de cadena de ARN anti-sentido en conexión operativa con una secuencia de terminación poliT bajo el control de un promotor de ARN U6 humano.

21. El plásmido recombinante de la reivindicación 18, donde el plásmido es ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de pAAV.

22. Un vector viral recombinante que comprende secuencias de ácido nucleico para expresar un ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi), que comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a la secuencia diana en ARNm del factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº: 47, SEC ID Nº: 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56.

23. El vector viral recombinante de la reivindicación 22 en el que las secuencias de ácido nucleico expresan un ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) en el que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77 y la cadena de ARN anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

24. El vector viral recombinante de la reivindicación 22, en el que las secuencias de ácido nucleico para expresar el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) comprenden un promotor inducible o regulable.

25. El vector viral recombinante de la reivindicación 22, en el que las secuencias de ácido nucleico para expresar el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) comprenden una secuencia codificante de cadena de ARN sentido en conexión operativa con una secuencia de terminación poliT bajo el control de un promotor de ARN U6 humano y una secuencia codificante de cadena de ARN anti-sentido en conexión operativa con una secuencia de terminación poliT bajo el control de un promotor de ARN U6 humano.

26. El vector viral recombinante de la reivindicación 22, donde el vector viral recombinante se selecciona entre el grupo que consiste en vector adenoviral, un vector viral adeno-asociado, un vector lentiviral, un vector retroviral y un vector de virus de herpes.

27. El vector viral recombinante de la reivindicación 22, donde el vector viral recombinante se pseudotipifica con proteínas de superficie a partir del virus de estomatitis vesicular, virus de la rabia, virus de Ébola o virus de Mokola.

28. El vector viral recombinante de la reivindicación 27, donde el vector viral recombinante comprende un vector viral adeno-asociado.

29. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) y un transportador farmacéuticamente aceptable, donde el ARNsi comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a una secuencia diana en ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº: 47, SEC ID Nº 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56.

30. La composición farmacéutica indicada en la reivindicación 29 en la que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77 y la cadena de ARN anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

31. La composición farmacéutica de la reivindicación 29, comprendiendo además lipofectina, lipofectamina, celfectina, policationes o liposomas.

32. Una composición farmacéutica que comprende el plásmido de la reivindicación 17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un transportador farmacéuticamente aceptable.

33. La composición farmacéutica de la reivindicación 32, comprendiendo además lipofectina, lipofectamina, celfectina, policationes o liposomas.

34. Una composición farmacéutica que comprende el vector viral de la reivindicación 22 y un transportador farmacéuticamente aceptable.

35. Una cantidad eficaz de ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) que comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a una secuencia diana en ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) para uso en la inhibición de la expresión de ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) en un sujeto donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº 47, SEC ID Nº 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56.

36. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 35 en el que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77 y la cadena de ARN anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

37. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 35, en el que el sujeto es un ser humano.

38. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 35, en el que la expresión de ARNm del factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) se inhibe en uno o en ambos ojos del sujeto.

39. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 35, en el que la expresión de ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) se inhibe en células epiteliales de pigmento retiniano del sujeto.

40. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 35, en el que la cantidad eficaz del ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) es de aproximadamente 1 nM a aproximadamente 100 nM.

41. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 35, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se administra junto con un agente de suministro.

42. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 41, en el que el agente de suministro se selecciona entre el grupo constituido por lipofectina, lipofectamina, celfectina, policationes y liposomas.

43. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 42, en el que el agente de suministro es un liposoma.

44. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 43, en el que el liposoma comprende un ligando que dirige al liposoma a células en o cerca del sitio de angiogénesis.

45. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 44, en el que el ligando se une a receptores en células tumorales o células endoteliales vasculares.

46. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 45, en el que el ligando comprende un anticuerpo monoclonal.

47. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 44, en el que el liposoma se modifica con un resto de inhibición de opsonización.

48. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 47, en el que el resto de inhibición de opsonización comprende un PEG, PPG o derivados de los mismos.

49. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 36, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se expresa a partir de un plásmido recombinante.

50. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 36, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se expresa a partir de un vector viral recombinante.

51. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 50, en el que el vector viral recombinante comprende un vector adenoviral, un vector viral adeno-asociado, un vector lentiviral, un vector retroviral o un vector del virus del herpes.

52. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 51, en el que el vector viral recombinante se pseudotipifica con proteínas de superficie a partir del virus de estomatitis vesicular, virus de la rabia, virus de Ébola o virus de Mokola.

53. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 36, donde el ARNsi se administra mediante una vía de administración enteral.

54. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 53, en el que la vía de administración enteral se selecciona entre el grupo que consiste en oral, rectal e intranasal.

55. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 36, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se administra mediante una vía de administración parenteral.

56. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 55, en el que la vía de administración parenteral se selecciona entre el grupo que consiste en administración intra-ocular, administración intra-vascular, inyección peri- e intra-tisular, inyección o depósito subcutáneo, infusión subcutánea y aplicación directa en o cerca del sitio de neovascularización.

57. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 56, en el que la administración intra-vascular se selecciona entre el grupo que consiste en inyección de bolo intravenoso, infusión intravenosa, inyección de bolo intra-arterial, infusión intra-arterial e instilación de catéter en la vasculatura.

58. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 56, en el que la inyección peri- e intra-tisular comprende inyección peri-tumoral o inyección intra-tumoral.

59. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 56, en el que la administración intra-ocular comprende administración intra-vítrea, intra-retiniana, sub-retiniana, sub-tenónica, peri y retro-orbital, trans-corneal o trans-escleral.

60. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 56, en el que la aplicación directa en o cerca del sitio de neovascularización comprende aplicación mediante catéter, gránulo corneal, goteo ocular, supositorio, un implante que comprende un material poroso, un implante que comprende un material no poroso o un implante que comprende un material gelatinoso.

61. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 56, en el que el sitio de neovascularización está en el ojo y la aplicación directa en o cerca del sitio de neovascularización comprende la aplicación mediante un implante ocular.

62. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 61, en el que el implante ocular es biodegradable.

63. Una cantidad eficaz de ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi), que comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a una secuencia diana en ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº 47, SEC ID Nº 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56 para uso en la prevención de la angiogénesis.

64. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 63, en el que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77 y la cadena de ARN anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

65. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 63, en el que la angiogénesis es patógena.

66. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 63, en el que la angiogénesis es no patógena.

67. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 66, en el que la angiogénesis no patógena está asociada con la producción de tejidos grasos o producción de colesterol.

68. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 66, en el que la angiogénesis no patógena comprende neovascularización endometrial.

69. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 63, en el que la angiogénesis está inhibida en uno o ambos ojos del sujeto.

70. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 63, en el que la angiogénesis está inhibida en células epiteliales de pigmento retiniano del sujeto.

71. Una cantidad eficaz de ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) que comprende una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN anti-sentido, donde las cadenas de ARN sentido y anti-sentido forman un dúplex de ARN y donde la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos idéntica a una secuencia diana en ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF) donde dicha secuencia diana se selecciona entre SEC ID Nº 47, SEC ID Nº 48, SEC ID Nº: 50, SEC ID Nº: 51, SEC ID Nº: 52 y SEC ID Nº: 56 para uso en el tratamiento de enfermedad angiogénica de forma que la angiogénesis asociada con la enfermedad angiogénica está inhibida.

72. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 71, el que la cadena de ARN sentido comprende SEC ID Nº: 77 y la cadena de ARN anti-sentido comprende SEC ID Nº: 78.

73. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 71, en que la enfermedad angiogénica comprende un tumor asociado con un cáncer.

74. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 73, donde el cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en cáncer mamario, cáncer de pulmón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cerebro, cáncer abdominal, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de esófago, cáncer gastrointestinal, glioma, cáncer de hígado, cáncer de lengua, neuroblastoma, osteosarcoma, cáncer ovárico, cáncer pancreático, cáncer prostático, retinoblastoma, tumor de Wilm, mieloma múltiple, cáncer de piel, linfoma y leucemia.

75. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 71, en el que la enfermedad angiogénica se selecciona entre el grupo que consiste en retinopatía diabética, degeneración macular relacionada con la edad y enfermedades inflamatorias.

76. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 75, en el que la enfermedad inflamatoria es psoriasis o artritis reumatoide.

77. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 71, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se administra en combinación con un agente farmacéutico para tratar la enfermedad angiogénica, agente farmacéutico que es diferente del ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi).

78. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 77 en el que la enfermedad angiogénica es cáncer y el agente farmacéutico comprende un agente quimioterapéutico.

79. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 78, en el que el agente terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en cisplatino, carboplatino, ciclofosfamida, 5-fluorouracilo, adriamicina, daunorrubicina y tamoxifeno.

80. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 71, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se administra a un sujeto en combinación con otro método terapéutico diseñado para tratar la enfermedad angiogénica.

81. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 80, en el que la enfermedad angiogénica es cáncer y el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) se administra en combinación con terapia de radiación, quimioterapia o cirugía.

82. El ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) de la reivindicación 1, en el que el ácido ribonucleico de interferencia corto (ARNsi) comprende además ARN alterado.