COMPOSICIONES Y METODOS PARA INMUNIDAD MEJORADA DE CELULAS NEOPLASICAS IN VIVO.

ESTA INVENCION PROPORCIONA UN METODO DE PREVENCION O REDUCCION DE LA SEVERIDAD DE UN CANCER EN UN SUJETO POR MEDIO DE LA ESTIMULACION DE LA RESPUESTA INMUNOLOGICA DEL SUJETO CONTRA EL CANCER.

LA INVENCION PROPORCIONA, POR EJEMPLO, UN METODO DE ESTIMULACION DE LA RESPUESTA INMUNOLOGICA EN UN SUJETO POR MEDIO DE LA ADMINISTRACION AL SUJETO DE CELULAS TUMOROSAS QUE SON ESENCIALMENTE SIMILARES A LAS CELULAS CANCEROSAS DEL SUJETO Y QUE ESTAN MODIFICADAS GENETICAMENTE PARA REDUCIR O INHIBIR LA EXPRESION DE UNO O MAS AGENTES INMUNORREDUCTORES. ADEMAS, LA INVENCION PROPORCIONA UN METODO DE PREVENCION O REDUCCION DE LA SEVERIDAD DE UN CANCER EN UN SUJETO POR MEDIO DE LA ESTIMULACION DE LA RESPUESTA INMUNOLOGICA DEL INDIVIDUO CONTRA EL CANCER POR MEDIO DE LA ADMINISTRACION AL SUJETO DE CELULAS TUMOROSAS QUE SON ESENCIALMENTE SIMILARES A LAS CELULAS CANCEROSAS DEL SUJETO Y QUE ESTAN MODIFICADAS GENETICAMENTE PARA EVITAR LA EXPRESION DE UN AGENTE INMUNORREDUCTOR Y, EN COMBINACION CON LAS CELULAS TUMOROSAS MODIFICADAS GENETICAMENTE, UN AGENTE INMUNOESTIMULADOR. LA INVENCION, ADEMAS, PROPORCIONA UNAS COMPOSICIONES UTILES PARA LA PUESTA EN PRACTICA DE ESTOS METODOS RECLAMADOS

Composiciones y métodos para inmunidad mejorada de células neoplásicas in vivo.

Antecedente de la invención

La presente invención se relaciona generalmente con vacunas antineoplásicas y, más particularmente, con el uso de terapia de gen para aumentar las funciones inmunológicas en respuesta a vacunas antineoplásicas.

Avances recientes en nuestro entendimiento de la biología del sistema inmune han conducido a la identificación de citoquinas como modulares importantes de respuestas inmunes. Las citoquinas producidas por linfocitos se denominan linfoquinas. Estos agentes median muchas de las respuestas inmunes a los tumores. Varias citoquinas han sido producidas por metodología de ADN recombinante y se evalúan por sus efectos antineoplásicos.

La administración de linfoquinas e inmunomodulares relacionados ha producido algunas respuestas positivas en pacientes con varios tipos de neoplasmas. Sin embargo, la administración de citoquina actual se asocia frecuentemente con efectos tóxicos que limitan el valor terapéutico de estos agentes. Por ejemplo, la interleuquina-2 (IL-2) es una linfoquina importante en la generación de inmunidad antineoplásica. En respuesta a antígenos neoplásicos, un subconjunto de linfocitos, células T auxiliares, secretan una pequeña cantidad de IL-2, que actúa localmente en el sitio de estimulación de antígeno de tumor para activar las células T citotóxicas y linfocitos citolíticos naturales que median la destrucción de la célula neoplásica sistémica.

En adición a los agentes inmunoestimuladores tal como citoquinas, que regulan positivamente las funciones efectoras inmunes, también existen moléculas que exhiben actividad inmunosupresora. Estos agentes inmunosupresores, si se regulan aberrantemente, pueden tener efectos perjudiciales en la inducción de inmunidad sistémica. Por ejemplo, una o más isoformas de factor ß de crecimiento transformante (TGFß) pueden ser un agente inmunosupresor que se secreta por muchos tipos de tumor. Los sobrenadanates de cultivo de células neoplásicas que secretan una forma inmunosupresora de TGFß pueden reducir la citotoxicidad específica de tumor in vitro. En estos ensayos de citotoxicidad in vitro, la inhibición de la actividad TGFß mediante la expresión de TGFß anticodificante puede mejorar la citotoxicidad de célula neoplásica.

Debido, en parte, a concentraciones endógenas de agentes inmunosupresores en un sujeto que tiene un cáncer, no se puede predecir si inhibir la secreción de un agente inmunosupresor por la célula neoplásica hará a la célula neoplásica inmunogénica in vivo. Por ejemplo, el TGFß secretado por células de cáncer puede circular a través de un paciente con cáncer y generalmente el paciente inmunocomprometido. Como un resultado, la administración de células neoplásicas que son sustancialmente similares a las células de cáncer del paciente y que se modifican genéticamente para evitar la expresión de un agente inmunosupresor no necesariamente se esperaría estimular la respuesta inmune del paciente contra la células de cáncer. De forma similar, los resultados de modelos in vitro de respuestas inmunes antineoplásicas no predicen confiablemente el resultado de manipulaciones del sistema inmune relacionadas in vivo.

Se ha intentado la modulación de concentraciones de citoquina como un medio para mejorar una respuesta inmune del paciente con cáncer hacia células de cáncer objetivo. Por ejemplo, la administración intravenosa, intralinfática o intralesional de IL-2 ha producido respuestas clínicamente significativas en algunos pacientes con cáncer. Sin embargo, efectos tóxicos severos tal como hipotensión y edema limitan la dosis y eficacia de la administración IL-2 intravenosa e intralinfática. La toxicidad de linfoquinas administradas sistémicamente no es sorprendente cuando estos agentes median las interacciones celulares locales y normalmente se secretan solo en cantidades muy pequeñas. Adicionalmente, la administración intralesional de IL-2 puede ser difícil de llevar a cabo y puede originar morbilidad significativa del paciente.

Para evitar la toxicidad de la administración de citoquina sistémica, un método alternativo involucra la transferencia del gen citoquina en células neoplásicas que han producido respuestas inmunes antineoplásicas en varios modelos de tumor de animal. En estos estudios, la expresión de citoquinas luego que el gen citoquina se transfiere en células neoplásicas resulta en una reducción en tumorogenicidad de las células neoplásicas que secretan citoquina cuando se implantan en anfitriones singeneicos. La reducción en la tumorogenicidad ocurre utilizando IL-2, interferón-gama o interleuquina-4. En estudios que emplean la transferencia del gen IL-2, los animales tratados también desarrollan inmunidad antineoplásica sistémica y se protegen contra exposiciones a células neoplásicas posteriores con células neoplásicas de los padres no modificadas. La inhibición similar del crecimiento de tumor y la inmunidad protectora también se demuestra cuando se desarrollan inmunizaciones con una mezcla de células neoplásicas de padres no modificadas y células neoplásicas que se modifican genéticamente para expresar IL-2. La no toxicidad se asocia con la expresión transgen de linfoquina localizada en estos estudios de animal.

Las citoquinas también se han expresado en tipos celulares heterólogos tal como fibroblastos, que se coinyectan en un paciente con cáncer con las células de cáncer de los propios pacientes. La coinyección de células que expresan citoquina produce una inducción similar de inmunidad antineoplásica sistémica cuando se produce por células neoplásicas que expresan citoquina. No obstante, aunque estos procedimientos de transferencia de gen pueden proporcionar inmunidad antineoplásica significativa comparado con otros métodos, una fracción significativa de los pacientes no responde óptimamente a tal terapia. Así, existe una necesidad de proporcionar métodos más efectivos para evitar o reducir la severidad de un cáncer en un paciente. La presente invención satisface esta necesidad y proporciona ventajas muy bien relacionadas.

Resumen de la invención

La presente invención se relaciona con un método para evitar o reducir la severidad de un cáncer en un sujeto al estimular la respuesta inmune del sujeto contra el cáncer. Por ejemplo, un paciente con cáncer se puede inmunizar con células neoplásicas que son sustancialmente similares a las células de cáncer del sujeto pero que se modifican genéticamente para evitar la expresión de por lo menos un agente inmunosupresor.

La invención proporciona el uso de células neoplásicas que son sustancialmente similares a las células de cáncer del sujeto pero que se modifican genéticamente para evitar la expresión de por lo menos un agente inmunosupresor y se seleccionan del grupo que consiste de fibronectina TGFß, tenascina, p15E y el factor inhibidor de blastogenia de linfocito, opcionalmente, para expresar por lo menos un agente inmunoestimulador tal como una citoquina o un antígeno neoplásico conocido para la preparación de una composición farmacéutica para estimular una respuesta inmune del sujeto contra un cáncer. La invención proporciona adicionalmente el uso de dichas células neoplásicas en combinación con un agente inmunoestimulador tal como un adyuvante, una citoquina o células que expresan citoquina (células CE), que son células que se modifican genéticamente para expresar una citoquina para la preparación de una composición farmacéutica para estimular una respuesta inmune del paciente con cáncer contra el cáncer.

La invención también proporciona composiciones útiles para evitar o reducir la severidad de un cáncer en un sujeto al estimular la respuesta inmune del sujeto contra el cáncer. Una composición de la invención puede contener células neoplásicas que son sustancialmente similares a las células de cáncer del sujeto y que se modifican genéticamente para evitar la expresión de por lo menos un agente inmunosupresor que se selecciona del grupo que consiste de TGFß, fibronectina, tenascina, p15E y el factor inhibidor de blastogenia de linfocito. Adicionalmente, si se desea, las células neoplásicas modificadas genéticamente se pueden modificar adicionalmente para expresar un agente inmunoestimulador tal como una citoquina o un antígeno neoplásico conocido. Una composición de la invención también puede contener un agente inmunoestimulador tal como un adyuvante,...

1. Uso de células neoplásicas alogénicas modificadas genéticamente para la preparación de una composición farmacéutica para estimular una respuesta inmune contra un cáncer, en donde dichas células neoplásicas se modifican genéticamente para reducir o inhibir la expresión de por lo menos un agente inmunosupresor, en donde dicho agente inmunosupresor se selecciona del grupo que consiste de TGFß, fibronectina, tenascina, p15E y el factor inhibidor de blastogenia de linfocito.

2. El uso de la reivindicación 1, en donde dicho agente inmunosupresor es TGFß2.

3. El uso de la reivindicación 1 o 2, en donde dichas células neoplásicas alogénicas se derivan de un sujeto a ser tratado.

4. El uso de la reivindicación 1 o 2, en donde dichas células neoplásicas alogénicas son células neoplásicas de donante.

5. El uso de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dichas células neoplásicas alogénicas son células carcinoma, células glioma, células sarcoma, células linfoma, células melanoma o células de leucemia.

6. El uso de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha modificación genética para reducir o inhibir la expresión de un agente inmunosupresor se lleva a cabo por recombinación homóloga del gen mutante de un gen que codifica dicho agente inmunosupresor en dicha célula neoplásica alogénica.

7. El uso de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha modificación genética para reducir o inhibir la expresión de un agente inmunosupresor se lleva a cabo al proporcionar en dicha célula neoplásica alogénica una secuencia de ácido nucleico codificante que hibrida a una molécula de ácido nucleico que codifica dicho agente inmunosupresor.

8. El uso de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha modificación genética para reducir o inhibir la expresión de un agente inmunosupresor se lleva a cabo al proporcionar en dicha célula neoplásica alogénica una secuencia de ácido nucleico que codifica una ribozima que reconoce e inactiva dicho agente inmunosupresor.

9. El uso de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicha composición farmacéutica comprende adicionalmente un agente inmunoestimulador, en donde dicho agente inmunoestimulador es una citoquina o una célula que expresa citoquina, y en donde dicha citoquina se selecciona del grupo que consiste de interleuquina-1, interleuquina-2, interleuquina-3, interleuquina-4, interleuquina-5, interleuquina-6, interleuquina-7 interleuquina-12, interleuquina-15, interferón-gama, factor de necrosis de tumor, factor que estimula la colonia de granulocito o factor que estimula la colonia de granulocito-macrófago.

10. El uso de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dichas células neoplásicas alogénicas adicionalmente se modifican genéticamente para expresar por lo menos un agente inmunoestimulador, en donde dicho agente inmunoestimulador es la molécula B7 coestimuladora, una molécula MHC clase I, una molécula MHC clase II, un antígeno neoplásico conocido o una citoquina seleccionada del grupo que consiste de interleuquina-1, interleuquina-2, interleuquina-3, interleuquina-4, interleuquina-5, interleuquina-6, interleuquina-7, interleuquina-12, interleuquina-15, gama-interferón, factor de necrosis de tumor, factor que estimula la colonia de granulocito y factor que estimula la colonia de granulocito-macrófago.

11. Una composición para estimular una respuesta inmune a un cáncer, en donde dicha composición comprende células neoplásicas alogénicas que se modifican genéticamente para reducir o inhibir la expresión de por lo menos un agente inmunosupresor, en donde dicho agente inmunosupresor se selecciona del grupo que consiste de TGFß, fibronectina, tenascina, p15E y el factor inhibidor de blastogenia de linfocito.

12. La composición de la reivindicación 11, en donde dicho agente inmunosupresor es TGFß2.

13. La composición de la reivindicación 11 o 12, en donde dichas células neoplásicas alogénicas se derivan de un sujeto a ser tratado.

14. La composición de la reivindicación 11 o 12, en donde dichas células neoplásicas alogénicas son células neoplásicas de donante.

15. La composición de las reivindicaciones 11 a 14, en donde dichas células neoplásicas alogénicas son células carcinoma, células glioma, células sarcoma, células linfoma, células melanoma o células de leucemia.

16. La composición de las reivindicaciones 11 a 15, en donde dichas células neoplásicas alogénicas modificadas genéticamente contienen un gen inactivado que codifica dicho agente inmunosupresor.

17. La composición de las reivindicaciones 11 a 15, en donde dichas células neoplásicas alogénicas modificadas genéticamente contienen una secuencia de ácido nucleico codificante que hibrida a una molécula de ácido nucleico que codifica dicho agente inmunosupresor.

18. La composición de las reivindicaciones 11 a 15, en donde dichas células neoplásicas alogénicas modificadas genéticamente contienen una secuencia de ácido nucleico que codifica una ribozima que reconoce e inactiva dicho agente inmunosupresor.

19. La composición de las reivindicaciones 11 a 18, en donde dicha composición comprende adicionalmente un agente inmunoestimulador, en donde dicho agente inmunoestimulador es una citoquina o una célula que expresa citoquina, y en donde dicha citoquina se selecciona del grupo que consiste de interleuquina-1, interleuquina-2, interleuquina-3, interleuquina-4, interleuquina-5, interleuquina-6, interleuquina-7 interleuquina-12, interleuquina-15, interferón-gama, factor de necrosis de tumor, factor que estimula la colonia de granulocito o factor que estimula la colonia de granulocito-macrófago.

20. La composición de las reivindicaciones 11 a 18, en donde dichas células neoplásicas alogénicas adicionalmente se modifican genéticamente para expresar un agente inmunoestimulador, en donde dicho agente inmunoestimulador es la molécula B7 coestimuladora, una molécula MHC clase I, una molécula MHC clase II, un antígeno neoplásico conocido o una citoquina seleccionada del grupo que consiste de interleuquina-1, interleuquina-2, interleuquina-3, interleuquina-4, interleuquina-5, interleuquina-6, interleuquina-7, interleuquina-12, interleuquina-15, gama-interferón, factor de necrosis de tumor, factor que estimula la colonia de granulocito y factor que estimula la colonia de granulocito-macrófago.