LATE-PCR.

Procedimiento de amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) no simétrica que comprende termociclar una mezcla de reacción de PCR que contiene una secuencia diana de amplificación de ácido desoxirribonucleico (ADN),

un par de cebadores para PCR, dNTP y una polimerasa termoestable de manera repetida a través de las etapas de PCR de fundido de la cadena, apareamiento de cebador y extensión de cebador, en el que, al principio de la amplificación (a) la mezcla de reacción contiene hasta 1.000.000 de copias de la secuencia diana de amplificación, (b) el par de cebadores para PCR comprende un cebador limitativo y un cebador en exceso, estando presente el cebador limitativo en una concentración de hasta 200 nM y estando presente el cebador en exceso en una concentración por lo menos cinco veces superior que el cebador limitativo, (c) la temperatura de fusión ajustada a la concentración, inicial del cebador limitativo es igual a o superior a la temperatura de fusión ajustada a la concentración, inicial del cebador en exceso, (d) si el cebador limitativo no es totalmente complementario a dicha secuencia diana, la temperatura de fusión ajustada a la concentración de esa parte del cebador limitativo que hibrida con dicha secuencia diana no es superior a 5ºC por debajo de la temperatura de fusión ajustada a la concentración del cebador en exceso, (e) la temperatura de fusión del amplicón producido mediante la extensión del cebador en exceso supera la temperatura de fusión ajustada a la concentración inicial del cebador en exceso en no más de 18ºC, y (f) el termociclado se repite un número de veces suficiente para incluir múltiples ciclos de amplificación lineal usando el cebador en exceso tras el agotamiento del cebador limitativo.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: BRANDEIS UNIVERSITY.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 415 SOUTH STREET,WALTHAM, MA 02254-9110.

Inventor/es: WANGH, LAWRENCE J., PIERCE,KENNETH, HARTSHORN,CRISTINA, RICE,JOHN, SANCHEZ,J.,AQUILES.

Fecha de Publicación: 16 de Noviembre de 2008.

Fecha Concesión Europea: 7 de Mayo de 2008.

Clasificación PCT:

C07H19/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › Compuestos que contienen un heterociclo que comparten un heteroátomo del ciclo con un radical sacárido; Nucleósidos; Mononucleótidos; Sus anhidro-derivados.
C07H21/02 C07H […] › C07H 21/00 Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos. › con ribosilo como radical sacárido.
C07H21/04 C07H 21/00 […] › con desoxirribosilo como radical sacárido.
C12P19/34 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

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